l-(-)-2-(аминокарбонил)-n-(4-амино-2,6-дихлорфенил-4[5,5- бис(4-фторфенил)пентил]-1-пиперазинацетамид, его фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль или гидрат, способ его получения и средство для хранения сердца донора

Формула изобретения

1. (L)-(-)-2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорфенил)-4- [5,5-бис(4-фторфенил)пентил] -1-пиперазинацетамид, его фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль или гидрат формулы I:



2. Способ получения (L)-(-)-2-(аминокарбонил)-N- (4-амино-2,6-дихлорфенил)-4-[5,5-бис(4-фторфенил)пентил] -1- пиперазинацетамида, отличающийся тем, что проводят циклизацию (-)-(S,S)- N¹,N²-бис(1-фенилэтил)-1,2-этандиамина с 2,3-дибромпропанамидом в реакционно-инертном растворителе в присутствии основания, полученное промежуточное соединение II



подвергают гидрогенизации в атмосфере водорода в среде низшего спирта и в присутствии катализатора гидрогенизации с получением (+)-2- аминокарбонилпипера зина формулы III



которое восстановительно N-алкилируют 5,5-бис(4-фторфенил)пентальдегидом в атмосфере водорода, в среде низшего спирта и в присутствии катализатора гидрогенизации, полученное производное пиперазина формулы IV



N-алкилируют соединение формулы V



где W означает отщепляемую группу в среде реакционно инертного растворителя, в присутствии основания, с последующим восстановлением полученного промежуточного соединения формулы VI



в присутствии восстанавливающего агента в реакционно-инертном растворителе.

3. Средство для хранения сердца донора, содержащее активный ингредиент и нейтральный носитель, отличающееся тем, что в качестве активного ингредиента оно содержит эффективное количество соединения по п.1.

Описание изобретения к патенту

Проблема рецидива во время восстановления кровообращения, т.е. восстановление прохождения крови через ткани и органы, ранее лишенные кровоснабжения (например, после тромбоза, в сердце после операций на открытом сердце или в сердце при трансплантации) это проблема дальнейшего перерождения этой ткани или органа лейкоцитами и их цитотоксическими продуктами.

Новизна данного изобретения состоит в том, что способ предупреждения или ограничения опасности повторной перфузии осуществляется путем применения специфических производных -N-арил-пиперазиналканамида, а также новый метод консервирования сердца для трансплантации при значительно удлиненном сроке хранения.

Соединения, подобные описанным, используют в данном изобретении; соединения, известные из патента США N 4766125, применялись в качестве средств для защиты сердца при повреждениях миокарда, вызванных ишемией, аноксией или гипоксией.

Такие соединения также были описаны в патенте США N 4880808 в качестве терапевтических средств, улучшающих сон и противодействующих расстройствам сна.

Соединениями настоящего изобретения являются (l)-(-)-2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорфенил) -4-[5,5-бис(4-фторфенил)-пентил] -1-пиперазиначетамид его фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, его гидратные формы, в частности, моно и полугидраты.

Кислотно-аддитивные соли можно получить при обработке основной формы подходящей кислотой. Этими кислотами могут быть неорганические кислоты, такие как: галоидводородные кислоты; хлористоводородная или бромистоводородная кислоты; серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и подобные им; или органические кислоты, например уксусная, пропионовая, гликолевая, 2-пропанкислота, 2-оксопропионовая, щавелевая, пропандикислота, бутандикислота, (Z)-2-бутендикислота, (Е)-2-бутендикислота, 2-гидроксибутанолкислота, 2,3-дигидроксибутанолдикислота, 2-гидрокси-1,2,3-пропанприкарбоновая кислота, метансульфокислота, этансульфокислота, безолсульфокислота, 4-метилбензолсульфокислота, циклогексансульфаминовая кислота, 2-гидроксибензойная кислота, 4-амино-2-оксибензойная кислота и т.д. Термин "кислотно-аддитивная соль" включает сольваты, которые заявленные соединения и их кислотно-аддитивные соли способны образовывать. Примерами таких сольватов являются гидраты, алкоголяты и т. п. Упомянутые соединения, представляющие наибольший интерес, совершенно новые и обладают уникальным сочетанием фармакологической избирательности и выгодными характеристиками, которые не разделялись с известными ранее соединениями N-арилпиперазиналканамида. Кроме того, будучи сильнодействующими, транспортные избирательные нуклеозидные ингибиторы не имеют Ca²⁺ антагонистических свойств. У них очень низкая острая и хроническая токсичность. Более того, эти соединения ни в какой мере не связывают белки плазмы, а следовательно, у них отличная биопригодность. Это значительно упрощает их применение в терапии, а так как они легко всасываются, их можно применять орально. В сочетании с вышеуказанными свойствами, такой способ назначения этих соединений делает их особенно пригодными для пролонгированного применения, например, в качестве профилактических средств, у пациентов с высокой степенью риска или в качестве поддерживающей терапии. Следующим преимуществом применения чистых энантиомерных соединений является тот факт, что количество назначенного лекарства можно снизить, из-за отсутствия нежелательных неактивных энантиомеров. Это является преимуществом, так как снижает вероятность передозировки и нежелательные побочные эффекты, такие как угнетение сердечной деятельности, вызванное передозировкой.

Новое соединение (l)-(-)-2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6- дихлорфенил)-4-/5,5-бис(4-фторфенил)пентил/-1-пиперазинацетамид, формулы (I)



можно получить, начиная с (-)-(S,S)-N"-N"-бис(1-фенил-этил)-1,2-этандиамина.

которое подвергают циклизации до производных пиперазина путем двойного N-алкилирования 2,3-дибромопропанамидом в инертном растворителе в присутствии основания. Подходящими растворителями являются ароматические углеводороды, например, бензол, метилбензол и аналогичные соединения; галогенизированные углеводороды, например, тетрохлорметан, хлоробензол и т.п. Подходящими основаниями могут быть карбонаты щелочных и щелочноземельных металлов, например, карбонат калия и натрия. Циклизацию выполняют при температуре обратного потока (флегмы) реактивной смеси.

Промежуточное соединение 1 превращается в промежуточное соединение 2 путем восстановления сложных эфиров в спирты действием водорода в атмосфере водорода в алканоле, например, в метаноле, этаноле; и в присутствии гидрирующего катализатора, такого как древесный уголь с палладиевым или платиновым покрытием и т.п.

Промежуточное соединение 2 восстанавливается N-алкилированием при реакции с 5,5-бис(4-фторфенил)пентальдегидом в атмосфере водорода в алканоле, например, в метаноле, этаноле; в присутствии гидрирующего катализатора, такого как древесный уголь с палладиевым или платиновым покрытием. С целью предотвращения взаимодействия получившихся продуктов реакции в смесь необходимо добавить катализаторный яд, например тиофен. Для увеличения скорости реакции реакционную смесь слегка нагревают, до температуры 40-60^oС.

С другой стороны, промежуточное соединение 3 можно приготовить N-алкилированием промежуточного соединения 2 5,5-бис(4-фторфенил)пентан-1-галидом или сульфонатом, имеющим формулу:



где

W гало, например, хлор или бром; или сульфонилокси-, например, метансульфонилокси, 4-метилбензолсульфонилокси и т.п. Указанное алкилирование может осуществляться в инертном растворителе, например, в алконоле метаноле, бутаноле, циклогексаноле: диполярном беспротонном растворителе, например, N, N-диметилформамиде, диметилсульфоксиде; в присутствии основания гидроксидов щелочных и щелочноземельных металлов; карбонатов, например, карбонатов натрия и калия или их гидроксидов.

Полученное таким образом промежуточное соединение 3 N-алкилировано реагентом формулы



где

W представляет реактивную группу, такую как хлор, бром и т.п. в инертном растворителе в присутствии основания



N-алкилирование осуществляется при перемешивании и нагревании реагирующих веществ, до температуры 70-100^oC. Подходящими растворителями являются метанол, этанол, бутанол, диполярные беспротонные растворители (N,N-диметилформамид, диметил сульфоксид), или смеси указанных растворителей. Подходящими основаниями являются гидроксиды щелочных и щелочноземельных металлов, карбонаты водорода, органические амины (N,N-диэтилэтанамид, пиридин, морфолин). Для ускорения реакции можно добавить иодид щелочного металла, например, иодид калия.

Промежуточное соединение 4 в конечном итоге превращается в новое соединение (l)-(-)-(1) в результате восстановления от нитро до амино.

Такая реакция восстановления может выполняться в инертном растворителе по известной технологии восстановления. Например, промежуточное соединение 4 перемешивается в атмосфере водорода в алканоле (метанола, этанола) в присутствии гидрирующего катализатора такого, как древесный уголь с платиновым и палладиевым покрытием никеля.

С другой стороны, вышеуказанная реакция восстановления может быть осуществлена обработкой промежуточного соединения 4 в таких реагентах как, сульфит натрия, сульфид натрия, сероводород натрия, хлорид титана (III).

Другой особенностью настоящего изобретения является способ хранения сердца, предназначенного для трансплантации, в кардиоплегическом растворе на холоде. Способ включает введение в этот кардиоплегический раствор такого количества соединения формулы I, которое сможет пролонгировать хранение сердца.

Особый интерес представляет тот факт, что применяя для хранения сердца, предназначенного для трансплантации, кардиоплегический раствор, содержащий соединение формулы I, можно сильно удлинить срок его хранения. В то время как сердце можно успешно хранить в течение 4-х часов, применяя обычный кардиологический раствор, не содержащий соединения формулы I на холоде; новизной изобретения является тот факт, что при хранении сердца в холодном кардиоплегическом растворе, содержащем соединения формулы I, можно удлинить срок хранения по меньшей мере до 24-х часов. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает способ хранения сердца, предназначенного для трансплантации в холодном кардиоплегическом растворе, упомянутом выше, где донорское сердце защищено определенным количеством соединения, имеющего формулу 1. Количество соединения формулы I, которое необходимо для защиты донорского сердца, лежит в диапазоне от 0,1 М 10 m М, в частности от 0,5 до 5 m М, более конкретно от 0,8 m М до 2 m М.

Пример 1. Приготовление (-)-2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорофенил)-4-[5,5- бис(4-фторофенил)-пентил]-1-пиперазинацетамида

Смесь, состоящую из 108,4 частей (-)-(S,S)-N¹-N²-бис(1-фенил-этил)-1,2-этандиамина; 93,8 частей 2,3-дибромпропанамида; 334,5 частей карбоната калия и 2958 частей метилбензола подвергали процессу дефлегмации в течение 24 часов с использованием водоотделителя. Реагентную смесь фильтровали в горячем виде, а осадок делили между водой и дихлорметаном. Органический слой сепарировали и соединяли с фильтратом. Все это высушивали, фильтровали и испаряли. Осадок очищали в колонне хроматографии (Lichroprep PP18; H₂O (0,5% CH₃COONH₄)/CH₃CN55: 45/. Растворитель для элюирования нужной фракции испаряли, выход конечного продукта составлял 20,8 частей (15,4%) I(S), 2А,4 (S)-1,4-бис(1-фенилэтил)-2-пиперазинкарбоксамида (промежуточное соединение 1). IV

Смесь, состоящую из 20,8 частей промежуточного соединения 1 и 198 частей метанола, гидрогенизировали при нормальном давлении и при комнатной температуре с двумя частями 10% катализатора палладия на древесном угле. После подсчета количества поглощенного водорода катализатор отфильтровывали, а фильтрат испаряли, выход конечного продукта составлял 7,8 частей (98,0%) (+)-2-пиперазинкарбоксамида (промежуточное соединение 2). V

Смесь, состоящую из 3,9 частей промежуточного продукта (2); 8,3 частей 5,5-бис(4-фторфенил)-пентальдегида, (VI), двух частей тиофена в метаноле (4% ) и 198 частей метанола, гидрогенезировали при нормальном давлении и температуре 50^oC с 2 частями 10% катализатора палладия на древесном угле. После подсчета количества поглощенного водорода катализатор отфильтровывали, а фильтрат испаряли. Остаток превращали в этандикарбонатную соль в этаноле. Соль подвергали повторной кристаллизации из смеси этанола и метанола. Продукт отфильтровывали просушивали, выход конечного продукта составлял 8,82 частей 61,6% ) (+)-4-[5,5-бис(4-фторфенил)пентил] 2-пиперазинкарбоксамид этандикарбоната (1:1); []²_D⁰ 10,02^o (концентрация равна 0,5% DMF) (промежуточное соединение 3). VII

8,82 части промежуточного соединения 3 поглощалось водой и превращалось в свободное основание с NH₄OH. Основание экстрагировалось с дихлорметаном (3х), комбинированные экстракты просушивали, фильтровали и испаряли. К остатку добавляли 6,5 частей 1-хлоро-N-(2,6-дихлоро-4-нитрофенил)ацетамида, 3,75 частей N,N,-диэтилэтанамина и 113 частей N,N,-диметилформамида. Все это перемешивали на протяжении 2-х суток при температуре 70^oC, а потом испаряли. Остаток разделяли между NaHCO₃ (5% воды) и дихлорметаном. Органический слой сепарировали, просушивали, фильтровали и испаряли. Остаток очищали в колонке хроматографии (силикагель, CH₂Cl₂/CH₂Cl₂ 1-10% CH₃OH) 70:30). Растворитель для элюирования необходимой фракции испаряли, а остаток превращали в гидрохлоридную соль в 2-пропаноле. Продукт отфильтровали и высушивали в условиях вакуума при температуре 50^oC, выход конечного продукта составлял 3,78 частей (30,5%) (-)-2-(аминокарбонил)-4-[5,5-бис- (4-фторофенил)пентил]-N-(2,6-дихлоро-4-нитрофенил)-1-пиперазин ацетамида моногидрохлорид; []²_D⁰ -18,47^o (концентрация равна 0,5% в CH₃OH) (промежуточное соединение 4). IX

Смесь, состоящую из 3,6 частей промежуточного соединения 4, одной части раствора тиофена в метаноле (4%), из 119 частей метанола, гидрогенезировали при нормальном давлении и комнатной температуре с двумя частями 10% катализатора палладия на древесном угле. После подсчета количества поглощенного водорода, катализатор отфильтровывали, а фильтрат испаряли. Остаток очищали в колонке хроматографии (Lichroprep Р-18; H₂O (0,5% CH₃COONH₄)/CH₃OH/CH₃CN 40: 20: 40). Нужная фракция концентрировалась, продукт подвергался кристаллизации из полученного водного раствора. Он отфильтровывался, высушивался в условиях вакуума при температуре 60^oC, выход конечного продукта составлял 1,49 частей (43,4% ) (l)-(-)-2-(аминокарбонил) -N-(4-амино-2,6-дихлорфенил)-4-[5,5 бис(4-фторфенил)-пентил] 1-пиперазинацетамида полугидрат; точка плавления 123,4^oC; []²_D⁰ -29,63^o (концентрация равна 0,5% в CH₃OH) (соединение 1-b).

Пример 2. Биологический пример.

Сердца собак останавливали либо гиперкалийной NIH кардиоплегией (группа I, п 6), либо аналогичной кардиоплегией после добавления 2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорофенил)-4[5,5- бис(4-фторофенил)пентил] -1-пиперазинацетамид (группа II, п 6). Сердца хранились на холоде в течение 24 часов при температуре 0-5^oC (ледяная вода) в кардиоплегическом растворе, а затем трансплантировали в гомологичную область. Собаке реципиенту вводили 0,1 мг/кг массы тела 2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорофенил)-4-[5,5- бис(4-фторофенил)пентил] -1-пиперазинацетамид до трансплантации. Проведенная биопсия показала на содержание в миокарде высокоэнергетических фосфатов (HEP). В группе I АТФ было 50% и CrP 18% контрольного содержания после 24 часов хранения. Во время 60-минутного восстановления кровоснабжения в легочно-сердечном канале (CPB) содержание HEP уменьшилось (p<0,05) и после трансплантации у всех животных развивалось "изменное сердце". После 24 часового хранения в группе II, АТФ 82% и CrP=28% контрольного (p<0,05 против группы I). После трансплантации содержание HEP оставалось стабильным, и все сердца можно было изъять из CPB без инотропной поддержки, кроме изопреналина. Таким образом, можно получить оптимальное сохранение миокарда при сочетании кардиоплегии и ингибирования транспортных нуклеозидов.

Пример 3. Примеры на состав.

1. Растворы для инъекций:

активный ингредиент^x 1 г

0,1 N хлористоводородная кислота 0,04 л

2-гидроксинпропил- -циклодекстрин 50 г

хлорид натрия 5,5 г

1 гидроксид натрия pH 3,7-3,9

вода 1 л

^x2-(аминокрабонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорофенил) -4-[5,5-бис(4фторофенил)-пентил]-1-пиперазинацетамид.

Способ приготовления.

50 г HP- b -циклодекстрина растворяли в 0,5 л воды. Непрерывно добавляли 0,04 л 0,1 N хлористоводородной кислоты и 1 г активного ингредиента. Все перемешивали до получения светлого раствора. После разбавления водой до 0,9 л, растворяли 5,5 частей хлорида натрия при перемешивании. Кислотность регулировали однонормальным гидроксидом натрия до pH=3,7-3,9. Раствор разбавляли водой до 1 л, выход конечного раствора для инъекций содержал 1 мг/мл активного ингредиента.

2. Растворы для орального применения.

активный ингредиент^x 1 г

2-гидроксипропил- b -циклодекстрин 50 г

0,1 хлористоводородная кислота 0,04 л

сорбит 70% 0,1 л

пропиленгликоль 0,1 л

двунатриевый этилендиаминтетраацетат 2 г

бензойная кислота 3 г

аромат жидкости для полоскания рта 1 г

IN гидроксид натрия pH=4,0

очищенная вода 1 л

^x2-(аминокарбонил)-N-(4-амино-2,6-дихлорфенил) -4-[5,5-бис(4-фторофенил)пентил]-1-пиперазинацетамид.

Способ приготовления.

50 г HP- b -циклодекстрина растворяли в 0,6 л воды. Добавляли непрерывно 0,04 л 0,1N хлористоводородной кислоты и 1 г активного ингредиента. Все перемешивали до получения прозрачного раствора. Растворяли при перемешивании 2 г Na₂ (ЕДТА), а затем добавляли 0,1 л 70% сорбита. К гомогенному раствору непрерывно добавляли раствор, состоящий из 3 г бензойной кислоты в 0,1 л. пропиленгликоля и 1 г аромата жидкости для полоскания рта. Кислотность регулирования IN гидроксидом натрия до pH 3,7-3,9. Раствор разбавляли водой до 1 л, выход конечного продукта раствор для орального применения содержал 1 мг/мл активного ингредиента.