способ определения показаний для лечения больных бронхиальной астмой

Формула изобретения

Способ определения показаний для лечения больных бронхиальной астмой путем клинического обследования больных, отличающийся тем, что производят забор крови, получают фракцию лейкоцитов и плазмы, в том и в другом субстрате проводят определение химилюминесцентных показателей генерации активных форм кислорода в системе с люминолом и индуцируемых двуокисью кремния до и после воздействия 8% СО₂ и 20% СО₂, рассчитывают их изменение от исходного во всех 8 показателях и снижение до 30% принимают за 1, 30 60% - за 2, а более 60% за 3, и при общей сумме 22 24 определяют показания к гиперкапнотерапии, а при сумме 19 и менее определяют низкую эффективность гиперкапнотерапии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, и касается определения показаний для лечения гиперкапнотерапией больных бронхиальной астмой.

Известен способ выработки показаний для лечения больных бронхиальной астмой с помощью гиперкапнической смеси, принятый за прототип, который заключается в том, что на основании возраста больного /10 14 лет/, его желания заниматься данным способом лечения и тяжести заболевания определяют возможность лечения гиперкапнической смесью.

Однако способ не поддается количественной оценке, так как он субъективен. Нет точности определения показаний.

Цель изобретения повышение точности за счет введения объективного количественного показателя.

Цель достигается тем, что производят забор крови, получают фракцию лейкоцитов и плазму, в лейкоцитах, взвешенных в забуференном физиологическом растворе и в собственной плазме, методом хемилюминесценции определяют хемилюминесцентные показания генерации активных форм кислорода в системе с люминолом /базальный хемилюминесцентный показатель/ и индуцируемый двуокисью кремния /стимулированный хемилюминесцентный показатель/ до и после воздействия 8% CO₂ и 20% CO₂, рассчитывают их изменения и снижение до 30% принимают за 1, от 30 до 60% за 2, а больше 60% за 3 во всех 8 показателей, и при общей сумме от 22 до 24 показана гиперкапнотерапия, а 19 и менее свидетельствует о потенционально низкой эффективности гиперкапнотерапии.

Способ осуществляется следующим образом.

Лейкоциты выделяли из 8 10 мл гепаринизированной крови до полученной из кубитальной вены, собранной в пробирку l 165 мм, d 11 12 мм. Отстаиванием крови в течение 1,5 2,0 ч при 4^oC и/или/ центрифугированием при 500 об/мин /60g/ 7 10 мин вызывали ее расслоение на верхний плазменный слой, нижний эритроцитарный и промежуточный в виде белосоватой лейкоцитарной пленки. Лейкоцитарную пленку и часть плазмы переносят в центрифужную конусообразную пробирку и освобождают от примеси эритроцитов посредством осмолизиса с помощью дистиллированной воды в течение 10 с, восстанавливают изоосмолярность путем добавления 3,6% раствора натрия хлорида из расчета 1 мл на 3 мл воды, и снова центрифугируют при 1000 об/мин /200g/ 10 мин. Образующийся осадок отмывают физиологическим /0,9%/ раствором натрия хлорида pH 7,35. Объем полученной лейкомассы доводили до 1 мл добавлением забуференного физиологического раствора натрия хлорида /ЗБФР/ с pH 7,35, состоящего из 7,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида и 2,5 мл фосфатно-щелочного буфера с pH 7,35 или собственной плазмы. Подсчитывали концентрацию лейкоцитов в лейкомассе и доводили ее до 2500 клеток в 1 мкл.

Генерацию активных форм кислорода лейкопитания крови исследовали методом люминолозависимой хемилюминесценции /ХЛ/. Измерение проводилось в люминометре ЛКБ-Валлак, 1251 /Швеция/ при 36,9^oC, в стандартном объеме взвеси лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /0,2 мл/ или в собственной плазме /0,2 мл/ со стандартной их концентрацией /2,510³ лейкоцитов в 1 мкл, их общее количество 510⁵/ при добавлении 20 мкл насыщенного изоосмолярного водного раствора люминола, концентрацией 10^-4M, pH 7,35. Регистрировали ХЛ до выхода ее на максимум, что соответствовало базальной ХЛ. На максимуме ХЛ добавляли двуокись кремния /0,1 мл 1%/ и снова регистрировали ХЛ до выхода на второй максимум, что соответствует стимулированной ХЛ. Рассчитывали ХЛ показатели генерации активных форм кислорода лейкоцитами /базальный ПИХЛб и стимулированный ПИХЛс/ по формуле:



Для изучения влияния CO₂ на генерацию активных форм кислорода в основных опытах в пробирки l 35 мм, d 6 мм вводили 0,2 мл взвеси лейкоцитов в ЗБФР или в собственной плазме; пробирки помещали в минибарокамеру, находившуюся в термостате при 36,9^oC. Из минибарокамеры под контролем монометра откачивали воздух, разрежая его на 88,4 мм рт.ст. Вместо удаленного воздуха вводили CO₂, также под контролем монометра до давления, равного 58,4 мм рт.ст. При этом в минибарокамере оставалось остаточное разрежение воздуха, равное 30 мм рт.ст. Общая концентрация CO₂ в минибарокамере таким образом, составила 8% В другом случае из минибарокамеры разрежали воздух на 176 мм рт.ст. Вместо удаленного воздуха вводили CO₂ до давления, равного 146 мм рт.ст. При этом в минибарокамере оставалось остаточное разрежение воздуха, также равное 30 мм рт.ст. Общая концентрация CO₂ в минибарокамере составила 20% Для сравнения в минибарокамеру с лейкоцитарной взвесью в ЗБФР pH 7,35 или собственной плазмой после откачивания воздуха вместо CO₂ возвращали тот же воздух до 146 мм рт.ст. Результаты предварительных исследований показали, что 8% CO₂ и 20% CO₂ при инкубации с ЗБФР вызывают смещение pH от исходного 7,35 до 7,30, а это, в свою очередь, несколько снижает ХЛ. Поэтому при окончательном расчете показателей влияния CO₂ на генерацию активных форм кислорода вносили поправку на снижение ХЛ под влиянием смещенного pH. Для определения необходимой величины поправки в каждом исследовании проводили специальный опыт; для этого лейкоциты, взвешенные в ЗБФР, с pH 7,30 в тех же объемах и концентрациях, как в предыдущих опытах помещали в минибарокамеру, откачивали воздух до 176 мм рт.ст. и вместо CO₂ возвращали тот же воздух до 146 мм рт.ст. Потребность в поправке в опытах c собственной плазмой отпадала, так как 8% CO₂ и 20% CO₂ не влияют на pH плазмы. Опытные и контрольные пробы инкубировали 20 мин, после чего их извлекали и измеряли ПИХЛб и ПИХЛc. О влиянии CO₂ на генерацию активных форм кислорода лейкоцитами судили по изменению ПИХЛб и ПИХЛc. В случае с лейкоцитами, взвешенными в ЗБФР, вначале рассчитывали изменение ПИХЛб и ПИХЛc под влиянием сдвига pH до 7,30 /₁/ по формуле



Потом рассчитывали изменение ПИХЛб и ПИХЛc лейкоцитов под совместным влиянием молекул CO₂ /₂/ и смещенного ими pH до 7,30 по формуле



Наконец рассчитывали изменение ПИХЛб и ПИХЛc лейкоцитов, отражающее влияние только CO₂ / 8% и 20%/ по формуле

₃= ₂-₁.

В случае с лейкоцитами, взвешенными в собственной плазме, рассчитывали изменение ПИХЛб и ПИХЛс лейкоцитов под влиянием 8 и 20% CO₂ по формуле



Таким образом, рассчитывали 8 показателей: 1/ ПИХЛб лейкоцитов, взвешенных в ЗБФР до и после воздействия 8% CO₂; 2/ ПИХЛс лейкоцитов, взвешенных в ЗБФР, до и после воздействия 8% CO₂; 3/ ПИХЛб лейкоцитов, взвешенных в ЗБФР до и после воздействия 20% CO₂; 4/ ПИХЛс лейкоцитов, взвешенных в ЗБФР до и после воздействия 20% CO₂; 5/ ПИХЛб лейкоцитов, взвешенных в собственной плазме до и после воздействия 8% CO₂; 6/ ПИХЛс лейкоцитов, взвешенных в собственной плазме до и после воздействия 8% CO₂; 7/ ПИХЛб лейкоцитов, взвешенных в собственной плазме до и после воздействия 20% CO₂; 8/ ПИХЛс лейкоцитов, взвешенных в собственной плазме до и после воздействия 20% CO₂. Каждое изменение ПИХЛб и ПИХЛс под влиянием CO₂ оценивали по следующей системе: при снижении ПИХЛб и ПИХЛс до 30% принимали за 1, от 30 до 60 за 2 и больше 60% за 3. Общая их сумма от 22 до 24 является показанием к применении гиперкапнотерапии. Если сумма составила 19 или менее или один из показателей повышался под влиянием CO₂, то это свидетельствует о потенциально низкой эффективности гиперкаптотерапии.

Способ иллюстрируется следующими примерами и табл. 1 и 2.

Пример 1. Больной Алеша Д. 13 лет, и/б 10953/1083, наблюдается в клинике детских болезней ММА им. И.М. Сеченова с сентября 1992 г. с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая форма, средней тяжести, вне обострения. Поллиноз. Аллергическая ринопатия. Из анамеза известно, что с 2-х летнего возраста часто болел ОРВИ. В 5 лет перенес пневмонию, в 6 лет повторную пневмонию. В 7 лет появился обструктивный синдром на фоне ОРВИ, лечился амбулаторно эуфиллином. Первый приступ удушья появился в 10 лет на фоне ОРВИ, купировался эуфиллином. Приступы повторялись до 2-3 раз в год после ОРВИ. В 12 лет, осенью, появился тяжелый приступ удушья на фоне ОРВИ, который не купировался в течение 4-х дней. Принимал беротек, эуфиллин, эфедрин. В это же время впервые обратился в клинику, где был обучен методике волевого управления дыханием /основанного на поверхностном дыхании и накаплении CO₂ в крови/. Объективно: деформированная грудная клетка /бочкообразная/. Перкуторно над легкими коробчатый оттенок. Дыхание жесткое. Хрипов нет. ЧД 18 в мин. Тоны сердца ритмичные. Пульс 80 уд/мин, АД 120/70 мм рт.ст. Общ. ан. крови: Э 4,010⁶, Л -5,310³, эозинофилы 8% СОЭ 2 мм/ч. 18.05.1993 г. у больного взята кровь. Выделена лейкоцитарная масса и плазма. Определен ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФП pH 7,35 /116,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /111,1 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 8% CO₂ /13,6 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 83,5% 3/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /9,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 86,8% - 3/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /167,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /148,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 8% CO₂ /27,57 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 72,1%-3/, ПИХЛс в ЗБФР после воздействия 20% CO₂ /16,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 78,9 3/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме /до воздействия CO₂ /190,9 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 8% CO₂ /62,1 мВ/с10⁶ лейкоцитов; 67,5% 3/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 20% CO₂ /30,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 83,9 3/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме до воздействия CO₂ /187,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов после воздействия 8% CO₂ /58,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 68,8% 3/, ПИХЛс лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /34,2 мВ/с10 лейкоцитов; D 81,9% 3/. Общая сумма, таким образом, составила 24, в связи с чем больному показана гиперкапнотерапия. Больной начал заниматься по методу волевого управления дыханием, перенес хорошо. Самочувствие оставалось хорошим, приступов удушья не было. 02.06.93 у больного ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 снизился до 74,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов, а ПИХЛс 117,9 мВ/с10⁶ лейкоцитов. В последующие 5 мес состояние оставалось стабильно удовлетворительным. Приступов удушья не было. ОРВИ не болел. Лекарства не принимал. Продолжает заниматься волевым управлением дыхания.

Пример 2. Больной Сергей Х. 12 лет, и/б 4779/483, наблюдается в клинике детских болезней ММА им. И.М.Сеченова с ноября 1992 с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая форма, средней тяжести, вне обострения. Из анамнеза известно, что болен с 7 лет, когда впервые перенес острый бронхит с обструктивным синдромом. Обострение заболевания отмечалось весной и осенью. Приступы удушья появились в 11 лет, после ОРВИ. В это же время обратился в клинику детских болезней ММА им. И.М.Сеченова, где был поставлен диагноз бронхиальная астма и впервые проведен курс гиперкапнической гипоксической стимуляции. Объективно: правильного телесложения, в легких дыхание жесткое, хрипов нет. ЧД 18 в мин. Тоны сердца ясные, ритмичные, пульс 84 в мин. Общ. ан. крови: Э-4,310⁶, Л-5,110³, эозинофилы-5% СОЭ-9 мм/ч. 03.06.93 у больного взята кровь. Выделена лейкоцитарная масса и плазма. Определен ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /707,3 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /707,3 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 8% CO₂ /165,9 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D₃ 75,8% 3/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /44,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 92,7% - 3/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /1565,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /910,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов после воздействия 8% CO₂/299,5 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 39,2% 2/, ПИХЛс лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /149,5 мВ/с10⁶ лейкоцитов/ ₃ 48,7% 2/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме до воздействия CO₂ /1723,9 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 8% CO₂ /151,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; 91,2% 3/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /197,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 88,6% 3/, ПИХЛс лейкоцитов до воздействия CO₂ /1676,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс после воздействия 8% CO₂ /148,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 91,2% 3/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 20% CO₂ /200,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 88,0% 3/. Общая сумма, таким образом, составила 22, в связи с чем больному показана гиперкапнотерапия. Больному проведено три курса гиперкаптической гипоксической стимуляции /гиперкапнотерапия/, которая проводилась методом возвратного дыхания в полиэтиловом мешке, емкостью 5 л. Ребенок дышал в мешок в течение 5 мин 4 раза с 5 минутными перерывами 1-2 раза в день 10 сеансов. Состояние больного значительно улучшилось. Во время лечения не было приступов удушья. Не болел ОРВИ. После лечения ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 снизилось до 104,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов, а ПИХЛс 203,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов. В последующие 5 мес состояние оставалось удовлетворительным. Лекарственные препараты не применял. Активно занимается спортом.

Пример 3. Больной Миша С. 12 лет, и/б 12564/135, наблюдается в клинике детских болезней ММА им. И.М.Сеченова с января 1993г. с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая форма, средней тяжести, вне обострения. Поллиноз. Из анамнеза известно, что в 2-х летнем возрасте перенес ОРВИ, осложнившийся бронхообструктивным синдромом. Первый приступ удушья в 5 лет на фоне ОРВИ. В дальнейшем приступы провоцировали физическая нагрузка, шерсть животных, домашняя пыль, резкие запахи. Обострения возникли 4-5 раз в году, чаще весной и осенью в виде конъюнктивита, ринита /поллиноз/. Приступы купировались приемом эуфиллина, супрастина. Получал курсами интал, без клинического эффекта. Объективно: пониженного питания, деформированной грудной клеткой. В легких дыхание жесткое, непостоянные сухие рассеянные хрипы. Сердечная деятельность не нарушена. АД 110/60 мм рт.ст. Живот мягкий безболезненный. Общ. ан. крови: Э-4,610⁶, Л-6,610³, зозинофилы-4% СОЭ-6 мм/ч. 06.05.93 у больного взята кровь. Выделена лейкоцитарная масса и плазма. Определен ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /138,1 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /138,1 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб после воздействия 8% CO₂ /38,8 мВ/с10₆ лейкоцитов; D₃ 45,9% 2/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 20% CO₂ /11,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 58,4% 2/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /209,6 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /129,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 8% CO₂ /38,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 43,7% 2/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 20% CO₂ /13,9 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 55,3% 2/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме до воздействия CO₂ /258,3 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 8% CO₂ /203,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; 21,1% 1/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 20% СО₂ /80,6 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 58,8% 2/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме до воздействия CO₂ /383,3 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме воздействия 8% CO₂ /225,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 41,3% - 2/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 20% CO₂ /91,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 76,2 3/. Общая сумма, таким образом, составила 16, что свидетельствует о потенциально низкой эффективности гиперкапнотерапии. Больному был проведен курс гиперкапнической гипоксической стимуляции, однако течение болезни оставалось прежним, приступы повторялись, доза лекарственных препаратов не уменьшалась. После проведенного лечения увеличился как ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР с pH 7,35 o 1118,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов, так и ПИХЛс до 1577,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов.

Пример 4. Больной Роман Т. 10 лет, и/б 15/3, наблюдается в клинике детских болезней ММА им. И.М.Сеченова с сентября 1992г. с диагнозом: бронхиальная астма, смешанная, средней тяжести, вне обострения. Из анамнеза известно, что с 2-х лет часто болел ОРВИ, с 5-ти лет повторными ангинами. В 6 лет на фоне ОРВИ впервые присоединился обструктивный синдром. В дальнейшем обструктивные бронхиты повторялись до 4-5 раз в год, сопровождались высокой температурой, вазомоторным ринитом. Неоднократно получал лечение в стационарных условиях. Первый приступ удушья зарегистрирован в 9 лет, на фоне ОРВИ. В дальнейшем приступы провоцировали физическая нагрузка, контакт с домашней и библиотечной пылью. Приступы купировались приемом эуфиллина. Неоднократно получал санаторно-курортное лечение, 4-х месячный курс кетотифена без эффекта. Объективно: бочкообразно деформированная грудная клетка. Перкуторно над легкими коробочный оттенок. Дыхание жесткое, хрипов нет.

ЧД= 16 в мин. Общ. ан. крови: Э-4,810⁶, Л-9,910³, эозинофилы-15% СОЭ-5 мм/ч. 06.05.93 у больного взята кровь. Выделена лейкоцитарная масса и плазма. Определен ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /149,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /133,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 8% CO₂ /110,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D₃ 15,5% 1/, ПИХЛб лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 20% CO₂ /16,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 78,4% 3/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,35 /138,0 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР pH 7,30 /132,6 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в ЗБФР после воздействия 8% CO₂ /117,8 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 10,7% 1/, ПИХЛс лейкоцитов в ВФР после воздействия 20% CO₂ /25,2 мВ/с10⁶ лейкоцитов; ₃ 77,8% 3/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме до воздействия CO₂ /189,1 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛб лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 8% CO₂ /147,3 мВ/с10⁶ лейкоцитов; 22,1% 1/, ПИХЛб лейкоцитов после воздействия 20% CO₂ /84,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 55,0% - 3/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме после воздействия CO₂ /242,5 мВ/с10⁶ лейкоцитов/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме после воздействия плазме воздействия 8% CO₂ /169,7 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 30,0% 2/, ПИХЛс лейкоцитов в собственной плазме после воздействия 20% CO₂ /77,4 мВ/с10⁶ лейкоцитов; D 68,1% 3/. Общая сумма таким образом составила 16, что свидетельствует о низкой эффективности гиперкапнотерапии. Больному была проведена гиперкапническая гипоксическая стимуляция. Однако течение болезни носило стабильный характер. Приступы удушья по тяжести и частоте обострения оставались прежними, доза приема лекарства не изменилась.

Предложенный способ может быть использован в специализированных стационарах, готов к использованию. Способ осуществляется в течение 1 2 ч.