способ получения антибруцеллезной сыворотки
| Классы МПК: | A61K39/40 бактериальные |
| Автор(ы): | Драновская Е.А., Желудков М.М. |
| Патентообладатель(и): | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, им.Н.Ф.Гамалеи РАМН |
| Приоритеты: |
подача заявки:
1993-04-21 публикация патента:
10.01.1998 |
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицине и ветеринарии, и может быть использовано для получения антибруцеллезной сыворотки и производства диагностикумов. Для получения антибруцеллезной сыворотки используют бруцеллезный антиген, полученный химическим способом. 1,0 мг/мл антигена вводят внутривенно двукратно с последующим забором крови через 9 и 14 суток, что позволяет получить высокоактивную и специфическую антибруцеллезную сыворотку. 1 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
Способ получения антибруцеллезной сыворотки, включающий внутривенное введение кроликам бруцеллезного антигена с последующим забором крови и отделением сыворотки, отличающийся тем, что используют бруцеллезный антиген, выделенный из вакционного штамма B.abortus 19 путем обработки раствором щелочи и уксусной кислоты с последующим осаждением, вводят его в дозе 1 мг двукратно и забор крови осуществляют через 9 14 сут после второй инъекции.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицине и ветеринарии и может быть использовано для получения антибруцеллезной сыворотки и производства диагностикумов. Известен способ получения антибруцеллезной сыворотки, включающий введение кроликам живых бруцелл 4
109 микробных клеток/мл штамма B.abortus 19-BA внутривенно, однократно с последующим взятием крови через 14 сут. (ФС 42-315 ВС-90 на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный). Однако сыворотка, полученная известным способом недостаточно активна и специфична, и биологически опасна, так как для иммунизации используются живые бруцеллы. Предлагаемый способ направлен на повышение активности и специфичности антибруцеллезной сыворотки, а также на предотвращение биологической опасности при ее получении. Это достигается путем использования бруцеллезного антигена, полученного химическим способом. Пример 1. Бруцеллезный антиген для получения антибруцеллезной сыворотки готовят из вакцинного штамма B.abortus 19, путем обработки бактериальной суспензии в концентрации 200 млрд. м. кл. в 1 мл раствором 1N NaOH в течение 30 мин, последующей нейтрализации 2N уксусной кислотой и осаждением целевого продукта ацетоном (или спиртом) в соотношении 1:5 и последующим высушиванием осадка. 0,2 мг бруцеллезного антигена вводят внутривенно однократно кроликам весом 2,5 3,0 кг. Забор крови проводят через 9 сут. с последующим отделением сыворотки и добавлением к ней мертиолята или азида натрия и конечной концентрации 1: 10.000 в качестве консерванта. Полученную сыворотку исследуют на активность и специфичность. Активность сыворотки проверяют в реакции агглютинации (РА) и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Специфичность антибруцеллезной сыворотки проверяют с гетерологичными антигенами с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Пример 2. 1,0 мг/мл антигена вводят внутривенно, двукратно с интервалом 7 сут. и последующим забором крови через 9 и 14 сут. Полученная сыворотка испытана на активность и специфичность. Данные представлены в таблице. Как видно из таблицы, сыворотка, полученная по примеру 1 по активности слабее, но однако обладает более высокой специфичностью, по сравнению с прототипом. Изменение схемы иммунизации кроликов химически очищенным антигеном в более высоких дозах (пример 2) выявило повышение титра специфических антител в РА и РНГА, при сохранении их активности в течение 91-4 сут. после последней инъекции, по сравнению с примером 1. Таким образом, двукратное внутривенное введение в дозе 1,0 кг химически очищенного антигена позволило получить высокоактивную и специфическую антибруцеллезную сыворотку. Использование предлагаемого способа обеспечивает безопасную технологию получения высокоспецифичного и активного препарата.
