способ определения степени поражения почек при нефротическом синдроме

Формула изобретения

Способ определения степени поражения почек при нефротическом синдроме, включающий отбор сыворотки крови пациента, помещение ее в инкубационную среду с последующей регистрацией диагностически значимого показателя, отличающийся тем, что дополнительно отбирают цельную кровь, плазму и эритроцитарную массу, в качестве диагностически значимого показателя используют восстановительную емкость исследуемого биологического материала в процессе его инкубации в среде, содержащей феррицианид калия, причем восстановительную емкость оценивают как разность потенциалов пробы до добавления биологического материала и через 5 мин после его добавления и при увеличении значения восстановительной емкости относительно контрольной группы плазмы (П) в пределах 45 47 мв, эритроцитарной массы (ЭМ) 86 91 мв и уменьшении аналогичных показателей сыворотки (С) в пределах 41 42 мв определяют нефротический синдром в стадии компенсации со стабильным течением, при увеличении П 48 52 мв, ЭМ 83 85 мв, уменьшении аналогичных показателей С 38 41 мв определяют нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением, при увеличении П 44 47 мв, цельной крови 73 75 мв, ЭМ 83 85 мв определяют нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением, при увеличении П 45 47 мв, ЭМ 83 85 мв, уменьшении аналогичных значений сыворотки 41 42 мв определяют нефротический синдром в стадии декомпенсации с прогрессирующим течением.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биохимическим способам дифференциальной диагностики степени поражения почек при нефротическом синдроме и может быть использовано в практической медицине, в частности в нефрологии.

Известен рациональный способ оценки состояния почек путем определения в₂-микроглобулина крови и мочи (1). Однако данный способ сложен в исполнении, требует наличия специальной лаборатории, обученного персонала, дефицитных реактивов.

Известен способ "свободной пробы на разведение" (2), который заключается в том, что в собранных за сутки порциях мочи определяется ее относительная плотность, по уменьшению которой судят о функциональном состоянии почек. Однако данный способ длителен в исполнении и не обладает достаточной точностью оценки.

Известны способы оценки степени поражения почек путем определения ряда биохимических показателей крови и мочи. Способы заключаются в том, что в сыворотке крови определяют концентрацию креатинина, мочевины, липидов, белка (3). Однако данные способы длительны в исполнении и не обладают достаточно высокой точностью и информативностью определения.

Прототипом заявленного способа является способ оценки степени поражения почек путем определения концентрации диеновых коньюгат в сыворотке крови (4). Принцип метода основан на интенсивном поглощении диеновых структур гидроперекисей липидов в области 232 234 нм. Результаты измерений выражают в относительных единицах величины оптической плотности на 1 мл крови или 1 мг липидов. Кровь для исследования берется утром натощак. В качестве антикоагулянта используется ЭДТА (1 мг/1 мл) как ингибитор свободно радикального окисления липидов.

Однако данный способ длителен в исполнении, не обладает достаточно высокой точностью и информативностью определения.

Целью изобретения является увеличение точности, информативности и быстроты определения при оценке характера и степени поражения почек при нефротическом синдроме.

Цель достигается тем, что потенциометрически измеряют восстановительную емкость цельной крови, сыворотки плазмы, эритроцитарной массы при их окислении обратимой окислительно-восстановительной системой, например, щелочным раствором ферроферрицианида калия и при увеличении значений восстановительной емкости относительно контрольной группы плазмы в пределах 45 47 мв, эритроцитарной массы 86 91 мв и уменьшении аналогичных значений сыворотки в пределах 41 42 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии компенсации. При значениях восстановительной емкости плазмы 48 52 мв, эритроцитарной массы 83 85 мв, уменьшении значений сыворотки 38 41 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением; при увеличении значений восстановительной емкости плазмы 44 47, цельной крови 73 75, эритроцитарной массы 83 85 диагносцируют нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением; при увеличении значений восстановительной емкости плазмы 45 47 мв, эритроцитарной массы 83 85 мв, уменьшении аналогичных значений сыворотки 41 42 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии декомпенсации с активным течением.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что обратимая окислительно-восстановительная система (ОВС) раствор, содержащий одновременно окисленную и восстановленную формы, окисляет легкоокисляемые вещества исследуемой биологической пробы. Так как ОВС обратима, она имеет строго определенный устойчивый исходный потенциал Е_o. При введении в нее пробы изменяется соотношение концентрации окисленной и восстановленной форм и, следовательно, изменяется ее потенциал. Разница значений потенциалов ОВС (_t) до введения в нее пробы (Е_o) и спустя фиксированное время после начала окислительно-восстановительной реакции (Е_t) зависит от соотношения концентрации окисленной и восстановительной форм исследуемой биологической пробы. Расход окислителя (x_t) может быть вычислен из формулы



где C_ox,C_red концентрации окисленной и восстановленной форм ОВС до начала реакции. При этом значении рН соотношение объемов исследуемой пробы и ОВС, температура подбираются таким образом, чтобы скачок потенциала находился в пределах 10 120 мв. Нижняя граница (10 мв) связана с точностью измерения потенциала на потенциометрической установке, верхняя граница (120 мв) связана с опасностью нарушения равновесия и возникновения неопределенных смешанных потенциалов.

Способ поясняется также ниже следующим описанием и прилагаемым к нему чертежом, где приведена блок-схема одного из возможных устройств, реализующих способ.

Устройство, реализующее способ, состоит из электродной ячейки 1, электрода измерения 2, электрода сравнения 3, измерительного прибора 4, регистрирующего прибора 5, дозатора ОВС 6, дозатора пробы 7, мешалки 8, термостата 9.

Способ осуществляют следующим образом. В электродную ячейку 1 с электродами 2, 3, дозатором 8 подают ОВС, включают термостат 9 и мешалку 8, измерительный 4 и регистрирующий 5 приборы. Измеряют и регистрируют начальный потенциал ОВС (E_o). Дозатором 7 вводят пробу и через фиксированное время, когда практически заканчивается процесс окисления системой легкоокисляемых продуктов, и потенциал системы будет убывать не более 2 мв в минуту (обычно 5 10 мин), измеряют и регистрируют конечное значение потенциала ОВС (E_t). Вычисляют значение _t= E_o-E_t. Таким образом, измеряют _t цельной крови, ее плазмы, сыворотки, эритроцитарной массы и по их изменениям относительно соответствующих значений донорской крови судят о степени поражения функций почек при нефротическом синдроме.

Отличительные признаки предлагаемого способа:

1. Измеряют потенциометрически восстановительную емкость цельной крови, ее сыворотки, плазмы, эритроцитарной массы при их окислении ОВС.

2. Судят о степени и характере поражения почек при нефротическом синдроме по изменению измеренных значений _t с соответствующими донорской группы, а именно:

при увеличении ₅ плазмы в пределах 45 47 мв, эритроцитарной массы 86 91 мв и уменьшении аналогичных значений сыворотки в пределах 41 42 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии компенсации со стабильным течением;

при увеличении ₅ плазмы 48 52 мв, эритроцитарной массы 83 85 мв, уменьшении аналогичных значений сыворотки 38 41 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением;

при увеличении значений ₅ плазмы 44 47, цельной крови 73 75 мв, эритроцитарной массы 83 85 диагносцируют нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением;

при увеличении ₅ плазмы 45 47 мв, эритроцитарной массы 83 85 мв, уменьшении аналогичных значений сыворотки 41 42 мв диагносцируют нефротический синдром в стадии декомпенсации с активным течением.

Новым свойством предполагаемого изобретения является корреляция степени поражения функций почек при нефротическом синдроме с изменениями восстановительной емкости (_t) цельной крови, ее сыворотки, плазмы, эритроцитарной массы.

Пример 1.

Больная Ш. и/б 782, 26 лет.

Давность заболевания в течение 5 лет, когда на фоне беременности были выявлены изменения в анализах мочи (протеинурия до 3,3 г/л). После родоразрешения отмечались отеки нижних конечностей, суточная потеря белка до 5,0 г в сутки. Была госпитализирована для обследования и лечения в нефрологический стационар. В анализах отмечалась протеинурия до 4,8 г в сутки, гипоальбуминемия (альбумин 30 г), гипопротеинемия (общий белок 37 г), ХС 11,3 ммоль. Уровень гидроперекисей липидов составил 1,6.

Больной проведена биопсия левой почки. Заключение: Мембранознопролиферативный гломерулонефрит. Функция почек сохранена (Клубочковая фильтрация 90 мл/мин). У больной взята для исследования венозная кровь, из нее выделены плазма, сыворотка и эритроцитарная масса. Проведены определения ₅ цельной крови, сыворотки, плазмы и эритроцитарной массы по предлагаемому способу. В качестве ОВС использован раствор K₃[Fe(CN₆)]/K₄[Fe(CN₆) 2,510^-2/2,510^-3 N на 1N NaOH. Измерения проводили при температуре 20^oС, при соотношении объемов ОВС и пробы 20:1. Снимали значения потенциала ОВС до начала реакции (E_o) и спустя 5 минут после введения пробы (E₅). Вычисляли ₅ E_o E₅. Данные биохимических исследований составили ₅ плазмы 46 мв, сыворотки 41 мв, эритроцитарной массы 88 мв. На фоне проводимой терапии цитостатиками, антикоагулянтами, агрегантами отечный синдром имел тенденцию к уменьшению и исчезновению. Через 6 месяцев отмечено снижение протеинурии до 2,0 г в сутки, нормализация белкового спектра крови.

Вывод: У больной выявлен нефротический синдром в стадии компенсации со стабильным течением.

Пример 2.

Больной К. и/б 3650, 38 лет, слесарь.

Считает себя больным около года, когда на фоне пневмонии были выявлены изменения в анализах мочи (протеинурия 0,165 г/л, микрогематурия). Спустя 2 месяца появились отеки лица и туловища, протеинурия достигла 10,0 г в сутки. Больной был обследован в специализированном нефрологическом стационаре, где установлен диагноз мезангиально-пролиферативного гломерулонефрита путем проведения биопсии почек. Уровень клубочковой фильтрации составлял 120 мл/мин, креатинин 0,08 ммоль/л, общий белок 40 г/л, альбумины 34 г.

Данные изучения восстановительной емкости плазмы составили 45 мв, эритроцитарной массы 86 мв, сыворотки 41 мв. Проведенное в последующем лечение позволило купировать все проявления нефротического синдрома. У больного диагносцирована клиническая ремиссия заболевания.

Вывод: Нефротический синдром в стадии компенсации со стабильным течением.

Пример 3.

Больной К. 24 лет, и/б 28702.

После перенесенной ангины выявлена массивная протеинурия (белок 6,6 г/л), гематурия ((E_r до 100 в п/зрения). При обследовании в нефрологическом стационаре отмечен мезангиально-пролиферативный гломерулонефрит. Суточная потеря белка до 6,0 г в сутки. Функциональные пробы почек не изменены (клубочковая фильтрация 140 мл/мин, креатинин 0,07 ммоль/л). Данные исследования восстановительной емкости плазмы 46 мв, эритроцитарной массы 89 мв, сыворотки 42 мв. Заключение: У больного нефротический синдром в стадии компенсации со стабильным течением.

Пример 4.

Больная Т. 16 лет, и/б 23149.

Поступила в клинику с жалобами на общую слабость, отечность лица. Болеет в течение года после ОРЗ были выявлены изменения в анализах мочи в виде протеинурии до 1 г/сут, микрогематурии. Госпитализирована в связи с ухудшением состояния. Диагноз уточнен морфологически: мембранозно-пролиферативный тип.

При обследовании: суточная потеря белка 4,4 г, микрогематурия, общий белок 53 г/л, альбумины 49, креатинин 0,08 ммоль/л, клубочковая фильтрация 100 мл/мин. Данные исследования восстановительной емкости плазмы составили 48 мв, эритроцитарной массы 85 мв, сыворотки 39 мв.

Через год при повторной госпитализации отмечалось нарастание признаков нефротического синдрома при сохранной функции почек.

Заключение: У больной нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением.

Пример 5.

Больной Б. 36 лет, и/б 29362.

Диагноз: мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит. Нефротический синдром. Активное течение без нарушения функции почек.

Болен в течение 4-х лет. При обследовании суточная потеря белка 3,3 7,1 г, холестерин 14,7 ммоль/л, креатинин 0,09 ммоль/л, клубочковая фильтрация 86 мл/мин.

Данные исследования восстановительной емкости: плазмы 50 мв, эритроцитарной массы 83 мв, сыворотки 41 мв.

Через год после курса лечения при контрольном осмотре сохранялись проявления нефротического синдрома, функция почек была сохранена. При повторной нефробиопсии: усиление пролиферации, увеличение количества пораженных клубочков.

Заключение: У больного нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением.

Пример 6. Больная Р. 28 лет, и/б 485. Поступила в отделение с жалобами на отеки лица и голеней. Объективно: отмечается пастозность лица, отеки стоп и голеней, проглушенность тонов сердца, артериальное давление 150/110 мм рт. ст.

Диагноз: сахарный диабет I типа инсулинзависимый. Диабетический гломерулосклероз. Нефротический синдром без нарушения функции почек.

Данные обследования: Суточная потери белка 6,8 г. Общий белок 51 г/л, альбумины 28, холестерин 15,6 ммоль/л, креатинин 0,09 ммоль/л, клубочковая фильтрация 92 мл/мин.

При исследовании восстановительной емкости отмечено увеличение ее значений для плазмы до 52 мв, эритроцитарной массы до 84 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки 38 мв.

При контрольном исследовании через 2 года не отмечалось уменьшения выраженности нефротического синдрома. Функция почек была сохранена.

Заключение: У больной нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением.

Пример 7.

Больной В. 36 лет, и/б 3888.

Давность заболевания 25 лет, когда после ОРЗ впервые были выявлены изменения в анализах мочи в виде протеинурии (до 0,3 г/л). В дальнейшем частые госпитализации в нефрологический стационар.

Дважды нефробиопсия: Мезангиально-пролиферативный гломерулонефрит. Проводимые курсы лечения отчетливого эффекта не дали.

К настоящему времени сохраняется нефротический синдром (СПБ 5,5 г). Функция почек снижена (С_r 0,21 ммоль/л, клубочковая фильтрация 42 мл/мин).

Данные исследования восстановительной емкости показали увеличение значений плазмы до 45 мв, цельной крови до 74 мв, эритроцитарной массы до 85 мв, сыворотки 45 мв.

Заключение: Нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением.

Пример 8.

Больной Р. 38 лет, и/б 3417. Давность заболевания 5 лет, давность нефротического синдрома год. Диагноз: Мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит. Хроническая почечная недостаточность 1 ст. Данные лабораторного исследования: креатинин 0,18 ммоль/л, клубочковая фильтрация 34 мл/мин. Суточная потеря белка 5,0 г, холестерин 13,4 ммоль/л, общий белок 42 г/л.

При исследовании восстановительной емкости выявлено увеличение ее значений для плазмы 47 мв, цельной крови 75 мв, эритроцитарной массы 33 мв, сыворотки 46 мв.

Заключение: Нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением.

Пример 9.

Больная Г. 43 лет, и/б 218.

В течение 3-х лет знает о повышении артериального давления. Пять месяцев назад после ОРЗ развился нефротический синдром. Диагноз подтвержден нефробиопсией: Мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит.

Данные обследования: креатинин 0,25 ммоль/л, мочевина 14 ммоль/л, клубочковая фильтрация 46 мл/мин. Суточная потеря белка 8,2 г. Общий белок 42 г/л.

При исследовании восстановительной емкости отмечено увеличение ее значений для плазмы 44 мв, цельной крови 73 мв, эритроцитарной массы 84 мв, сыворотки 45 мв.

Спустя 5 месяцев процесс носил стабильный характер. Не было отмечено увеличения азотемии и нарастания признаков нефротического синдрома.

Заключение: У больной нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением.

Пример 10.

Больной Б. 37 лет, и/б 3240.

Давность заболевания более 20 лет, после перенесенного гриппа. Последние 6 лет рецидивирующий нефротический синдром. Год назад выявлены признаки хронической почечной недостаточности. Креатинин 0,28 ммоль/л, клубочковая фильтрация 35 мл/мин, суточная потеря белка 10,0 г.

Исследование восстановительной емкости плазмы выявило ее увеличение до 47 мв, эритроцитарной массы до 84 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки до 42 мв.

Через 6 месяцев при контрольном исследовании у больного отмечалось нарастание креатининамии до 0,56 ммоль/л с падением клубочковой фильтрации до 11,0 мл/мин. Больного начали готовить к проведению гемодиализа.

Заключение: Нефротический синдром в стадии декомпенсации с прогрессирующим течением.

Пример 11.

Больной К. 70 лет, и/б 13908.

Год назад стали нарастать отеки. При обследовании выявлен полный нефротический синдром (суточная потеря белка до 16,8 г, общий белок 37 г/л, альбумины 22). Начальные признаки хронической почечной недостаточности - креатинин 0,14 ммоль/л, клубочковая фильтрация 48 мл/мин. Проведенная нефробиопсия выявила амилоидоз почек распространенного характера. Исследование восстановительной емкости плазмы 45 мв, эритроцитарной массы 83 мв, сыворотки 41 мв.

Через год при повторной госпитализации отмечалось прогрессирование процесса нарастание азотемии (креатинин 0,72 ммоль/л, клубочковая фильтрация 8 мл/мин) при сохраняющейся картине нефротического синдрома.

Заключение: У больного нефротический синдром в стадии декомпенсации с прогрессирующим течением.

Пример 12.

Больной М. 52 лет, и/б 2871. В течение 10 лет страдает сахарным диабетом. Последние 3 года отмечаются отеки лица и нижних конечностей. При обследовании выявилась массивная протеинурия до 12,0 г в сутки, гипопротеинемия (общий белок 37 г/л), а также снижение уровня клубочковой фильтрации до 56 мл/мин, повышение креатинина до 0,16 ммоль/л.

Исследование восстановительной емкости плазмы 46 мв, эритроцитарной массы 85 мв, сыворотки 42 мв.

Через 2 года больной умер при нарастании явлений хронической почечной недостаточности.

Заключение: Нефротический синдром в стадии декомпенсации с прогрессирующим течением.

Нами проведены исследования ₅ цельной крови, ее сыворотки, плазмы, эритроцитарной массы, а также определение диеновых конъюгатов и устойчивости эритроцитов к перекисному гемолизу, уровня суточной протеинурии, показателей холестерина и -липопротеидов, функциональных проб почек у больных с нефротическим синдромом различной этиологии (гломерулонефрит, амилоидоз, диабетический гломерулосклероз). Всем пациентам для уточнения диагноза осуществлялась пункциональная биопсия почек с последующей гистологической оценкой биоптанов.

Контрольную группу (30 человек) составили доноры, исследование крови которых проводилось как и у группы больных.

У больных I группы, представленных нефротическим синдромом со стабильным течением в стадии компенсации, отмечено увеличение значений восстановительной емкости плазмы в пределах 45 47 мв, эритроцитарной массы 86 91 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки в пределах 41 42 мв.

У больных II группы, представленных нефротическим синдромом с прогрессирующим течением в стадии компенсации, отмечено увеличение значений восстановительной емкости плазмы до 48 52 мв, эритроцитарной массы до 83 - 85 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки до 38 41 мв.

У больных III группы, представленных нефротическим синдромом со стабильным течением в стадии декомпенсации, отмечено увеличение значений восстановительной емкости плазмы до 44 47 мв, цельной крови 73 75 мв, а эритроцитарной массы 83 85 мв.

У больных IV группы, представленных нефротическим синдромом с прогрессирующим течением в стадии декомпенсации, отмечено увеличение значений восстановительной емкости плазмы до 45 47 мв, эритроцитарной массы до 83 - 85 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки до 41 42 мв. При клиническом анализе у больных этой группы отмечалась прогрессирующая почечная недостаточность, уменьшение уровня диеновых конъюгатов.

Полученные результаты представлены в табл. 1. Анализ результатов показывает, что у больных I группы отмечался по клинической картине нефротический синдром в стадии компенсации. У больных данной группы по сравнению с контрольной группой достоверное увеличение показателей диеновых конъюгатов и содержания холестерина, уменьшение уровня альбумина, увеличение значений восстановительной емкости плазмы, эритроцитарной массы, уменьшение Dv₅ сыворотки до 41 42 мв.

У больных второй группы отмечался нефротический синдром в стадии компенсации с прогрессирующим течением. По сравнению с контролем у этих больных достоверно снижен клиренс креатинина, увеличено значение содержания холестерина и уменьшен уровень альбумина, причем уровень холестерина и альбумина достоверно не отличается от показателей больных I группы. Кроме того, уровень диеновых конъюгатов не отличается от соответствующего показателя контрольной группы. При этом отмечено увеличение значений ₅ плазмы до 48 - 52 мв, эритроцитарной массы до 83 85 мв, уменьшение значений восстановительной емкости сыворотки до 38 41 мв.

У больных III группы отмечался нефротический синдром в стадии декомпенсации со стабильным течением. У данных больных еще больше, чем у больных II группы, уменьшаются показатели клиренса креатинина, альбумина. Уровень холестерина выше соответствующего значения контрольной группы, но ниже, чем у больных I и II групп. Отмечается умеренная артериальная гипертензия. Однако, уровень диеновых конъюгат, как и в случае II группы, статистически не отличался от соответствующего значения контрольной группы. Отмечалось увеличение значений восстановительной емкости плазмы до 44 47 мв, цельной крови до 73 75 мв, сыворотки 45 47 мв, эритроцитарной массы до 83 85 мв.

У больных IV группы отмечался нефротический синдром в стадии декомпенсации с прогрессирующим течением. У больных данной группы еще больше снижается клиренс креатинина. Уровень альбумина статистически не отличается от соответствующего значения больных III группы. Уровень диеновых конъюгат по сравнению с III и контрольной группами достоверно ниже, по сравнению с III группой артериальное давление было еще выше и носило злокачественный характер. При этом отмечено увеличение значений ₅ плазмы до 45 47 мв, эритроцитарной массы до 83 85 мв, уменьшение аналогичных значений сыворотки до 41 42 мв.

Таким образом, при помощи известных биохимических и функциональных тестов не удается правильно оценить ход течения нефротического синдрома, а именно: стадии компенсации и декомпенсации, стабильное и прогрессирующее течение заболевания. С помощью предлагаемого способа можно быстро, в течение 20 минут (при способе-прототипе 2 3 часа) провести дифференциальную диагностику степени поражения почек при нефротическом синдроме путем сравнения измеренных значений ₅ сыворотки, плазмы, эритроцитарной массы, цельной крови с соответствующими значениями контрольной группы (см. табл. 2).

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известными обладает более высокой точностью 92% (при способе-прототипе 50%), информативностью, экспрессностью. Сам способ прост в исполнении, не требует использования дефицитного оборудования и реактивов.

Источники информации

1. Аметов А.С. Клинический справочник и доклады симпозиума "В₂-микроглобулин в клинической практике". М. 1984, с.38-65.

2. Рейзельман С.Д. Простой вариант методики исследования функции почек.

Врач.дело, 1940, N 1, с.17-22.

3. Мухин Н. А. и Тареева И.Е. Диагностика и лечение болезней почек. М. Медицина, 1985, с.240.

4. Гаврилов В.П. и Мешкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение гидроперекисей липидов в плазме крови. Лаб.дело, 1983, N 3, с.33-63.