способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии дифтерии

Формула изобретения

Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии дифтерии, отличающийся тем, что для получения исходного сырья отбирают лиц с титрами дифтерийного антитоксина в крови не ниже 1 320 (РПГА), ревакцинируют их дифтерийным анатоксином и через 25 40 дней берут кровь у доноров с титрами антител к дифтерийному токсину не ниже 1 5000 и выше с последующим выделением конечного продукта по методу Кона.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунопрофилактики и иммунотерапии дифтерии.

В настоящее время специфическая терапия больных дифтерией осуществляется с помощью противодифтерийной лечебной гетерологичной сыворотки, частично очищенной от балластных белков. Введение гетерологичного антитоксина сопряжено с риском развития серьезных осложнений и зачастую вызывает возникновение побочных реакций на чужеродный белок (анафилактический шок, сывороточная болезнь и т.д.). Кроме того, известно, что антитоксин человека обладает большей клинической эффективностью по сравнению с антитоксином животных.

Для серопрофилактики дифтерии только в исключительных случаях используют однократное введение 2000 5000 АЕ лечебной сыворотки лицам, имевшим контакт с дифтерийными больными. Коллективная пассивная профилактика дифтерии лиц с низким уровнем противодифтерийных антител, находившихся в контакте с больными, не проводится в связи с риском развития осложнений.

Активная иммунизация вакциной не может защитить в ближайшие 2 3 недели после выявления заболевших, лиц, находившихся в контакте. В таких случаях для серопрофилактики дифтерии желательно введение очищенного гомологичного противодифтерийного иммуноглобулина, который в настоящее время не выпускается.

Эксперты ВОЗ с 1975 г. предложили максимально сократить использование гетерологичной сыворотки.

Известен способ получения противодифтерийной сыворотки 10000 V1 Пастер (фирма Мерье, Франция). В состав препарата входят специальные компоненты, нейтрализующие у больного токсин, вырабатываемый Corynebacterium Diphteriae. Препарат используют для серопрофилактики и лечения дифтерии при подкожном и внутримышечном введении. Однако риск возникновения побочных реакций на гетерологичный препарат сохраняется.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения противодифтерийной сыворотки Диаферм-3 из крови иммунизированных лошадей. Способ предусматривает очистку с помощью сорбентов и ферментативного гидролиза лошадиной сыворотки (схема 1). Сыворотка имеет 2000 5000 АЕ в 1 мл. Препарат Диаферм-3 обладает всеми недостатками, перечисленными выше, присущими гетерологичным и недостаточно очищенным препаратам.

Схема 1.

Лошадиная сыворотка (плазма)



Ферментативный гидролиз сывороточных белков пепсином (плазма= сыворотка разводятся до 3% белка) 1 час при рН 3,25 3,33 и +25 +26^o в присутствии 1,5 1,7% алюмокалиевых квасцов



Образование геля гидроокиси алюминия при подщелачивании ферментированного материала до рН 6,0 выдержка при +45^o в течение 1 часа



Отделение осадка сорбента фильтрацией (осадок удаляют)



Высаливание антитоксических глобулинов из активного фильтрата сульфатом аммония 320 г/л



Отделение осадка глобулинов фильтрацией, прессование, и диализ против проточной воды в течение 48 часов



Дополнительная очистка диализата от остаточных балластных продуктов протеолиза и возможного пирогена выбранными сорбентами, удаление ионов солей с помощью ионитов КУ-2 и ЭДЭ-10п, стерилизующая фильтрация

Схема получения сыворотки Диаферм-3.

Целью изобретения является создание высокоочищенного гомологичного иммуноглобулинового препарата, пригодного для иммунопрофилактики и иммунотерапии дифтерии.

Поставленная цель достигается тем, что для получения исходного сырья отбирают лиц с титрами антител в крови против дифтерийного токсина, определяемыми в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации) не ниже 1:320, ревакцинируют их дифтерийным анатоксином и берут кровь в качестве исходного сырья у доноров с титрами антител к дифтерийному токсину не ниже 1:5000 и выше с последующим выделением конечного продукта по методу Кона.

Пример. У новобранцев 18 19 лет, получивших последнюю ревакцинацию дифтерийным анатоксином в 16 лет, определяют в РПГА титры антител к дифтерийному токсину. Отбирают лиц с титрами антител не менее чем 1:320 (или не менее 0,5 мг/мл по методу Иенсена) и проводят им ревакцинацию АД-М-вакциной (адсорбированным дифтерийным анатоксином с уменьшенным содержанием антигена, содержащим в дозе 0,5 мл 5 Lf ДА. Через 20 45 дней после ревакцинации вновь определяют титры антител и отбирают доноров с титрами не менее чем 1:5000 (5 мг/мл) и более. Кровь у доноров берут методом плазмафереза.

Схема получения препарата представлена на схеме 2.

Полученный таким способом из сыворотки человека высокоочищенный иммуноглобулиновый препарат на иммуноэлектрофореграмме с антисывороткой ко всем сывороточным белкам человека дает одну линию, соответствующую lgG-иммуноглобулину.

Препарат можно использовать для серопрофилактики и терапии дифтерии без риска развития тяжелых осложнений.

е