способ получения бруцеллезного антигена

Формула изобретения

Способ получения бруцеллезного антигена, включающий выращивание бруцелл, их отмывание, экстракцию антигена, обработку щелочью, осаждение целевого продукта ацетоном и высушивание, отличающийся тем, что используют вакцинный штамм B. abortus 19, экстракцию осуществляют обработкой промытых клеток щелочью, нейтрализуют уксусной кислотой, а осаждение целевого продукта проводят ацетоном или спиртом.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к медицине и ветеринарии и может быть использовано для производства бруцеллезных диагностикумов.

Известен способ получения бруцеллезного антигена, используемый для диагностики бруцеллеза, включающий культивирование бруцелл, отмывание микробных клеток, обработку фенолом и окрашивание аналог (ВФС 42-62 Вс-86 на диагностикум бруцеллезный жидкий для реакции агглютинации).

Однако антиген, полученный известным способом, используется только для постановки реакции агглютинации, с помощью которой обнаруживают агглютинины в сыворотке больных бруцеллезом людей и животных.

Известен также способ получения бруцеллезного антигена, включающий выращивание бруцелл, отмывку микробных клеток, обработку их ацетоном, эфиром, высушивание в вакуум-эксикаторе, экстракцию трихлоруксусной кислотой (ТХУ), высушивание, обработку щелочью, осаждение ацетоном, высушивание. Антиген, полученный данным способом, используют для выявления гемагглютининов в сыворотках больных бруцеллезом людей и животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) прототипа (ФС 42-315 ВС-90г на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный).

Однако бруцеллезный антиген, полученный по данному способу, имеет недостатки при его получении: низкий выход антигена; используют вирулентный штамм В. abortus 99 и/или вакцинный штамм В. abortu 19-ВА, который не стабилен, подвержен диссоциации и имеет неполноценную антигенную структуру; сложная технология; используют большие объемы взрывоопасных ацетона (до 10 л) и эфира, и время обработки биомассы составляет 22 сут. Время для получения бруцеллезного антигена от момента культивирования составляет 36 сут.

Предлагаемый способ позволяет повысить выход антигена, снизить биологическую опасность и/или избежать использования штамма с неполноценной антигенной структурой, упростить технологию, сократить время получения антигена.

Это достигается использованием вакцинного штамма В. abortus 19, исключением из технологии обработки микробных клеток эфиром, ТХУ и 10- кратным уменьшением количества ацетона.

Пример. Бруцеллы вакцинного штамма В. abortus 19 выращивают в течение 48 ч, смывают микробные клетки (м. кл.) нейтральным физиологическим раствором (НФГ), центрифугируют, промывают трехкратно осадок с помощью НФР при центрифугировании, ресуспендируют осадок до получения суспензии, содержащей 200 млрд. м. кл. в 1 мл, добавляют равный объем раствора 1N NaOH при постоянном перемешивании в течение 30 мин, нейтрализуют 2N уксусной кислотой, проводят осаждение антигена ацетоном и/или этиловым спиртом в соотношении объемов 1: 5, осадок отделяют центрифугированием, промывают двукратно ацетоном и/или этиловым спиртом и сушат в вакуум эксикаторе и/или лиофилизируют.

В табл. 1 представлена сравнительная характеристика предлагаемого способа и известного способа прототипа.

В табл. 2 дана сравнительная иммунохимическая характеристика и основной состав бруцеллезных антигенов, полученных предлагаемым способом и известным (прототип).

Предлагаемый способ позволяет повысить выход бруцеллезного антигена в 3 раза, ускорить процесс получения антигена в 5 раз (с 36 сут до 7 сут), получать полноценный антиген белковолипополисахаридной природы, который может быть использован не только как антиген-липополисахарид в прототипе для постановки РНГА и РНАт, но и в РАГА и для получения высоко активной и специфичной сыворотки, а также снизить использование ацетона с 7-10 л до 500-700 мл и исключить применение эфира и ТХУ.