штамм bifidobacterium adolescentis г 7513, используемый для получения бифидосодержащих препаратов - эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания

Формула изобретения

Штамм Bifidobacterium addescens (коллекционный N 158 Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского), используемый для получения бифидосодержащих препаратов - эубиотиков и лечебно-диетических продуктов питания.

Описание изобретения к патенту

Штамм Bifidobacterium adolescentis Г7513, используемый для получения бифидосодержащих препаратов-эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бактерийных препаратов-эубиотиков и лечебно-диетических продуктов.

Препараты и продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии, широко используются для нормализации микрофлоры кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате перенесенных заболеваний, применения антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии, стрессовых воздействий, неблагоприятной экологической ситуации и пр.

За рубежом широко используют препараты-эубиотики и продукты лечебного питания на основе штаммов бифидобактерии видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve, B. infantis (патент 2336886, патент 2411008, Франция; патент 637297, Швейцария; патент 2134179, патент 2421066, ФРГ; патент 05227946, патент 04320642, Япония; патент 4645667, США).

Отечественные бифидосодержащие препараты-эубиотики и продукты лечебного питания разработаны на основе штаммов бифидобактерий видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis (атв. св-во 343588, патент 1347221, патент 849779, патент 863639).

Бифидофлора человека представлена пятью видами бифидобактерий: B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve и B. infantis. Каждый из видов характерен для определенной возрастной группы людей. Вид B. adolescentis появляется у грудных детей, находящихся на искусственном и смешанном вскармливании, чаще встречается у детей старшего возраста и с наибольшей частотой обнаруживается у взрослых людей, до 60%.

Для приготовления продуктов лечебно-диетического питания используется штамм бифидобактерии B. adolescentis MC-42 (патент 863639). Однако недостатком этого штамма является его длительное, 48 часов, выращивание для образования сгустка, что неприемлемо в условиях производства. Поэтому для ускорения процесса заквашивания молока штаммом используют стимуляторы роста - кукурузный экстракт, аскорбиновая кислота.

Целью настоящего изобретения является штамм Bifidobacterium adolescentis Г7513, способный активно размножаться и наращивать микробную массу в питательных средах, сквашивать молоко в короткие, 16 - 24 часов, сроки культивирования, и обладающий специфической активностью.

Штамм Bifidobacterium adolescentis Г7513 выделен из содержимого кишечника взрослого человека в 1975 году, хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 158 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского.

Культурально-морфологические признаки. Клетки представляют собой гр+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1 - 2-х концах, склонные к образованию скоплений. В печеночной среде Блаурокка кукурузно-лактозный штамм образует колонии в виде гвоздиков. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам. В жидких питательных средах растет по всему объему, кроме зоны аэробиоза.

Физиолого-биохимические признаки. Неподвижный, бесспоровый анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5 - 38^oC, pH питательных сред 7,2 - 7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислоты без образования газа, закисляя среду до pH 4,1 - 3,9. Ферментирует лактозу, арабинозу, ксилозу, целлобиозу, салицин, не утилизирует маннозу, инулин, маннит, сорбит. Сквашивает стерильное молоко к 16 - 24 часам с образованием плотного сгустка. Штамм Г7513 к первым суткам выращивания накапливает микробную массу на питательных средах разного состава, причем активнее на гидролизатно-молочной среде (табл. 1).

Штамм активно размножается к 16 - 24 часам в питательных средах и молоке, что является одним из существенных критериев его технологичности.

Штамм обладает специфической активностью. При культивировании на питательных средах продуцирует кислоты, наиболее активно - на кукурузно-лактозной (табл. 2).

Штамм подавляет рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов-шигелл Зонне, Флекснера, ЭПКП, стафилококка, протея (табл. 3).

Изучение спектра чувствительности к ряду антибактериальных препаратов выявило, что штамм устойчив к канамицину, гентамицину, мономицину, стрептомицину, полимиксину, чувствителен к тетрациклину, пенициллину, оксациллину, ампициллину.

Из приведенных данных следует, что штамм Г7513 наращивает микробную массу на питательных средах, используемых в производстве бактерийных препаратов в короткие, 16 - 24 часа, сроки культивирования, содержанием микробных клеток lg 9,3 - 8,3; сквашивает молоко к 16 - 24 часам; обладает кислотообразующей активностью и способностью подавлять рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры; обладает устойчивостью к ряду антибактериальных препаратов.

Способность штамма Г7513 наращивать микробную массу в питательных средах и сквашивать молоко в короткие сроки делает возможным использование его в составе бифидосодержащих препаратов-эубиотиков и продуктов лечебного питания.

Пример 1. Использование штамма Г7513 для получения бактерийного препарата.

Штамм Г7513 1-2-3-го пассажей культивируют при температуре 37,5 - 38^oC и pH среды 7,2 - 7,4 в течение 16 - 24 часов. К выращенной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8-10% - 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при температуре минус 40 - 45^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит 10^8-9 живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-132 ВС-94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 10⁷ живых клеток бифидобактерий.

Пример 2. Использование штамма Г7513 в составе закваски для приготовления кисломолочного бифидумбактерина.

2.1.1-й пассаж - Лиофилизированный штамм Г7513 вносят в среду выращивания (печеночную, кукурузно-лактозную, тиогликолевую) их расчета 0,1 г сухой биомассы (1 доза) на 100 мл среды. Посевы инкубируют 24 часа при температуре 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж - Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (1 л) - гидролизатно-молочную. Инкубируют 16 - 24 ч при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта - Выросшую закваску в объеме 3 - 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 часа при температуре 37,5 - 38^oC. В данном случае указанным количеством можно получить 20 - 30 л продукта.

2.2.1-й пассаж - Лиофилизированный штамм Г7513 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратных разведений в питательной среде и в объеме 10% посевного материала из разведений 10^-2 - 10^-4 переносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 24 часа при 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж - Полученную биомассу в количестве 5 - 10% вносят в гидролизатно-молочную среду (10 л) и инкубируют 16 - 24 часа при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта - Выросшую закваску в объеме 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 часа при 37,5 - 38^oC. В данном случае можно получить 200 л продукта.

Таким образом, предлагаемый штамм Г7513 является технологичным, поскольку активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования; сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами; обладает специфической активностью. Штамм можно рекомендовать в качестве производственного при получении препаратов-эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания.