производные аминокислот и их кислотно-аддитивные соли

Формула изобретения

1. Производные аминокислот общей формулы



где R бензилоксикарбонил или 2-хинолилкарбонил,

и их кислотно-аддитивные соли.

2. N-трет-Бутил-декагидро-2-[2(R)-гидрокси-4-фенил-3(S)- -[[N-(2-хинолилкарбонил(-L-аспарагинил] амино]бутил]-(4aS, 8aS)-изохинолин-3 (S)-карбоксамид.

3. 2-[3(S)-Амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] N- трет-бутилдекагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)- -карбоксамид.

4. 2-[3(R)-[(L-Аспарагинил)амино]-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-трет-бутил-декагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамид.

Описание изобретения к патенту

Изобретение касается производных аминокислот и их кислотно-аддитивных солей.

Производные аминокислот, описанные в данном изобретении, имеют нижеследующего общую формулу I

I

где R бензилоксикарбонил или 2-хинолилкарбонил, и их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот.

Соединения, имеющие формулу I, и указанные их соли кислот являются новыми и обладают ценными фармакологическими свойствами. В частности, они ингибируют протеазы вирусного начала и их можно использовать для профилактики или лечения вирусных инфекций, в частности, заболеваний, вызываемых вирусом HIV и другими ретроидными вирусами.

Объектом изобретения являются соединения формулы I и их вышеупомянутые кислотно-аддитивные соли, которые применяют в качестве веществ, имеющих терапевтическое действие. Указанные соединения и их соли могут быть использованы для лечения и предотвращения заболеваний, особенно при лечении или профилактике заболеваний, вызванных вирусной инфекцией. Представленные согласно изобретению соединения и их соли применяют для приготовления лекарств для лечения или профилактики вирусных инфекций.

Приемлемые для фармацевтического использования соли присоединения кислот это соли, образованные в результате реакций этих новых соединений с неорганическими кислотами, например, галоидводородными кислотами, такими как хлористоводородная кислота или бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и другие, или с органическими кислотами, такими как, например, уксусная кислота, лимонная кислота, лимонная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, винная кислота, метансульфокислота, п-толуолсульфокислота и другие.

Согласно изобретению соединения, имеющие формулу I, и их соли, пригодные для фармацевтического использования, можно получить следующим образом:

a) взаимодействием 2-[3(S)-амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил]-N-третичный бутилдекагидро-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида, имеющего формулу II



с кислотой общей формулы III



где R имеет значение, определенное выше, или ее реакционноспособным производным;

б) восстановлением соединения, имеющего общую формулу IV



где R имеет ранее определенное значение, и отделением желаемого 2(R)-гидрокси-изомера от полученной смеси, или

в) взаимодействием 2-[3(S)-[(L-аспарагинил)амино] -2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N -трет. бутилдекагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида, имеющего формулу V



c агентом, образующим бензилоксикарбонильную группу или 2-хинолилкарбонильную группу;

г) если необходимо, осуществляют превращение полученного соединения, имеющего формулу I, в фармацевтически приемлемую соль, полученную взаимодействием с кислотой.

Взаимодействие соединения, имеющего формулу II, c кислотой формулы III, согласно способу (а), можно осуществить, применяя методы, известные из химии пептидов. Так, когда используется кислота формулы III, реакцию предпочтительно проводят в присутствии конденсирующего агента, такого как гидроксибензотриазол и дициклогексилкарбодиимид. Эту реакцию осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как эфир (например, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран и др.) или в диметилформамиде при низкой температуре, предпочтительно от примерно -10^oC до +5^oC, а особенно при температуре около 0^oC. Подходящими реакционноспособными производными кислот формулы III, используемыми в данном способе, являются, например, соответствующие галоидангидриды (например, хлорангидрид), ангидриды кислот, смешанные ангидриды, активированные сложные эфиры и др. При использовании реакционноспособных производных реакция обычно проводится в инертных органических растворителях, таких как галоидзамещенные алифатические углеводороды (например, дихлорметан) или в эфире (например, диэтиловом эфире, тетрагидрофуране и др.) и, что благоприятно, в присутствии органического основания (например, N-этилморфолина, диизопропилэтиламина и др.) при низкой температуре, желательно от приблизительно -10^oC до +5^oC, особенно при температуре около 0^oC.

Реакция восстановления соединений формулы IV (cогласно способу, описанному в (б), может быть осуществлена в соответствии с методами, известными для восстановления карбонильной группы до гидроксильной. Так, например, восстановление осуществляется с использованием комплексных гидридов металлов, таких как боргидрид щелочного металла, особенно боргидрид натрия, в присутствии подходящего органического растворителя, такого как алканол (например, метанол, этанол, пропанол, изопропанол и др.). Обычно реакцию восстановления проводят при комнатной температуре. Отделение желаемого 2(R)-гидрокси-изомера от полученной смеси можно осуществить известными способами, например, хроматографией и т.д.

Для осуществления процесса согласно (в) подходящим реагентом для получения бензилоксикарбонильной группы является бензиловый эфир хлормуравьиной кислоты. Подходящими реагентами для получения 2-хинолилкарбонильной группы являются соответствующая кислота и ее реакционноспособное производное, такое как соответствующий галоидангидрид (например, хлорангидрид кислоты), ангидрид кислоты, смешанные ангидриды, активированные сложные эфиры и т.д. Взаимодействие соединения формулы V c вышеупомянутыми реагентами осуществляется способом, описанным в стадии (a).

Превращение соединений формулы I в фармацевтически приемлемые соли кислот, согласно методу (г), можно осуществить обработкой этих соединений по общепринятому методу неорганической кислотой, например, галоидводородной кислотой, такой как хлористоводородной или бромистоводородной кислотами, серной кислотой, азотной кислотой, фосфорной кислотой и др. или органической кислотой, такой как уксусная кислота, лимонная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, метансульфокислота, паратолуолсульфокислота и др.

Соединение формулы II, используемое в качестве исходного вещества в методе (а), является новым. Оно может быть получено например, взаимодействием соединения, имеющего общую формулу VI,



где R¹ группа, защищающая аминогруппу (например, трет.бутоксикарбонильная или бензилоксикарбонильная), а "Х" атом хлора или брома, с N-трет. -бутилдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамидом, имеющим формулу VII



и восстановлением полученного соединения общей формулы VIII



где R¹ имеет значение, определенное ранее, отделением желаемого 2(R)-гидроксиизомера от полученной смеси и отщеплением группы R¹ от полученного соединения, имеющего общую формулу IX



в которой R¹ имеет ранее определенное значение, с образованием соединения формулы II.

Взаимодействие соединения формулы VI, где предпочтительно одна группа R¹ означает бензилоксикарбонил, с соединением формулы VII можно осуществить известным способом, например, в инертном органическом растворителе, таком как галоидзамещенный алифатический углеводород (например, дихлорметан и т.д. ) и в присутствии основания (например, триалкиламин, такой как триэтиламин и др.) обычно при комнатной температуре.

Восстановление соединения формулы VIII c получением соединения формулы IX и с последующим отделением желаемого 2(R)-гидрокси-изомера можно осуществить методом, описанным ранее, согласно способу (б) настоящего изобретения, то есть восстановлением соединения формулы IV и отделением 2(R)-гидрокси-изомера из полученной смеси.

Отщепление группы R¹ от соединения формулы IX можно также осуществить известным способом, используя сильную неорганическую кислоту, такую как галоидводородная кислота или сильную органическую кислоту (например, трифторуксусная кислота и т.д.) удобнее всего при температуре от примерно 0^oC до комнатной температуры. С другой стороны, аминоблокирующая группа R¹, отщепляемая гидрогенолитически, может быть подвергнута отщеплению при использовании водорода в присутствии благородного металла в качестве катализатора (например, палладиевого катализатора, такого как палладий на угле) в органическом растворителе или в смеси растворителей, которые в условиях реакции инертны (например, алканол, такой как этанол, изопропанол, или сложный эфир алканкарбоновой кислоты, как, например, этилацетат и др.), обычно при комнатной температуре.

Следующий метод получения соединения формулы II включает сначала взаимодействие соединения общей формулы Х



где R¹ определен ранее, с соединением, имеющим формулу VII, описанную ранее, желательно в инертном органическом растворителе, таком как алканол (например, метанол и др.), диметилформамид или в аналогичном растворителе при повышенной температуре, лучше от приблизительно 60^oC до примерно 120^oC, с последующим отщеплением группы R¹ в продукте реакции (соединение формулы IX), как было описано ранее.

Соединения формулы IV, которые используются в качестве исходных веществ для получения по (б), можно приготовить при отщеплении аминозащитной группы R¹ от соединения, имеющего формулу VIII, и взаимодействием продукта реакции с кислотой формулы III, или с ее реакционноспособным производным. Взаимодействие можно осуществлять способом, аналогичным описанному ранее в (а).

Соединение, имеющее формулу V и которое используется в качестве исходного вещества в осуществлении процесса по (в), является новым и служит еще одним объектом изобретения.

Соединение формулы V можно получить, например, отщеплением бензилоксикарбонильной группы R от соединения формулы I, в котором R - бензилоксикарбонильная или трет.бутоксикарбонильная группа, с образованием соединения I, но в котором R означает третичную бутоксикарбонильную группу. Это последнее соединение можно получить, например, при взаимодействии соединения формулы II c N-(трет. бутоксикарбонил)-L-аспарагином, согласно методике (a). Процесс отщепления выполняется способом, аналогичным описанному ранее в связи с отщеплением группы R¹ от соединений формулы VIII.

Исходные вещества формулы III и их реакционноспособные производные, так же как и соединения формул VI, VII и X, описанные выше, поскольку они являются новыми и не аналогичны известным соединениям, можно получить способом, аналогичным для получения известных соединений, или способом, описанным в нижеприведенных примерах или подобных им.

Более того, реагенты, использованные в методике (в), являются большей частью известными соединениями.

Как было упомянуто выше, соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли ингибируют протеазы вирусного начала и поэтому пригодны для лечения и профилактики вирусных инфекций, в частности, инфекций, вызванных вирусом HIV и другими ретроидными вирусами.

Ингибирование протеазы вируса HIV вне организма соединениями, которые представлены в изобретении, можно продемонстрировать посредством следующего теста:

Протеаза HIV была экспрессирована в E. coli и частично очищена от растворимых экстрактов бактерии фракционированием сульфатом аммония (0-30%). Активность протеазы анализировалась с применением в качестве субстрата защищенного гексапептида сукцинил-Ser-Leu-Asn-Tyr-Pro-Ile изобутиламида (S¹) или защищенного гептапептида сукцинил-Val-Ser-Gln-Asn-Phe-Pro-Ile изобутиламида (S²) в качестве субстрата. Отщепление субстрата оценивалось посредством количественного определения образовавшегося H-Pro-Ile изобутиламида при помощи спектрофотометрического анализа N-терминального пролина.

1,25 мМ субстрата растворяли в 125 мМ цитратного буфера (рН 5,5), содержащего 0,125 мг/мл Tween 20. К 80 мкл вышеупомянутого буферного субстрата добавляли 10 мкл раствора исследуемого соединения различных концентраций (растворенного в метаноле или в диметилсульфоксиде и разбавленного водой, содержащей 0,1% Tween 20) и 10 мкл протеазы. Переваривание осуществлялось при 37^oC в течение установленного времени, затем процесс останавливали добавлением 1 мл цветного реагента [30 мкг/мл изатина и 1,5 мг/мл 2-(4-хлоробензоил) бензойной кислоты в 10%-ном ацетоне в этаноле (соотношения объем/объем)] Раствор нагревали на водяной бане, затем пигментированный осадок подвергался вторичному растворению в 1 мл 1%-ного пирогаллола с 33%-ным содержанием воды в ацетоне (соотношения вес/объем/объем). Оптическая плотность раствора измерялась методом спектрофотометрии при 599 нм. Образование H-Pro-Ile изобутиламида в присутствии исследуемого соединения сравнивали с контрольными, концентрация исследуемого соединения, дающая 50% ингибирования (I₅₀), была определена графическим построением различных концентраций применяемых исследуемых соединений.

Антивирусная активность соединений in vitro формулы I может быть продемонстрирована на примере анализа, описанного ниже:

Активность против вируса HIV

В этой пробе были использованы HTLV-III (штамм RF), выращенные в клетках С8166 (CD4⁺ человеческого Т-лимфобластоидного происхождения), с применением среды RPM1 1640 c бикарбонатным буфером, антибиотиками и 10%-ной сывороткой коровьего эмбриона.

Суспензию клеток заражали вирусом в количестве, десятикратном TCD₅₀, адсорбцию осуществляли при температуре 37^oC в течение 90 мин. Клетки отмывались средой 3 раза. Тест выполнялся в 6-мл пробирках с культурой ткани, каждая пробирка содержала 2 х 10⁵ инфицированных клеток в 1,5 мл среды. Анализируемые соединения растворялись в водно-эфирной среде или в диметилсульфоксиде в зависимости от растворимости и добавлялось 15 мкл раствора субстанции. Культуры инкубировали при 37^oC в течение 72 ч во влажной атмосфере с содержанием 5% углекислого газа. Затем культуры центрифугировали, а аликвотная проба надосадочной жидкости переводилась в растворимое состояние посредством Nonidet P40 и подвергалась действию пробы антигена, в которой была первичная антисыворотка, имеющая конкретную реактивность против белка вируса 24 и систему нахождения пероксидазы хрена обыкновенного. Окрашенное образование определялось методом спектрофотометрии и наносилось на диаграмму в зависимости от концентраций исследуемой субстанции. Концентрация, при которой наблюдалась 50%-ная защита, определялась индексом (I₅₀).

Проба на цитотоксичность, основанная на поглощения красителя и метаболизме или на внедрении меченого радиоактивного изотопа аминокислоты, представляет собой серию опытов, наряду с вышеуказанной пробой, для определения антивирусной селективности.

Результаты, полученные при проведении вышеуказанных исследований, где используются соединения, имеющие формулу I, в качестве анализируемых соединений, объединены в таблице.

Соединения, описываемые формулой I, а также их фармацевтически приемлемые соли, можно использовать в качестве лекарственных препаратов. Фармацевтические препараты должны быть приготовлены для внутреннего применения, например, перорального (в форме таблеток, облаток, драже, мягких и твердых желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий), назального (в форме носовых аэрозолей) или ректального (в форме суппозиториев). Помимо этого полученные препараты пригодны и для парентерального применения, например, внутримышечного или внутривенного (в форме растворов для инъекций).

В промышленном производстве таблеток, облаток, драже и твердых желатиновых капсул соединения формулы I и их соли можно сочетать с инертными неорганическими или органическими наполнителями. В качестве таких наполнителей можно использовать лактозу, кукурузный крахмал или их производные, тальк, стеариновую кислоту и ее соли.

Подходящей средой для мягких желатиновых капсул являются растительные масла, воски, жиры, полутвердые или жидкие полиолы и т.д. для растворов и сиропов вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.д. для растворов для инъекций вода, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.д. для суппозиториев натуральные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и т.д.

Более того, в состав фармацевтических препаратов могут входить консервирующие вещества, растворители, вещества, повышающие вязкость, стабилизирующие агенты, антикоагулянты, смачивающие агенты, эмульгаторы, подслащивающие вещества, красители, ароматизирующие вещества, соли для изменения осмотического давления, буферы, покрывающие вещества (оболочки) или антиоксиданты. Кроме того, могут входить и другие вещества, имеющие терапевтическую ценность.

Согласно изобретению соединения, имеющие формулу I, и их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот, можно использовать для лечения и профилактики вирусных заболеваний, в частности, ретровирусных инфекций. Дозировка может варьироваться в широких пределах и, естественно, подбирается индивидуально в каждом конкретном случае. Обычно в случае орального применения достаточно следующей суточной дозы примерно от 3 мг до примерно 3 г, предпочтительно от примерно 10 мг до примерно 1 г (например, приблизительно 300 мг на человека), предпочтительно разделенную на прием в течение суток на 1-3 раза, причем каждая доза, как правило, одинаковая. Однако следует отметить, что верхний предел может быть превышен, если это показано.

Пример 1. Раствор 561 мг 2-[3(S)-амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил]-N-трет. -бутилдекагидро-(4aS, 8aS)- изохинолин-3(S)-карбоксамида и 372 мг N-(бензилоксикарбонил)-L-аспарагина в 20 мл сухого тетрагидрофурана охлаждали в смеси льда с солью. Добавляли 189 мг гидроксибензотриазола, 161 мг N-этилморфолина и 317 мг дициклогексилкарбодиимида, смесь перемешивали в течение 16 ч. Затем смесь разбавляли этиловым эфиром уксусной кислоты и фильтровали. Фильтрат промывали водным раствором бикарбоната натрия и раствором хлорида натрия. Растворитель удалялся упариванием, а осадок подвергался хроматографии на силикагеле с применением смеси дихлорметана и метанола (9:1) для элюирования, получая 434 мг 2-[3(S)-[N-(бензилоксикарбонил)-L-аспарагинил]амино] -2(R)-гидрокси-4- фенилбутил-N-третичный бутилдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде белого твердого вещества из смеси метанол /диэтиловый эфир.

Масс-спектр: 650 [M+H] ⁺; ЯМР: (d₄ CH₃OH, 400 MHz): 7,33 (5H, m, CH₂O), 7,25 (2H, m), 7,18 (2H, m); 7,09 (1H, m), 5,05 (2H, s, PhO), 4,42 (1H, dd, AsnJ 7,8, 6,1), 4,22 (1H, m, -CH₂CH(OH)- J 10,7, около 4, около 4), 3,85 (1Н, m, -CH(OH)CH₂-J 8,0, 6,2, около 4), 3,02 (1Н, dd, Ph(H)CHJ -13,9, около 4), 3,02 (1Н, dd, 1_eq J -12,0, немного), 2,69 (1Н, dd, PhCH()CH-J -13,9, 10,7), 2,63 (1H, dd, -CH(OH)CHN-J -12,6, 8,0), 2,62 (1H, dd, H3_ax J около 11, немного), 2,57 (1Н, dd, Asn₁J -15,2, 6,1), 2,38 (1H, dd, Asn₂J -15,2, 7,8), 2,19 (1H, dd, -CH(OH)(H)N-J -12,6, 6,2), 2,17 (1H, dd, 1_ax J -12,0, 3,2), 2,07 (1H, m, H4_ax J -12,7, около 11, около 11,5), 1,78 (1Н, m, H4a J_4a-4ax около 11,5, J_4a-4eq немного, J_4a-8a немного), 1,63 (1Н, m, H8a J_8a-1ax 3,2, J_8a-1eq немного, J_8a-4a немного), 1,35 (1Н, m, H4_eq J -12,7, немного, немного), 1,30 (9Н, s, t-бутил), 2,0 1,2 (8Н, m).

Используемый в качестве исходного материала 2-[3(S)-амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третичный бутилдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамид получали следующим образом:

(i) Суспензию из 12,676 г (71,6 ммолей) 1,2,3,4-тетрагидро-3(S)-изохинолинкарбоновой кислоты (Chem. Pharm. Bull. 1983, , 312) в 200 мл 90%-ной уксусной кислоты гидрогенизировали при 80^oC и давлении 140 атм над 5%-ным родием на угле в течение 24 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, а катализатор затем отфильтровывали. Фильтрат испаряли до получения камеди, которую растворяли в 10 мл этилацетата, и медленно добавляли к 100 мл энергично перемешиваемого диизопропилового эфира. Получался смолистый осадок. Надосадочные жидкости удалялись декантацией, а осадок экстрагировали горячим этилацетатом. Этот горячий раствор вливали в интенсивно перемешиваемую смесь 150 мл диэтилового эфира и диизопропилового эфира (1:1) до получения светло-серого твердого вещества, которое отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и высушивали. Таким образом получали 5,209 г смеси декагидроизохинолин-3(S)-карбоновых кислот, в состав которых входили в большей степени (около 65%) 4aS,8aS изомеры вместе с 4аR,8aR изомерами (около 25%), и около 10% транс-изомеров; MS: m/e 184 [M+H]⁺.

(ii) 9,036 мг (49,4 ммоля) предшествующей смеси декагидроизохинолин-3(S)-карбоновых кислот растворяли в 50 мл (50 ммоль) 1М раствора гидроксида натрия; полученный раствор охлаждали до 0^oC. 7,40 мл (51,87 ммоля) бензилхлороформиата и 58,7 мл (58,7 ммоль) 1М раствора гидроксида натрия добавляли по каплям в течение 1 часа, поддерживая температуру на уровне 0-5^oC охлаждением. Затем смесь перемешивали еще 2 ч, за это время температура смеси доводилась до комнатной. Добавляли 100 мл диэтилового эфира и смесь фильтровали, в результате чего получали нерастворимый R,R-изомер, который отделяли. Водный слой фильтрата сепарировали и доводили до рН 1,5-2 добавлением концентрированной соляной кислоты, в результате чего осаждалось масло. Смесь дважды экстрагировали 100 мл этилацетата. Объединенные органические экстракты промывались водой, высушивались над безводным сульфатом натрия и упаривались до получения масла. Это масло растворяли в 35 мл этилацетата с добавлением 2,85 мл (25 ммолей) циклогексиламина. Белый осадок собирали фильтрованием, получая (после нескольких дробных перекристаллизаций из смеси метанол/этилацетат) 2,38 г циклогексиламиновой соли 2-(бензилоксикарбонил)-декагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоновой кислоты; MS: m/e 318 [M+H]⁺.

(iii) 2,334 г циклогексиламиновой соли 2-(бензилоксикарбонил)-декагидро-(4аS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоновой кислоты разделили между 50 мл этилацетата и 50 мл 10%-ного раствора лимонной кислоты. Органическую фазу отделили, промыли водой, отфильтровали и упарили до получения 1,87 г 2-(бензилоксикарбонил)-декагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоновой кислоты в виде бесцветной смолы; MS: m/e 318 [M+H]⁺.

(iv) Раствор 0,634 г (2,0 ммоля) 2-(бензилоксикарбонил)-декагидро-(4аS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоновой кислоты в 6 мл диметоксиэтана обработали 0,23 г (2,0 ммоля) N-гидроксисукцинимидом и 0,412 г (2,0 ммоля) дициклогексилкарбодиимидом. Смесь перемешивали при комнатной температуре 18 ч. Смесь фильтровали, и фильтрат упаривали до получения 0,879 г эфира N-гидроксисукцинимида в виде светло-желтого масла. Раствор 0,828 г (2,0 ммоля) эфира N-гидроксисукцинимида перемешивали в 5 мл дихлорэтана, охлаждали до 0^oC и обрабатывали 0,219 г (3,0 ммоля) третичного бутиламина. Смесь перемешивали при 0^oC в течение 2 ч, затем в течение 4,5 ч при комнатной температуре. Затем смесь промывали 2М соляной кислотой, раствором карбоната натрия и раствором хлорида натрия, высушивали безводным сульфатом магния и упаривали. Осадок растворяли в 20 мл диэтилового эфира и отфильтровывали. Фильтрат упаривали до получения 0,712 г 2-(бензилоксикарбонил)-N-третичный бутилдекагидро-(4аS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде белого твердого вещества; MS: m/e 373 [M+H]⁺.

(v) Раствор 0,689 г (1,85 ммоля) 2-(бензилоксикарбонил)-N-третичный бутилдекагидро-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамид в 20 мл этанола гидрогенизировали в присутствии 0,01 г 10%-ного палладия на угле при комнатной температуре и при атмосферном давлении в течение 18 ч. Катализатор удаляли фильтрацией, а растворитель удаляли упариванием до получения количественного выхода N-третичного бутилдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде чистого масла; MS: m/e 239 [M+H]⁺, которое использовалось на следующей стадии без дальнейшей очистки.

(vi) Раствор 440 мг N-третичного бутилдекагидро-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида и 549 мг 3(S)-бензилоксиформамидо)-1,2(S)-эпокси-4-фенилбутана в 6 мл этанола перемешивали при 60^oC в течение 7 ч. Затем добавляли дополнительные 54 мг 3(S)-(бензилоксиформамидо)-1,2(S)-эпокси-4-фенилбутана, раствор перемешивали при 20^oC в течение 16 ч. Растворитель удаляли упариванием, а осадок подвергали хроматографии на силикагеле с использованием смеси диэтилового эфира:н-гексана:метанола (47,5:47,5:5) для элюирования с получением 771 мг 2-[3(S)-(бензилоксиформамидо)-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третичного бутилдекагидро-(4аS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде белого твердого осадка; MS: m/e 536 [M+H]⁺.

(vii) Раствор 747 мг 2-[3(S)-(бензилоксиформамидо)-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-трет.-бут- илдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в 40 мл этанола гидрогенизировали на 10% палладия на угле при 20^oC, атмосферном давлении в течение 5 ч. Катализатор удаляли фильтрацией, а фильтрат упаривали до получения 561 мг 2-[3(S)-амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил]-N-трет. -бутилдекагидро-(4aS- 8aS)- изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовалось на следующих стадиях без дальнейшей очистки.

Пример 2. Раствор 154 мг 2-[3(S)-[(L-аспарагинил)-амино]-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третичн- ого бутилдекагидро-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида и 52 мг хинальдиновой кислоты в 6 мл сухого тетрагидрофурана охлаждали в смеси льда и соли. Добавляли 41 мг гидроксибензотриазола, 35 мг N-этилморфолина и 68 мг дициклогексилкарбодиимида, смесь перемешивали в течение 64 ч. Смесь разбавляли этилацетатом и отфильтровывали. Фильтрат промывали водным раствором бикарбоната натрия и раствором хлорида натрия, затем испаряли. Осадок хроматографировался на силикагеле с применением дихлорметана и метанола (9:1) для элюирования с целью получения 50 мг N-третичного бутилдекагидро-2-[2(R)-гидрокси-4-фенил-3-(S)-[[N-(2-хинолилкарбонил)- -L-аспарагинил]-амино]-бутил]-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в виде белого осадка; MS: m/e 671 [M+H]⁺; ЯМР: (d₄ CH₃OH, 400 MHz):

8,52 (1H, m), 8,18 (1H, m), 8,14 (1H, m), 8,02 (1H, m), 7,84 (1H, m), 7,69 (1H, m), 7,18 (2H, m), 6,90 (2H, m), 6,72 (1H, m), 4,93 (1H, dd, AsnaCH J 6,6, 6,8), 4,27 (1H, m, -CH₂CH(OH)-J 3,8, 3,8, 11,0), 3,89 (1H, m, (OH)CH₂-J 7,2, 6,4, 3,8), 3,06 (1H, dd, H1_eq J -12,0, 3,0), 3,02 (1H, dd, Ph(H)CH-J -14,0, 3,8), 2,77 (1H, dd, Asn₁J -15,6, 6,6), 2,68 (1H, dd, Asn₂J -15,6, 6,8), 2,68 (1H, dd, PhCH()CH-J -14,0, 11,0), около 2,68 (1Н, dd, -CH(OH)-J 12,0, 7,2), 2,63 (1H, dd, H3_ax J 11,0, 2,2), 2,22 (1H, dd, -CH(OH)CH()N-J -12,0, 6,4), 2,18 (1H, dd, H1_ax J -12,0, 2,2), 2,06 (1H, m, H4_ax J -11,0, 11,0, 11,0), 1,78 (1H, m, 4a J_4a-4ax 11,0, J_4a-4eq около 4, J_4a-8a около 4), 1,65 (1Н, m, 8a J_8a-1ax 2,2, J_8a-1eq 3,0, J_8a-4a около 4), 1,37 (1Н, m, H4_eq J -11,0, 2,2, около 4), 1,30 (9Н, s, t-бутил), 2,0-1,2 (8Н, m).

Используемый в качестве исходного 2-[3(S)-[(L-аспарагинил)амино]-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третичный бутилдекагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамид получали следующим методом:

Раствор 195 мг 2-[3(S)-[[N-(бензилоксикарбонил)-L-аспарагинил]амино]-2(R)-гидрокси-4- -фенилбутил]-N-третичного бутилдекагидро-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида в 20 мл этанола гидрировали при комнатной температуре и атмосферном давлении в течение 18 часов над 10%-ным палладием на угле. Катализатор отфильтровывали, а фильтрат упаривали при пониженном давлении до получения 154 мг 2-[3(S)-[(L-аспарагинил)амино]-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третично- го бутилдекагидро-(4аS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида, который использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 3. Раствор 287 мг N-(2-хинолилкарбонил)-L-аспарагина и 401 мг 2-[3(S)-амино-2(R)-гидрокси-4-фенилбутил] -N-третичного бутилдекагидро-(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида [полученного способом, описанным в примере 1 (i)-(vii)] в 3 мл тетрагидрофурана охлаждали до -10^oC и добавляли 163 мг 3-гидрокси-1,2,3-бензотриазин-4(3Н)-она и 220 мг дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивали при -10^oC в течение 2 ч и при 20^oC в течение 16 ч, затем разбавляли этилацетатом и отфильтровывали. Фильтрат промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, насыщенным раствором хлорида натрия, а затем упаривали. Осадок подвергали хроматографии на силикагеле с использованием 4% (по объему) метанола в дихлорметане для элюции с получением 537 мг N-третичного бутилдекагидро-2-[2(R)-гидрокси-4-фенил-3(S)-[[N-(2-хинолилкарбонил)-- L-аспарагинил] амино] бутил]-(4aS,8aS)-изохинолин-3(S)-карбоксамида, который был идентичен продукту, полученному в первом абзаце примера 2.

Вследствие реакции вышеуказанного свободного основания с пара-толуолсульфоноксикислотой и кристаллизации из метанол/этилацетата получали пара-толуолсульфонат N-трет. -бутилдекагидро-2-[2(R)-гидрокси-4-фенил-3(S)-[[N-(2-хинолилка- рбонил)-L-аспарагинил] амино] бутил] -(4aS, 8aS)-изохинолин-3(S)-карбокса- мида в виде белого твердого вещества с точкой плавления 246 248^oC (разложение).

N-(2-хинолилкарбонил)-L-аспарагин, используемый в качестве исходного материала, получали следующим образом:

Смесь 540 мг сложного эфира амида янтарной кислоты и хинальдиновой кислоты и 300 мг L-аспарагин моногидрата в 2 мл диметилформамида перемешивали при 20^oC в течение 96 часов. Растворитель удаляли испарением до получения белого твердого осадка, который интенсивно перемешивали в 10 мл дихлорметана, отфильтровывали и промывали дихлорметаном. Таким образом получали 431 мг N-(2-хинолилкарбонил)-L-аспарагина в виде белого твердого вещества; MS: m/e 288 [M+H]⁺.

Следующий пример иллюстрирует приготовление фармацевтического препарата, содержащего соединение формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, в виде активного ингредиента.

Пример А. Водный раствор активного ингредиента стерильно отфильтровывали, смешивали при нагревании со стерильным желатиновым раствором, который содержал фенол в качестве консерванта с применением таких количеств, чтобы получить 1,00 мл конечного раствора, который содержал бы 3,0 мг активного ингредиента, 150,0 мг желатина, 4,7 мг фенола и дистиллированной воды до 1 мл. Смесь разливали в пробирки емкостью 1,0 мл в условиях антисептики.