устройство для идентификации микроорганизмов

Формула изобретения

Устройство для идентификации микроорганизмов, содержащее полистироловый планшет с лунками, на поверхность которых нанесена стабилизированная субстратно-питательная среда, отличающееся тем, что в качестве стабилизатора использована триоксиметиламинометансоляная кислота в количестве 60 мг на 100 мл среды.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано для идентификации микроорганизмов различных представителей семейств Vibrionaceae, Enterobacteriaceae и др.

В последнее время широкое распространение получили диски или полоски хроматографической бумаги, так называемые системы индикаторных бумажек (СИБ), содержащие определенное количество субстрата в сочетании с индикатором, стабилизированные пленкообразующим покрытием (Методические рекомендации по применению бумажных индикаторных систем (БИС) при лабораторной диагностике холеры//Составители: Лавровская В.М. Альтман И.Ш. Воронкина И.М. Горький, 1978. с. 3).

Однако использование их не всегда дает четкие результаты. Кроме того, требуются значительные материальные и временные затраты: дополнительная лабораторная посуда (стерильные пробирки, пипетки, чашки Петри), подготовка проб к использованию (на исследование одного штамма требуется в среднем 1,5-2 часа).

В качестве прототипа взят полистироловый планшет, в лунки которого помещены субстратно-индикаторные среды, стабилизированные поливиниловым спиртом (Инструкция по применению системы мультимикротестов для биохимической идентификации энтеробактерий (ММ Е1), утвержденная Заместителем Министра здравоохранения СССР 24 декабря 1990 г. -Ставрополь, 1990, с. 1).

Основным недостатком прототипа является низкий уровень выявляемости признаков испытуемых культур. В условиях нашей лаборатории и по данным других авторов (Лазарева Е. Б. Зологуева Г.В. Никифорова Л.Н. Меньшиков Д.Д. Сравнительная оценка двух тест-систем для идентификации энтеробактерий //Клиническая лабораторная диагностика. 1994, 1. с. 50-51) уровень выявляемости признаков испытуемых культур с помощью известного устройства-прототипа не превышал 86% по сравнению со стандартным методом. Среди других недостатков прототипа следует отметить, что для осуществления опытов по его использованию необходимо проведение целого ряда дополнительных работ: посев на твердые питательные среды, выращивание изучаемой культуры в течение 18-24 часов, а затем приготовление на изотоническом растворе или дистиллированной воде бактериальной суспензии это удлиняет срок исследования на сутки и более и поэтому устройство нельзя использовать для ускоренной диагностики.

Целью настоящего изобретения является устранение вышеуказанных недостатков.

Указанная цель достигается с помощью устройства, представляющего собой полистироловый планшет с лунками, на поверхность которых нанесена питательно-индикаторная среда, стабилизированная триоксиметиламинометан-соляной кислотой (ТРИС) в количестве 60 мг на 100 мл среды. Концентрация ТРИС, обеспечивающая максимальный уровень выявляемости признаков испытуемых культур, была определена экспериментально. Результаты представлены в таблице 1.

Из таблицы видно, что при использовании ТРИС в концентрации 24 мг на 100 мл ПИС уровень выявляемости признаков у испытуемых культур по отношению к результатам контрольных исследований колеблется от 56 до 85% Такие же результаты получены при применении ТРИС в концентрации 122 мг на 100 мл ПИС. Использование ТРИС в концентрации 60 мг на 100 мл ПИС дало 100% совпадение результатов исследования с таковыми в контроле.

Устройство для идентификации микроорганизмов используется следующим образом: в лунки планшета, на поверхность которого нанесена ПИС (содержащая, например, углевод, многоатомный спирт или какую-нибудь аминокислоту), вносят исследуемую культуру, выращенную на жидкой питательной среде в течении 3-4 часов при температуре 37^o C, в объеме 0,1 мл. Затем планшет закрывают крышкой, помещают в полиэтиленовый пакет и инкубируют при температуре 37^o C в течение 6-8 часов. По истечении этого времени отмечают лунки, в которых произошло изменение цвета индикатора, что указывает на наличие того или иного признака.

Пример применения. Испытаны культуры, выделенные от больных с диареей. Параллельно изучен референтный штамм V.cholerae АТСС 14035. В лунки планшета, на поверхность которых нанесены сахароза, манноза, арабиноза и т.д. (всего 12 тестов), вносят испытуемую культуру, выращенную на жидкой питательной среде в течение 3-4 часов при температуре 37^o C, в объеме 0,1 мл. Затем планшет закрывают крышкой, помещают в полиэтиленовый пакет и инкубируют при температуре 37^o C в течение 6-8 часов. По истечении этого времени отмечают лунки, в которых произошло изменение цвета индикатора. Цвет индикатора изменился под воздействием продуктов метаболита в лунках, содержащих сахарозу, маннозу, крахмал, лизин-декарбоксилазу, орнитин-декарбоксилазу, бессолевую пептонную воду. Из 25 испытуемых штаммов у 15 выявлены признаки, характерные для референтного штамма V.cholerae, а остальные 10 штаммов отнесены к другим родам и представителям семейства Enterobacteriaceae.

Использование предлагаемого устройства для идентификации микроорганизмов обеспечивает:

высокий уровень выявляемости признаков (до 100% по сравнению с эталонным контролем, см. таблицу);

уменьшение сроков идентификации на 1 сутки (не требуется предварительного накопления бактериальной массы), что позволяет проводить ускоренную диагностику;

возможность использования в нестационарных лабораториях при массовых исследованиях в условиях неблагополучной эпидобстановке и при ограниченных человеческих ресурсах.