микробиологическая среда для выращивания и диагностики бактерий рода listeria

Формула изобретения

1 Микробиологическая среда для выращивания и диагностики бактерий рода Listeria, включающая белковый компонент, натрия хлорид, воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу, а в качестве белкового компонента используют ферментативный гидролизат крови, полученный путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом, при этом используют мясную воду и агар микробиологический при следующем соотношении, мас.%: 3 Ферментативный гидролизат крови 7 0,8 - 1,2 3 Натрия хлорид 7 0,4 - 0,6 3 Мясная вода 7 96,3 - 96,7 3 Агар микробиологический 7 0,7 - 1,3 3 Глюкоза 7 0,8 - 1,2

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в пищевой промышленности, а именно к микробиологическим средам, для выращивания бактерий рода Listeria.

Известны различные белковые основы, использующиеся для приготовления питательных сред, основными компонентами которых являются мясные бульоны и белковые гидролизаты с различной степенью конверсии белка в смеси олигомеров и аминокислот (Белковые гидролизаты в производстве питательных сред. - М.: ВНИИ систем управления, 1990, 50 с.). Основным источником сырья для производства таких гидролизатов является мясо, рыба, боенская кровь, кормовые дрожжи, растительные отходы и т.д.

Наиболее близкой микробиологической средой является среда для выращивания бактерий рода Listeria, состоящая из белкового компонента, в качестве которого используют мясопептонный бульон, натрия хлорид и вода (патент Франции N 2671561, кл. C 12 Q 1/04).

Недостатком микробиологической среды является высокая стоимость, необходимость использования пищевого сырья и непостоянство аминокислотного состава, обуславливаемого различными источниками для получения как самого пептона, так и мясопептонного бульона, что приводит к неравномерному росту на таких средах различных микроорганизмов, особенно относящихся к роду Listeria.

Предлагаемая плотная микробиологическая среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов, белковую основу, входящую в среду, получают из непищевого сырья.

В состав плотной микробиологической среды входят следующие компоненты, мас.%:

Ферментативный гидролизат крови - 0,8 - 1,2

Натрия хлорид - 0,4 - 0,6

Мясная вода - 96,3 - 96,7

Глюкоза - 0,8 - 1,2

Агар микробиологический - 0,7 - 1,3

pH среды - 7,2 - 7,4

Ферментативный гидролизат крови получают путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом. Для ферментативного гидролиза используют остаточные пивные дрожжи рода Saccharomyces carlsberg 12 - 16 генерации в виде водной суспензии с содержанием сухих веществ 6 - 10% и содержанием физиологически активных клеток не менее 40%, при этом кровь крупного рогатого скота, отвечающая требованиям ОСТ 49-161-80 и содержащая 15 - 18% белка, определяемого по методу Лоури. Гидролиз проводят при температуре 55 - 58^oC в течение 4,5 ч в присутствии 4 об.% плазмолизирующего агента этанола, стабилизирующего реагента цитрата натрия - 5,5 об.% при содержании в смеси крови - 30 об.% и суспензии дрожжей - 40 об.% с последующей распылительной сумкой гидролизата крови. Выход ферментативного гидролизата крови при этом составлял до 40 - 50%. (См. табл. 1 и 2).

Ферментативный гидролизат характеризуется:

pH 1%-ного раствора - 6,6,

Содержание азота свободных аминогрупп - 1,5%

Содержание общего азота - 5,6%

Содержание хлорида натрия - 4,5%

Содержание золы - 7%

Пример 1. Для диагностики бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:

Агар микробиологический - 0,7

Ферментативный гидролизат крови - 1,2

Натрия хлорид - 0,6

Мясная вода - 96,7

Глюкоза - 0,8

pH среды - 7,2

Проводят посев согласно "Методическим рекомендациям по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред" (утв. МСХ СССР 30.12.82) из исходной взвеси листерий, стерильно готовят 10-кратное разведение путем последовательного переноса 0,5 мл культуры в 8 пробирок с 4,5 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из 4 последних разведений (10⁵ - 10⁸) по 0,1 мл микробной взвеси вносят в 3 подсушенные чашки с плотной питательной средой. При посевах взвесь культуры распределяют по поверхности среды шпателем.

Посевы инкубируют при температуре +30^oC. Учет проводят через 12 - 24 - 48 ч.

Пример 2. Для диагностики бактерий рода Listeria берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:

Агар микробиологический - 1

Ферментативный гидролизат крови - 1

Натрия хлорид - 0,5

Мясная вода - 96,5

Глюкоза - 1

pH среды - 7,3

Посев и учет роста Listeria monocytogenes проводили аналогично примеру 1.

Пример 3. Для выращивания бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:

Агар микробиологический - 1,3

Ферментативный гидролизат крови - 0,8

Натрия хлорид - 0,4

Мясная вода - 96,3

Глюкоза - 1,2

pH среды - 1,4

Посев и учет проводили аналогично примеру 1.