способ инактивации вирусной контаминации в препарате человеческого лейкоцитарного интерферона

Формула изобретения

Способ инактивации вирусной контаминации в препарате человеческого лейкоцитарного интерферона путем воздействия на интерферон инактивирующим фактором, отличающийся тем, что сухой препарат интерферона дополнительно подвергают двукратной обработке гамма-лучами в суммарной дозе 15 25 кГр.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства человеческого лейкоцитарного интерферона.

Современные требования, предъявляемые к препарату человеческого лейкоцитарного интерферона, включают безопасность препарата в отношении потенциальной контаминации лимфотропными вирусами.

Известные способы инактивации лимфотропных вирусов воздействием высокой температуры, хлороформом, этиловым спиртом, электрическим полем и веществами растительного происхождения нетехнологичны в условиях промышленного производства, ненадежны, а также ведут к инактивации целевого продукта.

Прототипом изобретения является способ инактивации вирусных контаминаций в человеческом лейкоцитарном интерфероне путем его подкисления до pH 2,2 2,4 с помощью 20%-ной NCl и выдерживания в течение 7 10 дней при температуре 4 - 6^oC. Такая процедура позволяет полностью инактивировать остаточный индуктор, используемый в технологическом цикле производства интерферона.

Однако, кислотная инактивация не гарантирует полного устранения потенциальной контаминации препарата лимфотропными вирусами донорской крови, т.к. под воздействием кислых значений pH разрушается только оболочка вируса, а его РНК сохраняется и при определенных условиях может проявить свою инфекционность.

Цель изобретения повышение надежности инактивации возможных вирусов - контаминантов в препаратах человеческого лейкоцитарного интерферона.

С этой целью сухие препараты человеческого лейкоцитарного интерферона дополнительно подвергают двукратной обработке гамма-лучами в суммарной дозе 15 25 кГр.

Сравнительный анализ заявляемого способа и прототипа показывает, что новым в способе является дополнительное воздействие на препарат интерфероне гамма-облучения по разработанному авторами режиму облучения.

При использовании гамма-облучения происходит разрыв и повреждение РНК вирусов, что обеспечивает полную инактивацию возможных вирусных контаминаций, а следовательно, полную безопасность интерферона.

В настоящее время радиационная стерилизация широко используется при впуске полимерных медицинских изделий для устранения их микробной обсемененности. Для обработки лекарственных препаратов этот метод применяется в ограниченном объеме, а при стерилизации готовых инъекционных растворов практически не применяется, поскольку облучение приводит к потере активности препаратов.

Заявляемый способ, при котором облучение препарата интерферона осуществляется двукратно в суммарной дозе 15 25 кГр не приводит к ухудшению качества препарата.

Приведенные отличительные признаки в литературе не описаны, а их влияние на достижение технического результата не следует из известного уровня техники, т.е. заявляемый способ соответствует критериям "Новизна" и "Изобретательский уровень".

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Инактивация вирусных контаминаций в препаратах человеческого лейкоцитарного интерферона.

Препарат интерферона готовят по известному способу, основанному на биосинтезе интерферона вирусиндуцированными лейкоцитами. После окончания стадии биосинтеза и удаления клеток-продуцентов проводят инактивацию остаточного вируса-индуктора путем подкисления интерферона до pH 2,2 2,4 c помощью 20% -ной HCl и выдерживанием в течение 7 10 дней; при температуре 4 - 6^oC. Затем препарат разливают в ампулы по 1 мл и подвергают сублимационному высушиванию, после чего ампулы запаивают.

Запаянные ампулы с сухим препаратом укладывают в картонные кассеты вместимостью по 500 ампул. Кассеты с ампулами подвергают облучению на гамма-установке РДС-60 в суммарной дозе 20 кГр, по 10 кГр с интервалом 12 24 ч. Затем препарат подвергается предусмотренным регламентом производства контролю на противовирусную активность, вирусологическую стерильность, бактериологическую стерильность, токсичность и безвредность. Препарат, прошедший двукратную обработку гамма-лучами, соответствует всем требованиям, предъявляемым к человеческому лейкоцитарному интерферону, а именно вирусологически и бактериологически стерилен, нетоксичен и безвреден, противовирусная активность составляет 1000 МЕ/мл.

Пример 2. Для подтверждения эффективности заявляемого способа исследуют препарат интерферона, в который введен индикаторный вирус (аллантоисный вирус болезни Ньюкасл -ВБН) с исходным титром 10⁹ ЦПД/50. Известно, что данный вирус наиболее устойчив к гамма-облучению и выдерживает однократную дозу облучения в 35-40 кГр.

После лиофильного высушивания интерферона в ампулах остаточная инфекционная активность вируса составила 10⁷ ЦПД/50 инфекционных вирусных частиц в 1 мл препарате, что во много раз превышает их возможную концентрацию в обычных препаратах интерферона.

Ампулы с препаратом, содержащим индикаторный вирус, подвергают гамма-облучению в суммарной дозе 15 25 кГр, с интервалом 12 24 ч. Через 24 ч после обработки препарат контролируют на остаточную активность вируса-индикатора и биологическую активность интерферона.

Результаты исследования свидетельствуют о полной инактивации вируса-индуктора и сохранении биологической активности интерферона (табл. 1, опыты N 1 7). При уменьшении дозы гамма-облучения полной инактивации индикаторного вируса не наблюдалось (табл. 1, опыты 8, 9).

Пример 3. Ампулы с сухим препаратом интерферона, содержащим индикаторный вирус в дозе 10⁷ ЦПД/50 инфекционных частиц в 1 мл препарата, подвергают однократной обработке гамма-лучами в дозе от 5 до 35 кГр. Через 24 ч после обработки препарат контролируют на остаточную активность вируса-индуктора и биологическую активность интерферона.

Результаты контроля свидетельствуют о недостаточной инактивации вируса-индуктора при однократной обработке препарата гамма-лучами (табл. 2).

Таким образом, приведенные примеры показывают, что двукратное гамма-облучение препарата интерферона в суммарной дозе 15 25 кГр полностью инактивирует РНК-вирусов, что обеспечивает полную безопасность препаратов интерферона. Заявляемый способ не влияет на качество препаратов интерферона.