производные 5-амино-4-оксигексановой кислоты и способ их получения

Формула изобретения

1. Производные 5-амино-4-оксигексановой кислоты формулы I



где R₁ обозначает водород, (низший алкокси) карбонил, бензофураноил, пиридилкарбонил, морфолинилкарбонил, тетрагидроизохинолилкарбонил, морфолиносульфонил или N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил;

B₁ обозначает связь или двухвалентный радикал аминокислоты валин, N-конец которого связан с R₁, а C-конец с аминогруппой на атоме углерода, несущем R₂CH₂-;

R₂ и R₃, независимо друг от друга обозначают циклогексил или фенил, причем фенил может быть замещен в п-положении заместителем, выбранным из низшего алкоксила, галогена, трифторметила и циано-группы;

A₁ и A₂ вместе обозначают двухвалентный радикал дипептида, выбранного из группы: Val-Phe, Val-Cha, Val-(p-F)Phe, Val-(p-CH₃O)Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe и Val-Tyr; N конец которого соединен с группой -C О, а C-конец с группой NR₄R₅;

R₄ и R₅ вместе со связанным атомом азота означают тиоморфолино или морфолино, или защищенные низшим алканоилом гидроксильные группы этих соединений.

2. Соединение по п. 1, в котором R₁ означает водород, трет-бутоксикарбонил, пиридин-3-карбонил, морфолинокарбонил, 3-бензофураноил или 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбонил; B₁ означает связь; R₂ и R₃ независимо друг от друга означают фенил или циклогексил, причем фенил незамещен или может быть замещен в п-положении радикалом, выбранным из группы: метокси, фтор, трифторметил и циано; A₁ и A₂ вместе обозначают двухвалентный радикал дипептида, выбранного из группы: Val-Phe, Val-Cha, Val-(p-F) Phe, Val-(p-CH₃O) Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe, Val-Tyr, N-конец которого соединен с группой C О, а C-конец с группой NR₄R₅, R₄ и R₅, вместе со связанным атомом азота означают тиоморфолино или морфолино.

3. Соединение по п. 1, где R₁ обозначает трет-бутоксикарбонил; B₁ обозначает связь; R₂ и R₃ независимо друг от друга обозначают фенил; A₁ и A₂ вместе образуют двухвалентный радикал дипептида (L)-Val-(L)-Phe, который N-концом связан с группой -C О, а C-концом с группой NR₄R₅, и R₄ и R₅ вместе со связующим атомом азота обозначают морфолино.

4. Соединение по п. 1, где R₁ обозначает трет-бутоксикарбонил; B₁ обозначает связь; R₂ обозначает фенил; R₃ обозначает р-метоксифенил; A₁ и A₂ вместе образуют двухвалентный радикал дипептида (L)-Val-(L)-Phe, который N-концом связан с группой -C О, а C-концом с группой NR₄R₅, и R₄ и R₅ вместе со связующим атомом азота обозначают морфолино.

5. Способ получения производных 5-амино-4-оксигексановой кислоты формулы I



где R₁ обозначает водород, (низший алкокси)-карбонил, бензофураноил, пиридикарбонил, морфолинкарбонил, тетрагидроизохинолилкарбонил, морфолиносульфонил или N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил;

B₁ обозначает связь или двухвалентный радикал аминокислоты валин, N-конец которой связан с R₁, а C-конец с аминогруппой на атоме углерода, несущем R₂ CH₂-;

R₂ и R₃, независимо друг от друга обозначают фенил или циклогексил, причем фенил может быть замещен в p-позиции заместителем, выбранным из низшего алкоксила, галогена, трифторметила и циано-группы;

A₁ и A₂ вместе обозначают двухвалентный радикал дипептида, выбранного из группы: Val-Phe, Val-Cha, Val-(p-F) Phe, Val-(p-CH₃O) Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe и Val-Tyr, N-конец которого соединен с группой -C О, а C-конец с группой NR₄R₅,

R₄, R₅ вместе со связанным атомом азота означают тиоморфолино или морфолино, или производные этих соединений, замещенные низшим алканоилом и оксигруппой,

отличающийся тем, что карбоновую кислоту формулы II



или ее реакционноспособное производное,

где R₁ обозначает водород (низший алкокси)-карбонил, бензофураноил, пиридилкарбонил, морфолинилкарбонил, тетрагидроизохинолилкарбонил, морфолиносульфонил или N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил;

B₁ обозначает связь или двухвалентный радикал аминокислоты валин, N-конец которой связан с R₁, а C-конец с аминогруппой на атоме углерода, несущем R₂CH₂ -;

R₂ и R₃ независимо друг от друга обозначают фенил или циклогексил, причем фенил может быть замещен в п-позиции заместителем, выбранным из низшего алкоксида, галогена, трифторметила и цианогруппы,

конденсируют с аминосоединением формулы III



или его реакционноспособным производным,

где A₁ и A₂ вместе образуют двухвалентный радикал дипептида формулы Val-Phe, Val-Cha, Val-(p-F) Phe, Val-(p-CH₃O) Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe, Val-Tyr, который N-концом связан с группой -C О, а C-концом с группой NR₄R₅,

R₄ и R₅ вместе со связующим атомом азота обозначают тиоморфолино или морфолино, причем свободные функциональные группы в исходных материалах формул II и III, за исключением участвующих в реакции, в случае необходимости находятся в защищенной форме, и при желании отщепляют имеющиеся защитные группы.

6. Производные по п. 1, проявляющие активность при подавлении Asp-протеазы из ВИЧ-1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к негидролизующимся аналогам расщепляемых аспартатпротеазами пептидов, а именно к производным 5-амино-4-оксигексановой кислоты, проявляющим активность при подавлении -протеазы из ВИЧ-1, и способу их получения.

СПИД, как известно в настоящее время, представляет собой вызываемое ретровирусом ВИЧ ("вирус иммунодефицита человека") заболевание иммунной системы. Это заболевание, по оценкам ВОЗ, поразило около 10 миллионов людей и распространяется все далее. Заболевание практически всегда приводит к смерти пациента. Для терапии, сверх прежних ограниченных возможностей для облегчения симптомов СПИД и известных предохранительных возможностей, представляют особый интерес поиски препаратов, которые сами препятствуют размножению вируса, не повреждая интактных клеток и тканей пациентов.

Интересными являются соединения, которые блокируют размножение вируса тем, что они препятствуют объединению инфекционных вирусных частиц.

ВИЧ-1 и ВИЧ-2, смотря по обстоятельствам, в своем геноме имеют область, которая кодирует "gag-протеазу". Эта "gag-протеаза" ответственна за правильное протеолетическое расщепление протеинов-предшественников, которые происходят из кодирующих "Group Specific Antigens" (gag) отрезков генома. При этом высвобождаются структурные протеины вирусного ядра, по-английски "Со е". Сама "gag-протеаза" является составной частью кодированного отрезком pol-генома ВИЧ-1 и ВИЧ-2 протеина-предшественника, который также содержит отрезки "реверсивной транскриптазы" и "интегразы" и расщепляется по всей вероятности аутопротеолитически. "Gag-протеаза" расщепляет основной протеин ядра ("Маjor Core Protein") р24 ВИЧ-1 и ВИЧ-2, предпочтительно N-терминальный, пролиновых остатков, например, в двухвалентных радикалах Phe-Pro, Leu-Pro или Tyr-Pro. Речь идет о протеазе с каталитически активным аспартатным остатком в активном центре, так называемой аспартатпротеазе.

На основании центральной роли "gag-протеазы" при процессировании указанных "Со е-протеинов" ("протеинов центральной части"), исходят из того, что эффективное ингибирование этого фермента ин виво препятствует соединению зрелых вибрионов, так что соответствующие ингибиторы могут использоваться терапевтически.

Предпосылкой для терапевтической эффективности ин виво является достижение хорошей возможности биопользования, например, высокого уровня в крови, чтобы таким образом достичь в инфицированных клетках достаточно высоких концентраций.

Уже синтезирован ряд "gag-протеаз" ингибиторов, которые содержат центральные группы, представляющие собой непротеолитически расщепляемые пептид-изоэфиры. До сих пор, несмотря на интенсивные изыскания, еще не удалось найти пригодных для применения на людях ингибиторов аспартатпротеазы для борьбы со СПИДом для большей части инфицированных. В этом случае решающими являются прежде всего фармакодинамические проблемы.

Целью изобретения является изыскание новых ингибиторов ВИЧ-1 аспартатпротеазы.

Согласно изобретению предлагаются производные 5-амино-4-оксигексановой кислоты общей формулы:



где R₁ означает водород, низший алкоксикарбонил, бензофураноил, пиридилкарбонил, морфолинилкарбонил, тетрагидроизохинолилкарбонил, морфолиносульфонил или N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил, В₁ означает связь или двухвалентный радикал -аминокислоты валил, N-конец которой соединен с R₁, a С-конец с аминогруппой на атоме углерода, несущем R₂CH₂, R₂ и R₃ независимо друг от друга означают циклогексил или фенил, причем последний может быть незамещенным или замещенным в п-положении галогеном, трифторметилом, циано или низшей алкоксигруппой, A₁ и A₂ вместе обозначают двухвалентный радикал дипептида, выбранного из группы Val-Phe, Val-Cha, Val-(п-F)Phe, Val-(п-СН₃Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe и Val-Tyr, N-конец которого соединен с группой -С= O, а С-конец с группой NR₄R₅ и R₄ и R₅ вместе с связанным атомом азота означают тиоморфолино- или морфолиногруппу или защищенные низшим алканоилом на гидроксигруппе производные этих соединений.

В описании изобретения используемое при определении групп или остатков, например низший алкоксил, низший алкоксикарбонил, выражение "низший" обозначает, что если не указано ничего другого, эти группы содержат вплоть до (включительно) 7 и предпочтительно 4 С-атомов.

В случае необходимости имеющиеся асимметрические С-атомы в заместителях R₁, B₁, R₂, R₃, A₁ и/или A₂, могут быть в (R), (S) или (R, S)-конфигурации. Таким образом, предлагаемые соединения могут быть в виде смесей изомеров или в виде чистых изомеров, в особенности в виде смесей диастереомеров, энантиомерных пар или чистых энантиомеров.

Используемые в описании изобретения общие выражения и обозначения имеют предпочтительно нижеследующие значения, причем указанные выше и ниже остатки могут применяться в любых комбинациях или в виде отдельных остатков вместо общих определений:

Низший алкоксикарбонил R₁ содержит предпочтительно разветвленный низший алкильный остаток, в особенности втор. или трет.-низший алкильный остаток, и представляет собой, например, бутоксикарбонил, как трет.-бутоксикарбонил или изобутоксикарбонил. Особенно предпочтителен трет.-бутоксикарбонил.

Пиридилкарбонил представляет собой, например, пиридил-3-карбонил, морфолинилкарбонил, например морфолинокарбонил; бензофураноил-, например это 3-бензофураноил, тетрагидроизохинолинокарбонил-, например тетрагидроизохинолил-3-карбонил, предпочтительно тетрагидроизохинолил-3-карбонил.

Соединение формулы I, где R₁ обозначает морфолиносульфонил, а остальные остатки имеют выше указанные значения, особенно предпочтительны.

N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил представляет собой, например, N-(2-пиридилметил)-N-метиламинокарбонил. Соединения формулы I, где R₁ обозначает N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил, а прочие остатки имеют выше указанные значения, при определении соединений формулы I особенно предпочтительны.

Двухвалентный радикал B₁ a-аминокислоты, который на N-конце связан с R₁, а на С-конце связан с аминогруппой несущего R₂-CH₂-атома углерода, предпочтительно валин (Val) находится в D-, L- или (D,L)-, предпочтительно в L-форме, и в особенности соединен с остатками R₁, выбираемыми из /низший алкокси/-карбонила, например трет.-бутоксикарбонил, или гетероциклилкарбонила, как морфолинокарбонил.

Если B₁ обозначает связь, то R₁ прямо связан с аминным азотом, связывающим атом углерода несущего остатка R₂-CH₂- в формуле I.

Особенно предпочтительными являются такие комбинации R₂ и R₃, при которых по крайней мере один из остатков R₂ или R₃ является фенилом, который замещен остатком, выбираемым из галогена, в частности фтора, трифторметила, и цианогруппы, причем предпочтителен заместитель выбранный из фтора или цианогруппы.

Еще более предпочтительным является R₂, выбранный из фенила, 4-метоксифенила, 4-фторфенила, циклогексила и 4-трифторметилфенила, в то время как R₃ выбран из фенила, 4-метоксифенила, циклогексила, 4-фторфенила, 4-трифторфенила и 4-цианфенила.

В первую очередь R₂ выбирается из фенила, 4-фторфенила и циклогексила, в то время как R₃ выбирается из фенила, циклогексила, 4-фторфенила и 4-цианфенила.

В самую первую очередь предпочтительны комбинации: R₂ фенил и R₃ фенил; R₂ циклогексил и R₃ 4 цианофенил; R₂ циклогексил и R₃ 4-фторфенил; R₂ и R₃, смотря по обстоятельствам, циклогексил. Альтернативно или дополнительно к этому также главным образом предпочтительны комбинации: R₂ фенил и R₃ 4-фторфенил; R₂ фенил и R₃ 4 цианофенил; R₂ 4-фторфенил и R₃ 4-трифторметилфенил; R₂ 4-трифторметилфенил и R₃ фенил; R₂ 4-трифторметилфенил и R₃ 4-фторфенил; R₂ 4-трифторметилфенил и R₃ 4-трифторметилфенил.

Гидроксильная группа в соединениях формулы I на атоме углерода, который является соседним с атомом углерода, несущим остаток R₂CH₂-, может быть свободной или в защищенной форме, причем в качестве защитных для гидроксильных групп принимают во внимание низший алканоилокси, как ацетилокси.

Образованный из A₁ и A₂ двухвалентный радикал дипептида, центральная пептидная связь которого восстановлена и N-конец связан с группой -С=O, а С-конец связан с группой NR₄R₅, состоит предпочтительно из двух вышеуказанных гидрофобных a--аминокислот, в особенности из N-концевого аминокислотного радикала, выбираемого из Gly (восст.), Val (восст.) и Ile (восст.), и С-концевой аминокислоты, выбираемой из глицина, фенилаланина, тирозина, n-фторфенилаланина, n-метоксифенилаланина.

Указанные значения A₁ и A₂, которые вместе образуют двухвалентный радикал дипептида формулы, выбраны из группы Val-Phe, Ile-Phe, Val-Cha, Val-Gly, Val-(n-F-Phe), Val-(n-CH₃O-Phe)- Val-Tyr, Ile-Gly или Val-Val, где аминокислоты находятся в (D)- или (L)-, в особенности (L)-форме, за исключением (L)-Val-Phe, где Phe находится в (L)- или (D)-форме.

Предпочтительная форма осуществления изобретения относится к таким соединениям формулы I, где B₁, обозначает связь B₁ и A₂, смотря по обстоятельствам, обозначают один из указанных двухвалентных радикалов --аминокислоты или вместе обозначают один из указанных двухвалентных радикалов дипептида с восстановленной центральной амидной связью.

Предпочтительны соединения, где R₄ и R₅ образуют вместе со связывающим атомом азота незамещенную морфолиногруппу.

Таким образом, предпочтительными являются соединения формулы I, в которых R₁ обозначают водород, трет.-бутоксикарбонил, пиридин-3-карбонил, морфолинокарбонил, 3-бензофураноил или 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбонил, B₁ означает связь, R₂ и R₃ независимо друг от друга означают фенил или циклогексил, причем фенил незамещен или может быть замещен в п-положении радикалом, выбранным из группы метокси, фтор, трифторметил и циано, A₁ и A₂ вместе обозначают двухвалентный радикал дипептида, выбранного из группы Val-Phe, Val-Cha, Val-(пр-F)Phe, Val-(пр-CH₃O)Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe и Val-Tyr, N-конец которого соединен с группой -С=O, а С-конец с группой NR₄R₅, и R₄ и R₅ вместе со связанным со связанным атомом азота означают тиоморфолино или морфолино.

Наиболее предпочтительным является соединение формулы I, в котором R₁ означает трет.-бутоксикарбонил, R₂ и R₃ соответственно фенил, A₁ и A₂ двухвалентный радикал дипептида (L)-Val-(L)-Phe, N-конец которого соединен с группой -С=O, а С-конец с группой NR₄R₅ a R₄ и R₅ вместе со связанным атомом азота означают морфолино.

Также предпочтительным является соединение формулы I Boc-Phe[C](пр-CH₃O)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолино-4-иламид, в котором R₁ означает трет.-бутоксикарбонил, R₂ фенил, R₃ - п-метоксифенил, A₁ и A₂ вместе означают радикал пептида (L)-Val-(L)-Phe, N-конец которого связан с группой -С=O, а С-конец соединен с группой NR₄R₅, a R₄ и R₅ вместе со связанным атомом азота означают морфолино.

Особенно важно соединение формулы I, где R₁ обозначает трет.-бутоксикарбонил, B₁ обозначает связь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Также особенно важно соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ cвязь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ п-фторфенилаланин и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Также особенно важно соединение формулы I, где R₁ обозначает трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ п-метоксифенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота означают морфолино.

Также еще особенно важным является соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ циклогексилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Также особенно важным является соединение формулы I, где R₁ обозначает трет. -бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают тиоморфолино.

Также особенно важно соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ циклогексил; R₃ п-фторфенил; A₁ изолейцин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Особенно важным также является соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ фенил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Также особенно важным является соединение формулы I, где R₁ обозначает трет. -бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ п-фторфенил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Особенно важным еще является соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₂ п-фторфенил; R₃ п-фторфенил; A₁ валин; A₂ п-фторфенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Особенно важным также является соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил, B₁ связь; R₃ п-цианофенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обозначают морфолино.

Также особенно важным является соединение формулы I, где R₁ трет.-бутоксикарбонил. B₁ связь; R₂ и R₃ фенил; A₁ валин; A₂ фенилаланин; и R₄ и R₅ вместе со связывающим атомом азота обеспечивают тиоморфолино.

Соединения предлагаемого изобретения обладают ингибирующим действием в отношении ретровирусных аспартатпротеаз, в особенности подавляющими gag-протеазы действиями. В первую очередь они ингибируют в нижеописанном тесте в концентрации 10^-6-10⁹ М действие gag-протеазы ВИЧ-1 и поэтому являются пригодными средствами против вызываемых этими или родственными ретровирусами заболеваний, такими как СПИД.

I. Способность соединений формулы ингибировать протеолитическую активность, например, ВИЧ-1-протеазы, можно продемонстрировать, например, согласно описанному J. Hansen и др. The EMBO Journal 7, 1785 1791 (1988) cпособу. При этом подавление действия ВИЧ-1 протеазы измеряется на субстрате, который представляет собой экспримированный в E. coli слитый протеин из gag-протеина-предшественника и MS-2. Субстрат и продукты его расщепления разделяют путем полиакриламидного гель-электрофореза и проявляют путем иммуноблокирования с моноклональными антителами против MS-2.

В еще более просто осуществляемом тесте, который позволяет иметь точные количественные показатели, в качестве субстрата для gag-протеазы используют синтетический пептид, который соответствует одному из мест расщепления gag-протеина-предшественника. Этот субстрат и продукты его расщепления можно измерять путем жидкостной хроматографии высокого давления (НРLC). Например, в качестве субстрата для рекомбинантно ВИЧ-1-протеазы (получение согласно Billich S. и др. J. Biol. Chem, 263 (34), 18905 17908. 1990) используют синтетический хромофорный пептид (например, HKARVL/NO₂/FEANles (Bachem, Швейцария)) или Икозаптид, как RRSNQVSNYPIBQNIQGRR (получен путем пептидного синтеза известными способами), который соответствует одному из мест расщепления gag-протеина-предшественника. Этот субстрат и продукты его расщепления могут измеряться путем жидкостной хроматографии высокого давления (НРLO).

Для этой цели испытуемый ингибитор формулы I растворяют в диметилсульфоксиде; ферментный тест осуществляют тем, что пригодные разбавления ингибитора в 20 мМ -морфолиноэтансульфокислоты, (МES)-буфер, рН 6,0 добавляют к смеси для анализа из 67,2 mM вышеуказанного хлороформного пептида в 0,3 М ацетата натрия, 0,1 М NaCl, pH 7,4; или 122 M вышеуказанного Икозапептида в 20 мМ МЕS-буфера, рН 6,0; количество смеси составляет 100 мкм. Реакция инициируется за счет добавки в первом случае 2 мкл, во втором случае 10 мкл ВИЧ-1-протеазы и в первом случае спустя 15 мин инкубации при 37^oС реакцию останавливают путем добавления 100 мкл 0,3 М НСlO₄, во втором случае спустя час инкубации при 37^oC реакцию останавливают путем добавления 10 мкл 0,3 М НСlO₄. Продукты реакции после центрифугирования пробы в течение 5 мин при 10000 х g в 100 мкл (реакционная смесь с хлороформным пептидом), соответственно, 20 мкл (смесь с Икозапептидом) полученной надосадочной жидкости и после внесения в НРLC-колонку 125 х 4,6 мм с Нуклеозилом.

C18-5 (Macherey and Nagel, Duren) и элюирования определяют количественно руководствуясь высотой пика продукта расщепления при 280 нм (смесь с хлороформным пептидом) или при 215 нм (смесь с Икозапептидом); градиент: 100 EI. 1 > 50 EI.1/50 EI.2/E1.1: 10 ацетонитрила, 90 воды, 0,1 трифторукусусной кислоты (ТФК); EI1.2: 75 ацетонитрила, 25 воды, 0,08 ТФК в течение 15 мин; скорость пропускания 1 мл в минуту (EI. элюент).

При этом для соединений формулы I предпочтительно определяются IC₅₀-значения (IC₅₀ такая концентрация, которая снижает активность ВИЧ-1-протеазы по сравнению с контролем без ингибитора на 50) примерно 10^-6-10^-9 М, в особенности 10^-7-10^-8 M.

II. В другом тесте было показано, что соединения изобретения защищают клетки, которые обычным путем инфицируются ВИЧ, от такой инфекции или по меньшей мере замедляют такую инфекцию. При этом человеческую Т-клетку-лейкемии линии М-Т (Science, 229, 563. 1985), ВИЧ-1 или c ВИЧ-1 в присутствии одного из предлагаемых в изобретении соединений и спустя несколько дней оценивают на жизнеспособность таким образом обработанные клетки.

Для этой цели МТ-2 клетки в RPMI 1640-среде (Gibco, Швейцария; RPMI 1640 содержит смесь аминокислот без L-Gbn), которая дополнена 10 активированной при нагревании зародышевой телячьей сыворотки, 1-глютамином, Hepec (2-[4-(2-оксиэтил)-1-пиперазино] -этансульфокислота) и стандартным антибиотиком, выдерживают при 37^oC в увлажненном воздухе с 5 СО₂ 5 мкл соответствующего тест-соединения в культуральной среде и 100 мкл ВИЧ-1 в культуральной среде и 100 мкл ВИЧ-1 в культуральной среде (800 ТСID 50/мл) (ТСIL 50 инфекционная доза клеточной культуры 50 доза, которая инфицирует 50 МТ-2-клеток) вносят в 4 х 10³ экспоненциально растущих МТ-2-клеток в 50 мкл культуральной среды на углубление на планшетах для микротитра с 96-ю отверстиями. Параллельные смеси на другом планшете для микротитра с клетками и тест-соединением содержат 100 мкл культуральной среды без вируса. После инкубации в течение 4-х дней определяют в 10 мкл надосадочной жидкости клеток активность реверсной транскриптазы (РТ). РТ-активность определяется в 50 мМ Трис (a, a, a-трис(оксиметил)-метиламин, ультрачистый, Merck, ФРГ), pH 7,8; 75 мМ КСl, 2 мМ дитиотреитола, 5 мМ MgCl₂; 0,05 Nonedet P-40 (детергент; Сигма, Швейцария); 50 мкг/мл полиадениловой кислоты (Фармация, Швейцария); 1,6 мкг/мл dT (12 18) (Сигма, Швейцария). Смесь отфильтровывают через 0,45 Acrodisc-фильтр (Gelleman Science Inc. Ann. Arbor) и хранят при -20^oC. К аликвотам этого раствора добавляют 0,1 (по объему) /альфа-³²P/dTTP для достижения радиоактивной конечной активности 10 Ci/мл. 10 мкл культуральной надосадочной жидкости переносят на новый планшет с 96-ю отверстиями для микротитра и туда же добавляют 30 мкл указанного RT-"коктейля". После смешения планшет инкубируют в течение 1,5 3 ч при 37^oC. 5 мкл этой реакционной смеси переносят на ватман DEE81 (Ватман). Высушенные фильтры промывают три раза по 5 мин с помощью 300 мМ NaCl/25 мМ три-/цитрата натрия/ и 1 раз с помощью 95-ного этанола и снова высушивают на воздухе. Оценку осуществляют в Matrix Packard 96 well coumter (Паккард). ЭД₉₀-значения рассчитывают и в качестве самой низкой концентрации соответствующего тест-соединения определяют такую, которая снижает RT-активность на 90 по сравнению с необработанными клеточными смесями тест-веществам. RT-активность при этом является мерой размножения ВИЧ-1.

Предлагаемые согласно изобретению соединения при этом показывают ЭД₉₀ примерно 10^-5-10^-8 M, предпочтительно примерно 10^-7-10^-8 М.

Соединения изобретения проявляют предпочтительные фармакокинетические свойства и можно ожидать, что они ин виво оказывают указанные ингибирующие действия. Так, например, уровень в крови при внутривенном или интраперитональном введении мышам 20 мг/кг соединения формулы I спустя 10 мин после введения равен 4 мкг/мл крови и выше. Далее, при пероральном введении 120 мг/кг соединения формулы I концентрация спустя 90 мин примерно такая же высокая или выше, чем вышеупомянутая ЭД₉₀.

Определение уровня в крови осуществляют, например, следующим образом: исследуемые соединения растворяют в органическом растворителе, как диметилсульфоксид (ДМСО). Раствор оксипропил-b-циклодекстрина (20 вес./объем) в воде добавляют вплоть до получения желательной концентрации биологически активного вещества (например, 2 мг/мл для парентерального введения, 12 мг/мл для орального введения) при одновременном установлении концентрации 5 ДМСО (по объему). Соединения, которые в этих условиях нерастворимы, при парентеральном введении вводятся только интраперитонально; растворимые соединения дополнительно внутривенно. После введения соединений (например, 20 мг/кг внутривенно или интраперитонально, или 120 мг/кг перорально) в различные моменты времени, например спустя 10 мин при парентеральном введении или спустя 90 мин при пероральном введении, отбирают кровь. На момент времени используют кровь трех мышей и либо для каждой мыши по отдельности, либо из трех объединенных проб крови трех мышей, после добавки растворителя, например ацетонитрила, и последующего центрифугирования, получают надосадочную жидкость. Концентрация биологически активного вещества определяется с помощью НРLC, например на колонке с Nucleosil 5C₁₈ длиной 120 мм и диаметром 4,6 мм с помощью смеси или 60 ацетонитрил (40 вода) 0,05 трифторуксусная кислота (по объему), или 50 ацетонитрил (40 вода) 0,05 трифторуксусная кислота (по объему) в качестве элюирующего средства при скорости истечения 1 мл/мин и детектировании и определении количества при 200 нм.

Другим объектом данного изобретения является способ получения соединения формулы I, заключающийся в том, что карбоновую кислоту формулы:



или ее реакционноспособное производное,

где R₁ обозначает водород (низший алкокси)-карбонил, бензофураноил, пиридилкарбонил, морфолинилкарбонил, тетрагидроизохинолилкарбонил, морфолиносульфонил или N-(пиридилметил)-N-метиламинокарбонил;

B₁ обозначает связь или двухвалентный радикал -аминокислоты валин, N-конец которой связан с R₁, a C-конец с аминогруппой на атоме углерода, несущем R₂CH₂-; R₂ и R₃ независимо друг от друга обозначают фенил или циклогексил, причем фенил может быть замещен в п-положении заместителем, выбранным из низшего алкоксила, галогена, трифторметила и цианогруппы, конденсирует с амино-соединением формулы:



или его реакционно-способным производным,

где A₁ и A₂ вместе образуют двухвалентный радикал дипептида формулы: Val-Phe, Val-Cha, Val-(п-F)Phe, Val-(пCH₃O)Phe, Val-Gly, Ile-Gly, Val-Val, Ile-Phe и Val-Tyr, который N-концом связан с группой -С=O, а С-концом с группой NR₄R₅, и R₄ и R₅ вместе со связующим атомом азота обозначают тиоморфолино или морфолино, причем свободные функциональные группы в исходных соединениях формул VI и VII, за исключением участвующих в реакции, в случае необходимости находятся в защищенной форме и при желании отщепляют имеющиеся защитные группы.

Соединения формулы I или их производные с защищенной гидроксильной группой и соли таких соединений по меньшей мере с одной солеобразующей группой могут быть получены и другими известными способами, например:

a) для получения соединений формулы:



где R₁ имеет указанные для соединений формулы I значения R₁ кроме водорода; гидроксильная группа на атоме углерода, который является соседним к атому углерода, несущему остаток R₂-CH₂-, свободная или находится в защищенной форме, а остальные остатки имеют указанные для соединений формулы I значения,

карбоновую кислоту формулы: R"₁ OH (II);

или реакционно-способное производное этой кислоты, где R"₁ имеет те же значения, что и R₁ в соединении I, кроме водорода, конденсируют с аминосоединением формулы:



или его реакционно-способным производным, где остатки имеют указанные для соединений формулы I значения, причем в исходных соединениях формул II и III свободные функциональные группы, за исключением принимающих участие в реакции, находятся в защищенной, в случае необходимости, форме, и в желательном случае имеющие защитные группы отщепляют, или

б) для получения соединений формулы:



где B"₁ обозначает такие же остатки, как и B₁ в соединениях формулы I, кроме связи; гидроксильная группа на С-атоме, который является соседним к атому углерода, несущему остаток R₂-CH₂-, свободная или находится в защищенной форме, а остальные остатки имеют указанные для соединений формулы I значения,

карбоновую кислоту формулы: R₁-B"₁-OH (IV), или ее реакционно-способное производное этой формулы, где R₁ имеет указанные для соединений формулы I значения, и B"₁ имеет прежде всего указанные последними значения, конденсируют с аминосоединением формулы:



или его реакционноспособным производным, где остатки имеют указанные для соединений формулы I значения, причем свободные функциональные группы в исходных материалах формул IV и V, за исключением принимающих участие в реакции, в случае необходимости находятся в защищенной форме, и в желательном случае отщепляют имеющиеся защитные группы; или

в) для получения соединений формулы:



где A"₁ и A"₂ имеют значения A₁ и A₂ в соединениях формулы I, причем A"₁, однако, не обозначает никакой связи и пептидная связь между A"₁ и A"₂ находится не в восстановленной форме; гидроксильная группа на С-атоме, который является соседним к несущему остаток R₂-CH₂-атому углерода, свободна или находится в защищенной форме, а прочие остатки имеют указанные для соединений формулы I значения, карбоновую кислоту формулы:



или ее реакционноспособное производное, где остатки имеют указанные значения, конденсируют с аминосоединением формулы:



или его реакционноспособным производным, где остатки имеют указанные выше значения, причем свободные функциональные группы в исходных материалах формул VIII и IX, за исключением участвующих в реакции, находятся в защищенной форме, и в желательном случае имеющиеся защитные группы отщепляют, или

г) карбоновую кислоту формулы:



или ее реакционноспособное производное, где остатки имеют указанные для соединений формулы I значения, конденсируют с аминосоединением формулы:



или его реакционноспособным производным, причем остатки имеют указанные для соединений формулы I значения; причем свободные функциональные группы в исходных материалах формул Х и XI, за исключением участвующих в реакции, в случае необходимости находятся в защищенной форме, и в желательном случае имеющиеся защитные группы отщепляют; или

д) в соединении формулы I, где заместители имеют вышеуказанные значения, с тем условием, что в соответствующем соединении формулы I по меньшей мере одна функциональная группа защищена защитными группами, отщепляют имеющиеся защитные группы;

и/или при желании полученное по одному из представленных способов а) и б) соединение формулы I по меньшей мере с одной солеобразующей группой переводят в его соль и/или полученную соль переводят в свободное соединение или в другую соль и/или в случае необходимости полученные смеси изомеров соединений формулы I разделяют и/или предлагаемое согласно изобретению соединение формулы I превращают в другое, согласно изобретению, соединение формулы I.

Вышеприведенные способы описываются подробнее ниже.

Способ а) (Получение амидной связи).

В исходных материалах формул II и III функциональные группы, за исключением групп, которые должны принимать участие в реакции или не реагируют в реакционных условиях, независимо друг от друга защищены защитными группами.

К защитным группам для функциональных групп в исходных материалах, взаимодействия которых нужно избегать, в особенно карбокси-, амино- и окси-группы, относятся в особенности такие защитные группы, которые обычно применяются при синтезе пептидных соединений, а также цефалоспоринов, пенициллинов, и производные нуклеиновых кислот и сахаров. Эти защитные группы могут иметься уже в предыдущих стадиях и должны защищать соответствующие функциональные группы от нежелательных побочных реакций, как ацилирования, этерификации до простых и сложных эфиров, окисления, сольволиза и т. д. В определенных случаях, кроме того, защитные группы вызывают селективное, например стереоселективное, протекание взаимодействий. Характерным для защитных групп является то, что они легко, т. е. без нежелательных побочных реакций, отщепляются, например, сольволизом, восстановлением, фотолизом или ферментативно, например, в физиологических условиях. Защитные группы, однако, также могут иметься в целевых веществах. Соединения формулы I с защищенными функциональными группами могут обладать более высокой метаболической стабильностью или, иначе, улучшенными фармакологическими свойствами, чем соответствующие соединения со свободными функциональными группами. Соответствующие соединения с защищенными группами, например с защищенными гидроксильными группами, могут представлять собой также "Рrodergs", которые ин виво активируются за счет ферментативного расщепления, например, благодаря эстеразам.

Защита функциональных групп такими защитными группами, сами защитные группы, а также реакции их отщепления описаны, например, в стандартных работах, как J. F. W. McOmie. "Prorective Groups in Organic Chemistry" Plenum Press. Лондон и Нью-Йорк. 1973; в Th. W. Greene "Protectice Groups in Organic Synthesis". Wiley. Нью-Йорк. 1981; в "The Pepdides" т. 3 (E. Gross и J. Meienhofer, Herausg), Academic Press. Лондон и Нью-Йорк, 1981; в "Методах органической химии". Губен-Вейль, 4-е изд. т. 15/1 изд. Georg Thime Штутгарт, 1974, в Н.-D. Jakubre и Н. Jescheit "Aminosauren, Peptide, Proteice" изд. Сhemie Weinheim, Deerfield Basel 1982; и в Jochen Lehmann "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate изд. Georg Thieme. Штутгарт, 1974.

Карбоксильная группа, например, защищается в виде сложноэфирной группы, которая при мягких условиях селективно расщепляется. Для защиты карбоксильная группа в первую очередь этерифицируется до сложноэфирной благодаря низшей алкильной группе, которая в 1-положении низшей алкильной группы разветвлена или в 1- или 2-положении низшей алкильной группы замещена пригодными заместителями.

Защищенная карбоксильная группа, которая этерифицирована до сложноэфирной за счет низшей алкильной группы, представляет собой, например, метоксикарбонил или этоксикарбонил.

Защищенная карбоксильная группа, которая этерифицирована до сложноэфирной за счет низшей алкильной группы, которая в 1-положении низшей алкильной группы разветвлена, представляет собой, например, трет.-(низший алкокси)-карбонил, например трет,-бутоксикарбонил.

Защищенная карбоксильная группа, которая этерифицирована до сложноэфирной за счет низшей алкильной группы, которая в 1- или 2-положении низшей алкильной группы замещена пригодными заместителями и представляет собой, например, арилметоксикарбонил с одним или двумя арильными остатками, где арил обозначает незамещенный или моно-, ди- или тризамещенный, например, низшим алкилом, например трет.-(низшим алкилом), как трет.-бутил, низшим алкоксилом, например, метокси; гидроксилом; галогеном, например, хлором, и/или нитрогруппой фенил; например, бензилоксикарбонил; замещенный указанными заместителями бензилоксикарбонил; например, 4-нитробензилоксикарбонил или 4-метоксибензилоксикарбонил, дифенилметоксикарбонил или замещенный указанными заместителями дифенилметоксикарбонил, например, ди-(4-метоксифенил)-метоксикарбонил; далее этерифицированный до сложного эфира низшей алкильной группой карбоксил, причем низшая алкильная группа в 1- или 2-положении замещена пригодными заместителями, как 1-низший алкокси-низший алкоксикарбонил, например метоксиметоксикарбонил, 1-метоксиэтоксикарбонил или 1-этоксиэтоксикарбонил, 1-(низший алкилтио)-(низший алкокси)-карбонил, например 1-метилтиометоксикарбонил или 1-этилтиоэтоксикарбонил, ароилметоксикарбонил, где арильная группа представляет собой в случае необходимости замещенный, например, галогеном, как бром, бензоил, например, фенацилоксикарбонил, 2-галоген-(низший алкокси)-карбонил, например 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2-бромэтоксикарбонил или 2-иодэтоксикарбонил, а также 2-(тризамещенный силил)-низший алкокси-/карбонил, где заместители, независимо друг от друга, обозначают, каждый, в случае необходимости замещенный, например низшим алкилом, низшим алкоксилом, арилом, галогеном и/или нитрогруппой, алифатический, аралифатический, циклоалифатический или ароматический углеводородный остаток, например, в случае необходимости замещенный как указано выше низший алкил, фенил-(низший алкил), циклоалкил или фенил, например 2-три-(низший алкил)-силил-(низший алкокси)-карбонил, как 2-три-(низший алкил)-силилэтоксикарбонил, например 2-триметилсилилэтоксикарбонил или 2-(ди-н-бутил-метил-силил)-этоксикарбонил или 2-триарилсилилэтоксикарбонил, как трифенилсилилэтоксикарбонил.

Карбоксильная группа может быть также защищена в виде органической силилоксикарбонильной группы. Органическая силилоксикарбонильная группа, например, представляет собой три-(низший алкил)-силилоксикарбонильную группу, например триметилсилилоксикарбонил. Атом кремния силилоксикарбонильной группы также может быть замещен двумя низшими алкильными группами, например метильными группами, и амино- или карбоксигруппой второй молекулы формулы I. Соединения с такими защитными группами можно получать, например, с помощью диметилхлорсилана в качестве силилирующего средства.

Карбоксильная группа защищается также в форме внутреннего сложного эфира с находящейся на пригодном расстоянии, например в --положении, к карбоксильной группе в молекуле гидроксильной группой, т. е. в форме лактона, предпочтительно --лактона.

Защищенная карбоксильная группа предпочтительно представляет собой трет. -(низший алкокси)-карбонил, например трет.-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 4-нитробензилоксикарбонил, 9-флуоренилкарбонил или дифенилметоксикарбонил, или защищенную в форме лактона, в особенности --лактона, карбоксильную группу.

Защищенная аминогруппа защищена защитной для аминогруппы группой, например, в форме ациламино-, арилметиламино-, этерифицированной до простого эфира меркаптоамино-, 2-ацил-(низший алк-1-енил)-амино- или силиламиногруппы или в виде азидогруппы.

В ациламиногруппе ацил представляет собой, например, ацильный остаток органической карбоновой кислоты, например, с количеством С-атомов вплоть до 18, в особенности в случае необходимости замещенной, например, галогеном или арилом; низшей алканкарбоновой кислоты или в случае необходимости замещенной, например, галогеном, низшим алкоксилом или нитрогруппой, бензойной кислоты, или предпочтительно неполного сложного эфира угольной кислоты. Такие ацильные группы представляют собой предпочтительно низший алканоил, как формил, ацетил, пропионил или пивалоил; галоген-(низший алканоил); например, 2-галогенацетил, как 2-хлор-, 2-бром-, 2-йод-, 2,2,2-трифтор или 2,2,2-трихлорацетил; в случае необходимости замещенный, например, галогеном, низшим алкоксилом или нитрогруппой бензоил, как бензоил, 4-хлорбензоил, 4-метоксибензоил или 4-нитробензоил; низший алкоксикарбонил, предпочтительно разветвленный в 1-положении низшего алкильного остатка или замещенный в 1- или 2-положении пригодным образом низший алкоксикарбонил, например трет.-(низший алкокси)-карбонил, как трет.-бутоксикарбонил; арилметоксикарбонил с одним, двумя или тремя арильными остатками, которые в случае необходимости представляют собой моно- или полизамещенный, например, низшим алкилом, в особенности трет.-низшим алкилом, как трет.-бутил, низшим алкилом, как метокси, гидроксилом, галогеном, как хлор, и/или нитрогруппой фенил, например, бензилоксикарбонил, 4-нитробензилоксикарбонил дифенилметоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, или ди-(4-метоксифенил)-метоксикарбонил, арилметоксикарбонил, где арильная группа предпочтительно представляет собой замещенный в случае необходимости, например, галогеном, как бром, бензоил, например, фенацилоксикарбонил, 2-галоген-(низший алкокси)-карбонил, например, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2-бромэтоксикарбонил или 2-иодэтоксикарбонил, 2-(тризамещенный силил)-(низший алкокси)-карбонил, например, 2-три-(низший алкил)-силил-(низший алкокси)-карбонил, как 2-триметилсилилэтоксикарбонил, или 2-(ди-н-бутил-метил-силил)-этоксикарбонил, или триарилсилил-(низший алкокси)-карбонил, например 2-трифенилсилилэтоксикарбонил.

В арилметиламиногруппе, например моно-, ди- или, в особенности, триарилметиламиногруппе, арильными остатками являются, в особенности, в случае необходимости замещенные фенильные остатки. Такими группами являются, например, бензил-, дифенилметил- или, в особенности, трифенилметиламиногруппа.

В этерифицированной до простого эфира меркаптоаминогруппе меркаптогруппа в первую очередь представляет собой замещенную арилтио или арил-(низший алкил)-тио-группу, где арилом является, например, в случае необходимости замещенный, например, низшим алкилом, как метил или трет.-бутил, низшим алкоксилом, как метокси, галогеном, как хлор, и/или нитрогруппой фенил, например 4-нитрофенилтио.

В применяемом в качестве защитной для аминогруппы группы 2-ацил-(низший алк-1-енильный) остаток представляет собой ацил, например, соответствующий остаток низшей алканкарбоновой кислоты, в случае необходимости замещенной, например, низшим алкилом, как метил или трет.-бутил, низшим алкоксилом, как метокси, галогеном, как хлор, и/или нитрогруппой, бензойной кислоты, или, в особенности, неполного сложного эфира угольной кислоты, как неполный низший алкиловый эфир угольной кислоты. Соответствующими защитными группами являются в первую очередь 1-(низший алканоил)-(низший алк-1-ен-2-ил), например, 1-(низший алканоил)-проп-1-ен-2-ил, как 1-ацетилпроп-1-ен-2-ил, или (низший алкокси)-карбонил-(низший алк-1-ен-2-ил), например, (низший алкокси)-карбонилпроп-1-ен-2-ил, как 1-этоксикарбонилпроп-1-ен-2-ил.

Силиламиногруппой является, например, три-(низший алкил)-силиламиногруппа, например триметилсилиламино или трет.-бутилдиметилсилиламино. Атом кремния силиламиногруппы также может быть замещен двумя низшими алкильными группами, например метильными группами, и аминогруппой или карбоксильной группой второй молекулы формулы I. Соединения с такими защитными группами можно получать, например, с помощью соответствующих хлорсиланов, как диметилхлорсилан.

Аминогруппу можно защищать также путем переведения в протонированную форму; в качестве соответствующих анионов принимают во внимание в первую очередь таковые сильных неорганических кислот, как серной кислоты, фосфорной кислоты или галогенводородных кислот, например, хлор- или броманион, или органических сульфокислот, как п-толуолсульфокислоты.

Предпочтительными защитными для амино-группы группами являются низший алкоксикарбонил, фенил-(низший алкокси)-карбонил, флуоренил-(низший алкокси)-карбонил, 2-(низший алканоил)-низший алк-1-ен-2-ил или низший алкокси-(карбонил-низший алк-1-ен-2-ил), особенно предпочтительно трет.-бутоксикарбонил или бензилоксикарбонил.

Гидроксильная группа может быть защищена, например, ацильной группой, например незамещенным или замещенным галогеном, как хлор, низшим алканоилом, как ацетил или 2,2-дихлорацетил, или, в особенности, указанным для защищенных аминогрупп ацильным остатком неполного сложного эфира угольной кислоты. Предпочтительной защитной для гидроксила группой является, например, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 4-нитробензилоксикарбонил, дифенилметоксикарбонил или трифенилметил. Гидроксильная группа, далее, может быть защищена три-(низший алкил)-силилом, например триметилсилилом, триизопропилсилилом или трет.-бутилдиметилсилилом; легко отщепляющейся простой эфирной группой, например алкильной группой, как трет.-низший алкил, например трет.-бутил; в особенности, 2-окса- или 2-тиаалифатическим или циклоалифатическим остатком, например 1-(низший алкокси)-(низший алкил, как метоксиметил), 1-метоксиэтил, 1-этоксиэтил, метилтиометил, 1-метилтиоэтил или 1-этилтиоэтил, или 2-окса- или 2-тиациклоалкилом с 5 7 атомами в цикле, как 2-тетрагидрофуранил или 2-тетрагидропиранил, или соответствующим тиааналогом, а также 1-фенил-(низшим алкилом), как бензил, дифенилметил или трифенилметил, причем фенильные остатки могут быть замещены, например, галогеном, как хлор, низшим алкоксилом, например, метокси, и/или нитрогруппой.

Две имеющиеся в молекуле, в особенности, соседние гидроксильные группы или соседние гидроксильная и аминогруппы могут быть защищены, например, за счет двухвалентных защитных групп, как предпочтительно, например, защищенная одним или двумя низшими алкильными остатками или оксогруппой метиленовая группа, например незамещенными или замещенным алкилиденом, например низшим алкилиденом, как изопропилиденом, циклоалкилиденом, как циклогексилиден, карбоновой группой или бензилиденом.

Находящаяся в соседнем положении к карбоксильной группе гидроксильная группа может быть защищена за счет образования внутреннего сложного эфира (лактона), в особенности --лактона.

Предпочтительно защищенная гидроксильная группа защищена три-(низший алкил)-силилом или в виде лактона, в особенности трет.-бутил-диметилсилилом или в виде --лактона.

В качестве защитной группы, например, для карбоксила можно использовать легко отщепленный от защищаемой функциональной группы, например карбоксильной группы, который пригоден, например, для синтеза по Мерринфильду. Таким пригодным полимерным носителем является, в особенности, слабо сшитая путем сополимеризации с дивинилбензолом полистрирольная смола, которая несет пригодные для реверсивного связывания мостиковые группы.

Карбоновые кислоты формулы II имеются либо со свободной карбоксильной группой, либо в виде ее реакционноспособного производного, например, в виде происходящего от свободного карбоксильного соединения активированного сложного эфира, в виде реакционноспособного ангидрида, или, далее, в виде реакционноспособного циклического амида. Реакционноспособные производные также могут образовываться in situ.

Активированными сложными эфирами соединений формулы II c карбоксильной группой являются в особенности ненасыщенные у связывающего атома углерода этерифицирующего остатка сложные эфиры, например, типа сложного винилового эфира, как сложный виниловый эфир (получается, например, путем переэтерификации соответствующего сложного эфира с помощью винилацетата; метод активированного сложного винилового эфира) карбамоильный сложный эфир (получается, например, путем обработки соответствующей кислоты с помощью изоксазолиевого реагента; 1,2-оксазолий- или Вудварда метод) или 1-(низший алкокси)-виниловый сложный эфир получается путем обработки соответствующей кислоты (низший алкокси)-ацетиленом; этоксиацетиленовый метод (или сложные эфиры амидинового типа, как N,N"-дизамещенные амидиноэфиры) путем обработки соответствующей кислоты соответствующим N,N"-дизамещенным карбодиимидом, например N,N"-дициклогексилкарбодиимидом; карбодиимидный метод (или N,N"-дизамещенные амидиновые сложные эфиры (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты, N, N"-дизамещенным цианамидом; цианамидный метод); пригодные сложные арильные эфиры, в особенности замещенные электроакцепторными заместителями сложные фенильные эфиры (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты соответствующим пригодным замещенным фенолом, например, 4-нитрофенолом, 4-метилсульфонилфенолом, 2,4,5-трихлорфенолом, 2,3,4,5,6-пентахлорфенолом или 4-фенилдиазофенолом, в присутствии конденсирующего средства, как N,N"-дициклогексилкарбодиимида; метод активированного сложного арильного эфира); цианметиловые сложные эфиры (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты хлорацетонитрилом в присутствии основания; метод цианметилового сложного эфира); сложные тиоэфиры, в особенности в случае необходимости замещенные, например, нитрогруппой, сложные фениловые тиоэфиры (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты с помощью в случае необходимости замещенных, например, нитрогруппой, тиофенолов, между прочим, с помощью ангидридного или карбодиимидного способа; метод активированного сложного тиольного эфира (или, в особенности, сложные амины- или амидоэфиры) получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты N-оксиамино- или N-оксиамидосоединением, например, как N-оксисукцинимидом, N-оксипиперидином, N-оксифталимидом, имидом N-окси-5-норборнен-2.3-дикарбоновой кислоты, 1-оксибензтриазолом или 3-окси-3,4-дигидро-1,2,3-бензтриазин-4-оном, например, по ангидридному или карбодиимидному способу; метод активированного сложного N-оксиэфира). Также используются внутренние сложные эфиры, например --лактоны.

Ангидриды кислот могут представлять собой симметричные или предпочтительно смешанные ангидриды этих кислот, например ангидриды с неограниченными кислотами, как галоидангидриды кислот, в особенности хлорангидриды (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты тионилхлоридом, пентахлоридом фосфора или оксалилхлоридом; метод хлорангидрида кислоты); азиды (получаются, например, из соответствующего сложного эфира кислоты через соответствующий гидразид его обработкой азотистой кислотой; азидный метод); ангидриды с неполными сложными эфирами угольной кислоты, например низшие алкильные неполные сложные эфиры угольной кислоты (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты сложным низшим алкиловым эфиром хлормуравьиной кислоты или 1-(низший алкокси)-карбонил-2-(низший алкокси)-1,2-дигидрохинолином; метод смешанных ангидридов O-алкилугольной кислоты (или ангидриды с дигалогенированной, в особенности дихлорированной фосфорной кислотой (получается, например, путем обработки соответствующей кислоты оксихлоридом фосфора; фосфороксихлоридный метод), ангидриды с другими производными фосфорной кислоты (например, те, которые можно получать с помощью фенил-N-фенилфосфорамидохлоридата или путем превращения амидов алкилфосфорной кислоты в присутствии ангидридов сульфокислот и/или уменьшающих рацемизацию добавок, как N-оксибензтриазол, или в присутствии диэтилового эфира цианофосфоновой кислоты (или с производными фосфористой кислоты; или ангидриды с органическими кислотами, как смешанные ангидриды с органическими карбоновыми кислотами (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты с помощью, в случае необходимости, замещенного галоидангидрида (низший алкан)- или фенил-(низший алкан)-карбоновой кислоты, например хлорангидрид фенилкусусной кислоты, пивалиновой кислоты или трифторуксусной кислоты; метод смешанных ангидридов карбоновых кислот (или с органическими сульфокислотами (получается, например, путем обработки соли, как соль щелочного металла, соответствующей кислоты пригодным органическим галоидангидридом сульфокислоты, как хлорангидрид (низший алкан)- или арил-сульфокислоты, например метанили п-толуол-сульфо-кислоты; метод смешанных ангидридов сульфокислот), а также симметричные ангидриды (получаются, например, путем конденсации соответствующей кислоты в присутствии карбодиимида или 1-диэтиламинопроприна; метод симметричных ангидридов).

Пригодными циклическими амидами являются, в особенности, амиды с пятичленными диазациклами ароматического характера, как амиды с имидазолами, например имидазол (получаются, например, путем обработки соответствующей кислоты с помощью N,N"-карбодиимидазола; имидазольный метод), или пиразол, например 3,5-диметилпиразол (получаются, например, через гидразид кислоты благодаря обработке ацетилацетоном; пиразолидный метод).

Как упоминалось, производные карбоновых кислот, которые применяются в качестве ацилирующего средства, также могут обрабатываться in situ. Так, например, N,N"-дизамещенные амидиновые сложные эфиры можно получать in situ тем, что смесь исходного соединения формулы III и используемой в качестве ацилирующего средства кислоты формулы II вводят во взаимодействие в присутствии пригодного N,N"-дизамещенного карбодиимида, например N,N"-циклогексилкарбодиимида, например, в присутствии пригодного основания, как триэтиламин. Сложные амино- или амидоэфиры с использованием в качестве ацилирующего средства кислот можно получать в присутствии ацилирующего исходного материала формулы III таким образом смесь соответствующих исходных веществ кислоты и аминосоединения вводят во взаимодействие в присутствии N,N"-дизамещенного карбодиимида, например N,N"-дициклогексилкарбодиимида, и N-оксиамина или N-оксиамида, например N-оксимсукцинимида, в случае необходимости в присутствии пригодного основания, например 4-диметиламинопиридина. Далее, активирования in situ можно достигать путем введения во взаимодействие с N,N, N", N"-тетраалкилурониевыми соединениями, как O-бензотриазол-1-ил-N,N,N", N"-тетраметилуронийгексафторфосфат. Наконец, ангидриды фосфорной кислоты карбоновых кислот формулы II in situ можно получать тем, что амид алкилфосфорной кислоты, как гексаметилфосфортриамид, в присутствии ангидрида сульфокислоты, как ангидрид 4-толуолсульфокислоты, вводят во взаимодействие с солью, как тетрафторборат, например тетрафторборат натрия, или с другими производным гексаметилфосфортриамида, как бензотриазол-1-илокситрис-(деметиламино)-фосфонийгексафторид, предпочтительно в присутствии уменьшающей рацемизацию добавки, как N-оксибензотриазол.

Аминогруппа соединений формулы III, которая принимает участие в реакции, содержит предпочтительно по меньшей мере один реакционноспособный атом водорода, в особенности, когда реагирующая карбоксильная группа находится в реакционноспособной форме; однако она также сама может быть дериватизирована, например, путем реакции с фосфитом, как диэтилхлорфосфит, 1,2-фениленхлорфосфит, этилдихлорфорсфит, этиленхлорфосфит или тетраэтилпирофосфит. Производным такого соединения с аминогруппой является, например, галоидангидрид карбаминовой кислоты, причем участвующая и в реакции аминогруппа замещена галогенкарбонилом, например хлоркарбонилом.

Конденсацию для получения амидной связи можно осуществлять само по себе известным образом, например как описано в стандартных работах (Губен-Вейль. "Методы органической химии", 4-е изд. т. 15/II (1974), т. IX (1955), т. Е II (1985) изд. Georg Thieme Штутгарт; "The Peptides" E. Gross и J. Meinhofer. Hg (т. 1 и 2, Academic Press. Лондон и Нью-Йорк, 1979/1980; или М. Bodansky. "Principles of Peptide Synthesis", изд. Shringer, Берлин, 1984).

Концентрацию свободной карбоновой кислоты с соответствующим амином можно осуществлять предпочтительно в присутствии одного из обычных конденсационных средств. Обычными конденсационными средствами являются, например, карбодиимиды, например диэтил-, дипропил-, N-этил-N"-(3-диметиламинопропил)-карбодиимид или в особенности дициклогексилкарбодиимид, далее пригодные карбонильные соединения, например карбонилимидазол, 1,2-оксазолиевые соединения, например 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3"-сульфонат и 2-трет.-бутил-5-метилизоксазолийперхлорат, или пригодные ациламиносоединение, например 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, N, N,N",N"-тетраалкилурониевые соединения, как O-бензтриазол-N, N,N"N"-тетра-метилуронийгексафторфосфат, далее активированные производные фосфорной кислоты, например дифенилфосфорилазид, диэтилфосфорилцианид, фенил-N-фенилфосфорамидохлорид, хлорангидрид бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)-фосфиновой кислоты или 1-бензтриазолилокси-трис-(диметиламино)-фосфонийгексафторфосфат.

Аналогично, как в случае названных для конденсации карбоновых кислот формулы II типов реакции, также сульфокислоты формулы II c концевой сульфонильной группой при конденсации с соединениями формулы III можно превращать в соответствующие сульфонамиды формулы Iб.

Так например, можно использовать активированные сложные эфиры сульфокислот, например, соответствующие, в особенности замещенные нитрогруппами, сложные арильные эфиры, как сложные фениловые эфиры, причем аминная компонента формулы Iб также может использоваться в виде амида щелочного металла, например ариламида щелочного металла, как анилинамид натрия, или в виде соли щелочного металла азотсодержащих гетероциклов, например пирролид калия.

Далее можно использовать реакционноспособные ангидриды, как, например, соответствующие симметричные (получаемые, например, путем реакции алкилсульфокислых солей серебра с алкилсульфонилхлоридами) или предпочтительно асимметричные ангидриды кислот, например ангидриды с неорганическими кислотами, как сульфонилгалогениды, в особенности сульфонилхлориды (получается, например, путем взаимодействия соответствующих сульфокислот с неорганическими хлорангидридами кислот, например тионилхлорид, сульфурилхлорид или пентахлорид фосфора), с органическими карбоновыми кислотами (получается, например, путем обработки галаидангидрида сульфокислоты солью карбоновой кислоты, как соль щелочного металла, аналогично вышеописанному методу получения смешанных ангидридов кислот), или азиды (получаются, например, из соответствующего хлорангидрида кислоты и азида натрия или через соответствующий гидразид и путем его обработки азотистой кислотой, аналогично вышеописанному азидному методу).

При желании добавляют органическое основание, например три-(низший алкид)-амин с объемистыми остатками, например этилдиизопропиламин, и/или гетероциклическое основание, например, пиридин, 4-диметиламинопиридин или предпочтительно N-диметилморфолин.

Конденсацию активированных сложных эфиров, реакционноспособных ангидридов или реакционноспособных циклических амидов с соответствующими аминами осуществляются обычно в присутствии органического основания, например простых три-(низший алкил)-аминов, например триэтиламин или трибутиламин, или одного из вышеуказанных органических оснований. В желательном случае дополнительно еще применяют конденсационное средство как описано для свободных карбоновых кислот.

Конденсацию ангидридов кислот с аминами можно осуществлять, например, в присутствии неорганических карбонатов, например карбонатов аммония или щелочных металлов, или гидрокарбонатов аммония или щелочных металлов, как карбонат натрия или калия или гидрокарбонат натрия или калия (обычно вместе с сульфатом); реакцию галоидангидридов сульфокислот, как хлорангидриды сульфокислот, можно осуществлять в присутствии гидроксидов, например гидроксидов щелочных металлов, как гидроксид натрия или калия.

Хлорангидриды карбоновых кислот, например, производимые кислоты формулы II, в частности производные хлоругольной кислоты, конденсируются с соответствующими аминами предпочтительно в присутствии органического амина, например вышеуказанных три-(низший алкил)-аминов или гетероциклических оснований, в случае необходимости в присутствии гидросульфата.

Конденсация осуществляется предпочтительно в инертном, апротонном, предпочтительно безводном, растворителе или смеси растворителей, например в амиде карбоновой кислоты, например формамиде или диметилформамиде; галогенированном углеводороде, например метиленхлориде, четыреххлористом углероде или хлорбензоле, кетоне, например ацетоне, циклическом простом эфире, например тетрагидрофуране, сложном эфире, например этилацетате, или нитриле, например ацетонитриле, или в смеси их, в случае необходимости при пониженной или повышенной температуре, например в температурном интервале примерно от -40^oС примерно до 100^oС, предпочтительно примерно при -10 +50^oС, и без инертного газа или в атмосфере инертного газа, например азота или аргона.

Также можно использовать водные, например спиртовые, например этанол, или ароматические растворители, например бензол или толуол. При наличии гидроксидов щелочных металлов в качестве оснований, в случае необходимости, также можно добавлять ацетон.

Конденсацию можно осуществлять согласно известному для твердофазного синтеза способу, который проводят по Р. Merrifield, который описан, например, в Angew. Chem. 97, 801 812 (1985), Naturwissenschaften 71, 252 258 (1984) или в R. A. Houghten Proc. Natl. Acad. Sci, США, 82, 5131 5135 (1985).

Высвобождение защищенных защитными группами функциональных групп в полученных соединениях формулы I с защищенными функциями в случае необходимости осуществляют по одному или нескольким, указанным в способе е) методам.

Способ б). Получение амидной связи.

В исходных материалах формулы IV и формулы V функциональные группы за исключением групп, которые должны участвовать в реакции или не реагируют в реакционных условиях, независимо друг от друга, защищены защитными группами.

Защитные группы, свободные карбоновые кислоты и их реакционноспособные производные, свободные амины и их реакционноспособные производные и применяемые для конденсации способы полностью аналогичны описанным в варианте а) для получения амидной связи, исходя из соединений формул II и III, если вместо указанных там карбоновых кислот формулы II используют соединения формулы IV и вместо амино соединений формулы III используют соединения формулы V.

Высвобождение защищенных защитными группами функциональных групп в получении соединения формулы I с защищенными функциями осуществляют в случае необходимости по одному или нескольким, указанным в варианте е) методам.

Способ в). Получение амидной связи.

В исходных материалах формулы VI и VII функциональные группы, за исключением групп, которые должны принимать участие в реакции или не реагируют в реакционных условиях, независимо друг от друга, защищены защитными группами.

Защитные группы, свободные карбоновые кислоты и их реакционноспособные производные, свободные амины и их реакционноспособные производные и применяемые для конденсации способы полностью аналогичны описанным в способе а) для получения амидной связи, исходя из соединений формул II и III, если вместо указанных там карбоновых кислот формулы II используют таковые формулы VI и вместо аминосоединений формулы III используют таковые формулы VII.

Высвобождение защищенных защитными группами функциональных групп в полученных соединениях формулы I с защищенными функциями осуществляют в случае необходимости по одному или нескольким, указанным в варианте е) методам.

Способ г). Получение амидной связи.

В исходных материалах формул VIII и IX функциональные группы, за исключением групп, которые должны принимать участие в реакции или не реагируют в реакционных условиях, независимо друг от друга, защищены защитными группами.

Защитные группы, свободные карбоновые кислоты и их реакционноспособные производные, свободные амины и их реакционноспособные производные и используемые для конденсации способы аналогичны описанным в способе а) для получения амидной связи из соединений формул II и III, если вместо указанных там карбоновых кислот формулы II используют соединения формулы VIII и вместо аминосоединений формулы III используют соединения формулы IX.

Высвобождение защищенных защитными группами функциональных групп в полученных соединениях формулы I с защищенными функциями осуществляют в случае необходимости по одному или нескольким указанным в варианте е) методам.

Способ д). Получение амидной связи.

В исходных материалах формул Х и XI функциональные группы, за исключением групп, которые должны принимать участие в реакции или не реагируют в реакционных условиях, независимо друг от друга, защищены защитными группами.

Защитные группы, свободные карбоновые кислоты и их реакционноспособные производные, свободные амины и их реакционноспособные производные и применяемые для конденсации способы полностью аналогичны описанным в способе а) для получения амидной связи, исходя из соединений формул II и III, если вместо указанных там карбоновых кислот формулы II используют соединения формулы Х и вместо аминосоединений формулы III используют соединения формулы XI.

Реакционноспособным производным такого соединения формулы XI с аминогруппой являются ее предшественники, например изоцианат, в котором принимающая участие в реакции аминогруппа превращена в изоцианатную группу, причем в последнем случае получают только соединения формулы I, которые на атоме азота образовавшейся за счет реакции амидной группы имеют атом водорода.

Высвобождение защищенных защитными группами функциональных групп в полученных соединениях формулы I с защищенными функциями осуществляют в случае необходимости по одному или нескольким, указанным в варианте е) методам.

Способ е). Отщепление защитных групп.

Отщепление защитных групп, которые не являются составной частью желательного целевого продукта формулы I, например защитных для карбоксильных, амино- и/или гидроксильных групп, осуществляется само по себе известным образом, например путем сольволиза, в особенности гидролиза, алкоголиза или ацидолиза, или путем восстановления, в особенности гидрогенолиза, или путем восстановления, в особенности гидрогенолиза, или с помощью других восстановителей, а также фотолиза, в случае необходимости постадийно или одновременно. Отщепление защитных групп, например описано в указанных в начале раздела "Защитные группы" стандартных работах.

Так, например, защищенный карбоксил, например трет.-(низший алкокси)-карбонил, во 2-положении защищенный тризамещенной силильной группой или в 1-положении замещенный низшим алкоксилом или низшим алкилтио-(низший алкокси)-карбонил или в случае необходимости замещенный дифенилметоксикарбонил можно переводить в свободный карбоксил путем обработки пригодной кислотой, как муравьиная, соляная или трифторуксусная кислота, в случае необходимости при добавке нуклеофильного соединения, как фенол или анизол. В случае необходимости замещенный бензилоксикарбонил можно высвобождать, например, путем гидрогенолиза, т. е. путем обработки водородом в присутствии металлического катализатора гидрирования, как палладиевого катализатора. Далее пригодным образом замещенный бензилоксикарбонил, как 4-нитробензилоксикарбонил, также можно переводить в свободный карбоксил путем восстановления, например, путем обработки щелочным металлом, как дитионат натрия, или восстанавливающим металлом, например цинком, или с помощью восстанавливающей металлической соли, как соль хрома (II), например, хлорид хрома (II), обычно в присутствии выделяющего водород средства, которое вместе с металлом может давать атомарный водород, как кислоты, в первую очередь пригодной карбоновой кислоты, так в случае необходимости замещенная, например, гидроксилом, (низший алкан)-карбоновая кислота, например уксусная, муравьиная, гликолевая, дифенилгликолевая, молочная, миндальная, 4-хлор-миндальная или винная кислота, или спирта или тиола, причем предпочтительно добавляют воду. Путем обработки с помощью восстанавливающего средства или металлической соли, как описано выше, можно превращать в свободный карбоксил также 2-галоген (низший алкокси)-карбонил (в случае необходимости после превращения 2-бром (низший алкокси)-карбонильной группы в соответствующую 2-иод (низший алкокси) карбонильную группу) или ароилметоксикарбонил. Ароилметоксикарбонил можно расщеплять также путем обработки с помощью нуклеофильного, предпочтительно солеобразующего реагента, как тиофенолят натрия или иодид натрия. 2-(Тризамещенный силил) (низший алкокси)-карбонил также можно переводить в свободный карбоксил путем обработки с помощью дающей фторид-анион соли фтористоводородной кислоты, как фторид щелочного металла, например фторид натрия или калия, в случае необходимости, в присутствии макроциклического простого полиэфира ("краун-эфира"), или с помощью фторида органического четвертичного основания, как тетра-(низший алкил)-аммонийфторид или три-(низший алкил)-арил-(низший алкил)-амонийфторид, например тетраэтиламмонийфторид или тетрабутиламмонийфторид, в присутствии апротонного, полярного растворителя, как диметилсульфоксид или N,N-диметилацетамид. Защищенный в виде органического силилоксикарбонила, как три-(низший алкил)-силилоксикарбонил, например триметилсилилоксикарбонил, карбоксил можно высвобождать обычным образом сольволитически, например путем обработки водой, спиртом или кислотой или, кроме того, фторидом, как описано выше. Защищенный в виде внутреннего сложного эфира, как в виде --лактона, карбоксил можно высвобождать путем гидролиза в присутствии щелочноземельного металла, или в особенности гидроксида щелочного металла, например NaOH, КОН или LiOH, особенно LiOH, причем одновременно освобождается соответственно защищенная гидроксильная группа.

Защищенную амино-группу высвобождают известным и в зависимости от рода защищенных групп самым различным образом, предпочтительно путем сольволиза или восстановления. (Низший алкокси)-карбониламино, как трет.-бутоксикарбониламино, можно расщеплять в присутствии кислот, например неорганических кислот, например галогенводорода, как хлорводорода или бромводород, или фосфорной кислоты, предпочтительно хлорводорода, в полярных растворителях, как вода, или карбоновой кислоты, как уксусная кислота, или простых эфиров, как диоксан; 2-галоген-(низший алкокси)-карбониламино-группу), ароилметоксикарбониламино или 4-нитробензилоксикарбониламино можно расщеплять, например, путем обработки с помощью пригодного восстановителя, как цинк, в присутствии пригодной карбоновой кислоты, как водная уксусная кислота. Ароилметоксикарбониламиногруппу также можно расщеплять путем обработки с помощью нуклеофильного, предпочтительно солеобразующего реагента, как тиофенолят натрия, а 4-нитробензилоксикарбониламино также путем обработки с помощью дитионита щелочного металла, например дитионита натрия. В случае необходимости замещенный дифенилметоксикарбониламино, трет.-(низший алкокси)-карбониламино или 2-(тризамещенный силил)-(низший алкокси)-карбониламино, как 2-три-(низший алкокси)-силил-(низший алкокси)-карбониламино, можно освобождать путем обработки с помощью пригодной кислоты, например муравьиной или трифторуксусной кислоты; в случае необходимости замещенный бензилоксикарбониламино, например, с помощью гидрогенолиза, т. е. путем обработки водородом в присутствии пригодного катализатора гидрирования, как паладиевого катализатора, предпочтительно в полярных растворителях, как ди-(низший алкил)-(низший алканоил)-амиды, например диметилформамид, простые эфиры, как циклические простые эфиры, например диоксан, или спирты, как метанол, этанол или пропанол, причем особенно предпочтителен метанол; в случае необходимости замещенный тpиарилметиламино или формилаламино, например, путем обработки с помощью кислоты, например неорганической кислоты, например хлорводородной кислоты, или органической кислоты, например муравьиной, уксусной или трифторуксусной кислоты, в случае необходимости в присутствии воды; и защищенную в виде силиламино аминогруппу, например, с помощью гидролиза или алкоголиза. Защищенную 2-галогенацетилом, например 2-хлорацетилом, аминогруппу можно высвобождать путем обработки с помощью тиомочевины в присутствии основания, или с помощью тиолята, как тиолят щелочного металла тиомочевины, и последующего сольволиза, как алкоголиз или гидролиз, образовавшегося продукта замещения. Защищенную 2-(тризамещенный силил)-(низший алкокси)-карбонилом, как 2-три-(низший алкил)-силил-(низший алкокси)-карбонил, аминогруппу также можно переводить в свободную аминогруппу путем обработки с помощью дающей фториданионы соли фтороводородной кислоты, как указано выше в связи с высвобождением соответственно защищенной карбоксильной группы. Точно также можно непосредственно связанный с гетероатомом, как азот, силил, как триметилсилил, отщеплять с помощью фторид-ионов.

Защищенную в форме азидогруппы аминогруппу, например, путем восстановления переводят в свободную аминогруппу, например путем каталитического гидрирования с помощью водорода в присутствии катализатора гидрирования, как оксид платины, палладий или никель Ренея; путем восстановления с помощью меркаптосоединений, как дитиотреитол или меркаптоэтанол, или также путем обработки цинком в присутствии кислоты, например уксусной кислоты. Каталитическое гидрирование осуществляется предпочтительно в инертном растворителе, как галогенированный углеводород, например метиленхлорид, или также в воде или смеси воды с органическим растворителем, как со спиртом или диоксаном, примерно при 20 25^oС, или также при охлаждении или нагревании.

Защищенная пригодной ацильной группой, три-(низший алкил)-силильной группой или, в случае необходимости, замещенной 1-фенил-(низший алкил)-группой гидроксильная группа высвобождается аналогично соответственно защищенной аминогруппе. Защищенная 2,2-дихлорацетилом гидроксильная группа высвобождается, например, путем основного гидролиза; защищенная трет-низшим алкилом или 2-оксаили 2-тиа-алифатическим или -циклоалифатическим углеводородным остатком гидроксильная группа высвобождается путем ацидолиза, например путем обработки с помощью неорганической кислоты или сильной карбоновой кислоты, например трифторуксусной кислоты. Две гидроксильные группы или соседние амино- и гидроксильная группы, которые защищены вместе с помощью двухвалентной защитной группы, предпочтительно, например, одно- или двухкратнозамещенной низшим алкилом метиленовой группы, как низший алкилиден, например изопропилиден, циклоалкилиден, например циклогексилиден, или бензилиден, могут высвобождаться благодаря кислотному сольволизу, особенно в присутствии неорганической кислоты или сильной органической кислоты. Три-(низший алкил)-силильная группа также отщепляется путем ацидолиза, например благодаря неорганической кислоте, предпочтительно фтороводородной кислоте, или сильной карбоновой кислоте. 2-галоген-(низший алкокси)-карбонил расщепляется благодаря вышеуказанному восстановлению, например восстанавливающему металлу, как цинк, восстанавливающий металлической соли, как соли хрома (II), или благодаря сернистым соединениям, например дитиониту натрия или предпочтительно сульфиду натрия и сероуглероду. Этерифицированные до сложных эфиров гидроксильные группы, например (низший алканоил)-оксигруппы, как ацетокси, также могут высвобождаться с помощью эстеразы; ацилированный амин, например, благодаря пригодным пептидазам.

Температуру для высвобождения защищенных функциональных групп предпочтительно составляют от -80^oС до 100^oС, особенно предпочтительно от -20^oC до 50^oС, например при 10 35^oC, желательно при комнатной температуре.

При наличии нескольких защищенных функциональных групп, если желательно, можно защитные группы выбирать так, чтобы одновременно можно было отщеплять более, чем одну такую группу, например, ацидолитически, путем обработки трифторуксусной кислотой, или с помощью водорода и катализатора гидрирования, как катализатор палладий-на-угле. Наоборот, группы также можно выбирать так, чтобы они могли отщепляться не все одновременно, а в желательной последовательности, причем получаются соответствующие промежуточные продукты.

Дополнительные меры способа.

В случае дополнительных мер способа, которые осуществляются в желательном случае, функциональные группы исходных соединений, которые не должны участвовать в реакции, могут быть незащищенными или в защищенной форме, например благодаря одной или нескольким, указанным выше в способе а) защитным группам. Защитные группы могут сохраняться в целевых продуктах или полностью или частично отщепляться согласно одному из указанных в способе е) методов.

Смеси стереоизомеров, а следовательно и смеси диастереомеров и/или энантиомеров, например рацемические смеси, само по себе известным образом можно разделять на соответствующие изомеры путем пригодных способов разделения. Так, смеси диастереомеров можно разделять путем фракционной кристаллизации, хроматографии, распределения между растворителями и т. д. на отдельные диастереомеры. Рацематы после переведения оптических антиподов в диастереомеры, например, путем введения во взаимодействие с оптически активными соединениями, например оптически активными кислотами или основаниями, можно разделять путем хроматографии, путем селективного превращения только одного из обоих энантиомеров. Это разделение можно осуществлять как на стадии одного из исходных продуктов, так и также в случае самих соединений формулы I.

В полученном соединении формулы I, где гидроксильная группа свободна и связана с С-атомом, который является соседним к несущему остаток Р₂-CH₂-атому углерода, путем введения защитной группы, как описано выше в способе а), свободную гидроксильную группу можно переводить в этерифицированную до сложного эфира гидроксильную группу типа (низший алканоил)-окси, как ацетокси. Этерификацию до сложного эфира осуществляют аналогично указанной в способе а) конденсации до амидов, причем вместо амино-компоненты реагирует гидроксильная группа. Реакцию осуществляют предпочтительно в аналогичных условиях, как описано в способе а), в особенности при применении (низший алканоил)-ангидрида, например ацетангидрида, для образования соответствующей (низший алканоил)-оксигруппы, в органическом растворителе, например простом циклическом эфире, как тетрагидрофуран, в присутствии циклического третичного амина, как диметиламинопиридин, и/или три-(низший алкил)-амина, как триэтиламин, при температурах от 0^oС до температуры реакционной смеси, в особенности при 10 30^oC.

В соединении формулы I имеющиеся защитные группы или пригодные остатки R₁, кроме водорода, можно отщеплять по одному из указанных в способе е) методов, в особенности путем гидролиза, например, галоидводород, как хлорводород. Гидролиз осуществляют в обычных условиях, например в водном растворе или в безводных растворителях, в особенности в простых эфирах, как диоксан, при температурах от -50^oC до температуры кипения с обратным холодильником соответствующих реакционных смесей, например при 0 59^oC, предпочтительно в присутствии инертного газа, как аргон или азот.

В соединении формулы I, в которой по меньшей мере один из остатков R₂ или R₃ обозначает фенильную группу и/или один или несколько остатков B₁, A₁ или A₂ обозначает фенилаланин, причем фенильные остатки также, смотря по обстоятельствам, как описано выше, могут быть замещены, соответствующий фенильный остаток или соответствующие фенильные остатки, например, можно селективно восстановить в соответствующие циклогексильные остатки, например гидрировать. Гидрирование осуществляют предпочтительно в присутствии катализатора, который позволяет осуществлять гидрирование двойных связей в присутствии пептидных связей, в особенности катализатора из оксидов тяжелых металлов, как катализатора Rh/III/Pt/IV/-оксид согласно Nishimura (S. Nichimura, Bull. Che, Soc. Japan 33, 566 (1960), в пригодных растворителях, в особенности в воде, спиртах, как метанол или этанол, сложных эфирах, как этилацетат, или простых эфирах, как диоксан, например в метаноле, при температурах 0 150^oС, предпочтительно 10 - 50^oC, например при комнатной температуре, и при давлениях водорода 1 50 бар, например при нормальном давлении.

Осуществление таких вариантов способа, в случае которых исходят из полученного на любой стадии в виде промежуточного продукта соединения и осуществляют отсутствующие стадии или способ обрывают на любой стадии или исходное вещество получают при реакционных условиях или применяют в форме реакционноспособного производного или соли или полученное по предлагаемому в изобретении способу соединение получают в условиях способа и перерабатывают далее in situ. При этом предпочтительно исходят из таких исходных веществ, которые приводят к соединениям, которые выше описаны как предпочтительные.

Фармацевтические препараты.

Изобретение позволяет получать фармацевтические препараты, содержащие соединения формулы I.

Фармакологические применимые соединения изобретения могут применяться, например, для получения фармацевтических препаратов, которые содержат эффективное количество биологически активного вещества вместе или в смеси со значительным количеством неорганических или органических, твердых или жидких, фармацевтически применимых носителей.

Фармацевтические препараты могут быть использованы для буквального, ректального или орального, или парентерального, как внутримышечное или внутривенное, введения теплокровным (людям и животным), которые содержат эффективную дозу фармакологического биологически активного вещества как такового, так и со значительным количеством фармацевтически применимого носителя. Доза биологически активного вещества зависит от состояния, индивидуальных фармакодинамических данных, излечиваемого заболевания, а также способа введения.

Возможно использование этих фармпрепаратов для лечения вызываемых ретровирусам заболеваний, например СПИДа, в особенности, когда ВИЧ-1 вызывает заболевание. Для этого вводят терапевтически эффективное количество предлагаемых в изобретении соединений формулы I, в особенности теплокровному, например людям, которое из-за одного из указанных заболеваний, в особенности СПИДа, нуждается в такого рода лечении. Вводимые теплокровным, например людям весом примерно 70 кг, дозы составляют примерно от 3 мг до примерно 10 г, предпочтительно примерно от 40 мг до 4 г, например, примерно от 300 мг до 1,5 г на индивидуум в день, разделяя дозы предпочтительно на 1 3 раза, которые, например, могут быть одинаковыми. Ребенок получает обычно половинную дозу взрослых.

Фармацевтические препараты содержат примерно 1 95 предпочтительно примерно 20 90 биологически активного вещества. Предлагаемые согласно изобретению фармацевтические препараты могут быть изготовлены, например, в форме ампул, пузырьков, свечей, драже, таблеток или капсул.

Фармацевтические препараты получают известным образом, например путем обычных способов растворения, лиофилизации, смешения, гранулирования или дражирования.

Предпочтительно применяют растворы биологически активного вещества, наряду с ними также суспензии или дисперсии, а именно в особенности изотонические водные растворы, дисперсии или суспензии, причем их, например, в случае лиофилизированных препаратов, которые содержат биологически активное вещество индивидуально или вместе с основой, например маннитом, можно готовить перед применением. Фармацевтические препараты могут быть стерилизованными и/или содержать вспомогательные вещества, например консерванты, стабилизаторы, смачиватели и/или эмульгаторы, агенты растворения, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы, и их получают известным способом, например путем обычного способа растворения или лиофилизации. Указанные растворы или суспензии могут содержать повышающие вязкость вещества, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливинилпирролидон или желатин.

Суспензии в масле содержат в качестве масляной компоненты обычные для инъекционных целей растительные, синтетические или полусинтетические масла. В качестве таковых нужно назвать в особенности жидкие сложные эфиры жирных кислот, которые в качестве кислотной компоненты содержат длинноцепочечную жирную кислоту с 8 22, в особенности 12 22 атомами углерода, например лауриновая, тридециловая, миристиновая, пентадециловая, пальмитиновая, маргариновая, стеариновая, арахидоновая, бегеновая кислота, или соответствующие ненасыщенные кислоты, например олеиновая кислота, элаидиновая кислота, эрукановая кислота, бразидиновая кислота или линолевая кислота, в случае необходимости при добавке антиоксидантов, например витамина Е, --каротин или 3,5-ди-трет. -бутил-4-окситолуол. Спиртовая компонента этих сложных эфиров жирных кислот имеет максимально 6 С-атомов и представляет собой одно- или многоатомный, например одно-, двух- или трехатомный спирт, например метанол, этанол, пропанол, бутанол или пентанол или их изомеры, прежде всего гликоль и глицерин. В качестве сложных эфиров жирных кислот поэтому, например, нужно назвать: этилолеат, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, "Лабрафил М 2375" (полиоксиэтиленглицеринтриолеат фирмы Gattefossr, Париж), "Мидлиол 812" (триглицерин насыщенных жирных кислот с длиной цепи С₈-C₁₂ фирмы Huls AG, Германия), особенно растительные масла, как хлопковое, миндальное, оливковое, клещевинное масло, сезамол, соевое масло и прежде всего арахисовое масло.

Приготовление препаратов для инъекций осуществляют обычным образом в стерильных условиях, таким как заполнение в ампулы или пузырьки, а также закрывание емкостей.

Фармацевтические препараты для орального применения можно получать комбинацией биологически активного вещества с твердыми основами, полученную смесь в случае необходимости гранулируют и, если желательно или необходимо, после добавки пригодных вспомогательных веществ, перерабатывают в таблетки, драже-ядра или капсулы, или путем приготовления дисперсий, предпочтительно с фосфолипидами, которые заливают в стаканчики. При этом биологически активные вещества можно встраивать в основы из синтетического материала, которые отдают их дозировано или позволяют им диффундировать.

Пригодными основаниями являются, в особенности, наполнители как сахар, например лактоза, сахароза, маннит или сорбит, целлюлозные препараты и/или фосфат кальция, например трифосфат кальция или гидрофосфат кальция, далее связующие, как крахмальные клейстер, при применении, например, кукурузного, пшеничного, рисового или картофельного крахмалов, желатины, траганта, метилцеллюлозы, оксипропилметилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы натрия и/или поливинилпирролидона и/или, если желательно, расширителей, как вышеуказанные крахмалы; далее, карбоксиметил-крахмалы, поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар, альгиновая кислота или ее соль, как альгинат натрия. Вспомогательные средства в первую очередь представляют собой регуляторы текучести и смазки, например кремневая кислота, тальк, стеариновая кислота или ее соли, как стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоль. Ядра также снабжаются пригодными, в случае необходимости резистентными к желудочному соку, покрытиями, причем применяют концентрированные растворы сахара, которые в случае необходимости содержат гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксан титана, лаковые растворы в пригодных органических растворителях или, для приготовления резистентных к желудочному соку покрытий, растворы пригодных целлюлозных препаратов, как этилцеллюлозофталат или оксипропилметилцеллюлозофталат. Капсулы представляют собой разъемные капсулы из желатина, а также мягкие, закрытые капсулы из желатины и пластификатора, как глицерин или сорбит. Разъемные капсулы содержат биологически активное вещество в форме гранулята, например, с наполнителями, как лактоза, связующими, как крахмалы, и/или мягчителями, как тальк или стеарат магния, и в случае необходимости со стабилизаторами. В мягких капсулах биологически активное вещество растворено или суспендировано предпочтительно в пригодных масляных вспомогательных веществах, как жировые масла, парафиновое масло или жидкие полиэтиленгликоли, причем также можно добавлять стабилизаторы и/или антибактериальные средства. Таблетки или драже с покрытиями и оболочки капсул могут иметь красители или пигменты, например, для идентификации или для обозначения различных доз биологически активного вещества.

В качестве фармацевтических препаратов особенно предпочтительны стабилизированные фосфолипидами дисперсии биологически активного вещества, предпочтительно для орального применения, содержащие

а) фосфолипид или несколько фосфолипидов формулы:



где R_A обозначает C_10-20-ацил, R_B обозначает водород или С_10-20-ацил, R_a, R_b и R_c обозначают водород или С_1-4-алкил и n обозначает целое число 2 4, и при желании

б) другой фосфолипид или несколько других фосфолипидов,

в) биологически активное вещество и

г) фармацевтически применимую жидкость-основу и при желании другие вспомогательные вещества и/или консерванты.

Способ приготовления этих дисперсий отличается тем, что раствор или суспензию компонентов а) и в) или а), б) и в), предпочтительно а) и б) в весовом соотношении 20 1 1 5, в особенности 5 1 1 1, путем разбавления водой превращают в дисперсию, затем органический растворитель удаляют, например, путем центрифугирования, гель-фильтрации, ультрафильтрации или особенности путем диализа, например тангенциального диализа, предпочтительно при удалении воды; полученную дисперсию, предпочтительно после добавки вспомогательных веществ или консервантов, в случае необходимости, при установлении приемлемого значения рН путем добавки фармацевтически приемлемых буферов, как фосфатные соли или органические кислоты (чистые или растворенные в воде), как уксусная кислота или лимонная кислота, предпочтительно рН 3 6, например рН 4 5; в случае, если дисперсия уже не имеет нужной концентрации биологически активного вещества, концентрируют, предпочтительно до концентрации биологически активного вещества 2 30 мг/мл, в особенности 10 - 20 мг/мл, причем концентрирование осуществляют предпочтительно по указанным выше методам для удаления органического растворителя, в особенности путем ультрафильтрации, например при применении аппаратуры для осуществления тангенциального диализа и ультрафильтрации.

Полученная этим способом, стабилизированная фосфолипидная дисперсия стабильна при комнатной температуре по меньшей мере несколько часов, воспроизводима относительно количественного содержания компонентов и токсикологически безопасна и поэтому пригодна в особенности для орального применения людям.

Порядок величин полученных частиц в дисперсии переменный и составляет предпочтительно примерно 1,0 х 10^-8 примерно 1,0 х 10^-5 м, в особенности примерно 10^-7: 2 x 10^-6 м.

Номенклатура фосфолипидов формулы I и нумерация С-атомов осуществляется руководствуясь данными в Eur. G. of Buochem. 9,11 21 (1977) "Nomenclature of Lipids", IUPAC-IUB. Комиссия по биохимической номенклатуре (СВN) рекомендациями (sn-номенклатура, стереоспецифическая нумерация).

В фосфолипиде формулы А R_A и R_B имеют значения С_10-20-ацил, предпочтительно линейный С_10-20-алканоил с четным числом С-атомов и линейный С_10-20-алканоил с двойной связью и четным числом С-атомов.

Линейный алканоил с С_10-20, R_A и R_B с четным числом С-атомов представляет собой, например, н-додеканоил, н-тетрадеканоил, н-гексадеканоил или н-октадеканоил.

Линейный С_10-20-алканоил R_A и R_B с двойной связью и четным числом С-атомов представляет собой, например, 6-цис, 6-транс, 9-цис или 9-транс-додеценоил, -тетрадеценоил, -гексадеценоил, -октадеценоил или -икозеноил, в особенности 9-цис-октадеценоил (олеоил).

В фосфолипиде формулы А n обозначает целое число 2 4, предпочтительно 2. Группа формулы (C_nH_2n) представляет собой неразветвленный или разветвленный алкилен, например 1,1-этилен, 1,1-, 1,3- или 1,2- или 1,3-пропилен или 1,2-, 1,3- или 1,4-бутилен. Предпочтителен 1,2-этилен (n 2).

Фосфолипиды формулы А представляют собой, например, природные цефалины, где R_a, R_b и R_c обозначают водород, или природные лецитины, где R_a, R_b и R_c обозначают метил, например цефалин или лецитион из сои, мозга крупного рогатого скота, печени крупного рогатого скота или куриных яиц, с различными или идентичными ацильными группами R_A и R_B, или их смеси.

Предпочтительны синтетические, главным образом чистые фосфолипиды формулы А с различными или идентичными ацильными группами R_A и R_B.

Понятие "синтетический" фосфолипид формулы А означает фосфолипиды, которые относительнo R_A и R_B имеют единый состав. Такие синтетические фосфолипиды представляют собой предпочтительно нижеуказанные лецитины и цефалины, ацильные группы R_A и R_B имеют определенную структуру и производятся от определенной жирной кислоты со степенью чистоты выше, чем примерно 95 R_A и R_B могут быть одинаковыми или разными и ненасыщенными. Предпочтительно R_A насыщен, например н-гексадеканоил, а R_B ненасыщен, например 9-цис-октадеценоил (олеоил).

Понятие "природные" фосфолипиды формулы А означает фосфолипиды, которые относительно R_A и R_B не имеют никакого однородного состава. Такие природные фосфолипиды также представляют собой лецитины и кефалины, ацильные группы которых R_A и R_B структурно неопределяемы и производятся от природных смесей жирных кислот.

Понятие "по существу чистый" фосфолипид означает степень чистоты более, чем 70 мас. фосфолипида формулы А, которая обнаруживается соответствующими методами определения, например, с помощью бумажной хроматографии.

Особенно предпочтительны синтетические, по существу чистые фосфолипиды формулы А, где R_A обозначает линейный С_10-20-алканоил с четным число С-атомов и R_B обозначает линейный С_10-20-алканоил с двойной связью и четным число С-атомов. R_a, R_b и R_c обозначают метил и "n" 2.

В особенно предпочтительно фосфолипиде формулы А R_A обозначает н-додеканоил, н-тетрадеканоил, н-гексадеканоил или н-октадеканоил и R_B обозначает 9-цис-додеценоил, 9-цис-тетрадеценоил, 9-цис-гексадеценоил, 9-цис-октадеценоил или 9-цис-икозеноил. R_a, R_b и R_c обозначают метил и n 2.

Особенно предпочтительным фосфолипидом формулы А является синтетический 1-гексадеканоил-2-(9-цис-октадеценоил)-3-sn-фосфатидилхолин с чистотой более, чем 95

Предпочтительными природными, по существу чистыми фосфолипидами формулы А являются в особенности лецитин (L----фосфатидилхолин) из сои и куриных яиц.

Для ацильных остатков в фосфолипидах формулы А употребляются также указанные в скобках обозначения: 9-цис-додеценоил (лауролеоил), 9-цис-тетрадеценоил (миристолеоил), 9-цис-гексадеценоил (пальмитолеоил), 6-цис-октадеценоил (петрозелоил), 6-транс-октадеценоил (петрозулаидоил), 9-цис-октадеценоил (олеоил), 9-транс-октадеценоил (эладоил), 11-цис-октадеценоил (вакценоил), 9-цис-икозеноил (гадолеоил), н-додеканоил (лауроил), н-тетрадеканоил (миристоил), н-гексадеканоил (пальмитоил), н-октадеканоил (стеароил), н-икозаноил (арахидоил).

Другими фосфолипидами являются предпочтительно сложные эфиры фосфатидной кислоты (3-sn-фосфатидная кислота) с указанными ацильными остатками, как фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин.

Труднорастворимые биологически активные вещества также могут быть в виде водорастворимых, фармацевтически приемлемых солей, как определено выше.

В жидкости-основе г) компоненты а), б), и в) или а) и в) содержатся в виде липосом, так что в течение времени от нескольких дней до недель не образуются никакие твердые вещества или твердые агрегаты, как мицеллы, и жидкость с указанными компонентами, в случае необходимости после фильтрации, вводится предпочтительно орально.

В жидкости-основе г) могут содержаться фармацевтически приемлемые, нетоксичные вспомогательные вещества, которые пригодны для получения изотонических условий, например ионные добавки, как хлорид натрия, или неионные добавки (каркасообразователи), как сорбит, маннит или глюкоза, или лактоза, фруктоза или сахароза.

Дополнительно к водорастворимым вспомогательным веществам в жидкости-основе могут находиться применимые для жидких фармацевтических форм эмульгаторы, смачиватели или поверхностно-активные вещества, в особенности эмульгаторы, как олеиновая кислота, неионные поверхностно-активные вещества типа сложного эфира жирной кислоты и многоатомного полиоксиспирта, как сорбитанмонолаурат, -олеат, -стеарат или -пальмитат; сорбитантристеарат или -триолеат; полиоксиэтиленовые аддукты сложных эфиров жирной кислоты с многоатомным оксиспиртом, как полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, -олеат, -стеарат, -пальмитат, -тристеарат или -триолеат; сложные эфиры полиэтиленгликоля и жирной кислоты, как полиоксиэтилстеарат, полиэтиленгликоля и жирной кислоты, как полиоксиэтилстеарат, полиэтиленгликоль-400-стеарат, полиэтиленгликоль-2000-стеарат, в особенности блоксополимеры этиленоксида с пропиленоксидом типа Pluronic (Wyandotte Chem. Corp.) или Synperonic (ICI).

Предпочтительными консервантами являются, например, антиоксиданты, как аскорбиновая кислота, или бактерициды, как сорбиновая кислота или бензойная кислота.

Исходные материалы

Новые исходные материалы и/или промежуточные продукты, а также способы их получения тоже являются частью описания. Предпочтительно применяют такие исходные вещества и выбирают реакционные условия таким образом, что приходят к указанным как предпочтительным соединениям.

При получении всех исходных материалов свободные функциональные группы, которые не должны участвовать в соответствующей реакции, могут быть незащищенными или находиться в защищенной форме, например защищаться вышеуказанными в способе а) защитными группами. Эти защитные группы в необходимые моменты времени могут высвобождаться путем описанных в способе е) реакций. Соединения с солеобразующими группами, смотря по обстоятельствам, также могут найти применение в виде солей, и соли получаются на любой стадии или снова переводятся в свободные соединения.

В формулах, если стереохимия асимметрических атомов углерод не определяется непосредственно благодаря соответствующему выбору символов связи, конфигурация асимметрических атомов углерода обозначается: (S), (R) и (S, R).

Карбоновые кислоты формулы II или ее реакционноспособные производные известны и имеются в продаже или могут быть получены известными способами. Например, они могут быть получены из соединений формулы:



где R₂ указанные для соединений формулы I значения и Pa обозначает защитную для аминогруппы группу, в особенности (низший алкокси)-карбонил, как трет. -бутоксикарбонил, или фенил-(низший алкокси)-карбонил, как бензилоксикарбонил, которые путем восстановления переводят в соединение формулы:



где остатки имеют указанные в последний раз значения.

Восстановление производных аминокислот формулы XII до соответствующих альдегидов XII осуществляют, например, путем восстановления до соответствующих спиртов и последующего окисления в альдегиды формулы XIII.

Восстановление до спиртов осуществляют обычно путем гидрирования соответствующих галоидангидридов кислот или других, указанных в способе а) активированных производных карбоновых кислот, или путем введения во взаимодействие активированных производных карбоновых кислот соединений формулы XII, в особенности ангидридов, с органическими карбоновыми кислотами, предпочтительно сложных эфиров галогенмуравьиной кислоты, как изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (которые предпочтительно получают путем превращения соединений формулы XII в присутствии основных аминов, например, три-(низший алкил)-аминов, как триэтиламин, в органических растворителях, как циклические простые эфиры, например, диоксан, при температурах от -50^oС до 80^oC, предпочтительно при 0 50^oC, с комплексными гидридами, как боргидриды щелочных металлов, например, боргидрид натрия, в водном растворе в присутствии или в отсутствие указанного выше применяемого органического растворителя, при температурах от -50^o до 80^oС, предпочтительно при 0 50^oC. Последующее окисление полученных спиртов осуществляют предпочтительно с помощью таких окислителей, которые селективно превращают гидроксильную группу в альдегидную, например, как хромовая кислота или ее производные, как пиридинийхромат или трет.- бутилхромат, бихромат (серная кислота, триоксид серы в присутствии гетероциклических оснований, как пиридин) SO₃, ди-(низший алкил)-сульфоксидов, как диметилсульфоксид, далее, азотной кислоты, пиролюзита или диоксида селена, в воде, водных или органических растворителях, как галогенированные растворители, например метиленхлорид, амиды карбоновых кислот, как диметилформамид, и/или простые циклические эфиры, как тетрагидрофуран, в присутствии или в отсутствие основных аминов, например, как три-(низший алкил)-амино, как триэтиламин, при температурах от -70>^oC до 100^oC, предпочтительно от -70^oC до -50^oC или при от -10^oC до 50^oС, например как описано в европейской патентной заявке ЕР-А-0 236 734.

Также возможно прямое восстановление соединений формулы XII в альдегиды, например, путем гидрирования в присутствии частично отравленного палладиевого катализатора или путем восстановления соответствующих сложных эфиров аминокислот, например сложных низших алкиловых эфиров, как сложный этиловый эфир, с помощью комплексных гидридов, например, боргидридов, как боргидрид натрия, или предпочтительно гидридов алюминия, например, литийалюминийгидрида, литий-три-/трет. -бутокси/-гидрида или в особенности диизобутилалюминийгидрида; в аполярных растворителях, например, в углеводородах, или ароматических растворителях, как толуол, при 100 0^oС, предпочтительно при от -70^oC до -30^oC, и последующего превращения в соответствующие семикарбазоны, например, с помощью соответствующих солей кислот семикарбазонов, как семикарбазидгидрохлорид, в водных системах растворителей, как спирт/вода, например этанол/вода, при температурах от -20 до 60^oC предпочтительно при 10 30(198>C, и взаимодействия полученного семикарбазона с реакционноспособным альдегидом, например формальдегидом, в инертном растворителе, например полярном органическом растворителе, например амиде карбоновой кислоты, как диметилформамид, при температурах от -30 до 60^oC, предпочтительно при 0 30^oC, и затем вводят во взаимодействие с кислотой, например сильной неорганической кислотой, как галогенводород, в водном растворе, в случае необходимости в присутствии вышеуказанного растворителя, при температурах от -40 до 50^oС, предпочтительно при (-10) (+30)^oC.

Соответствующие сложные эфиры получают путем взаимодействия аминокислот с соответствующими спиртами, например этанолом, аналогично применяемым при конденсации и в способе б) условиям, например путем введения во взаимодействия с неорганическими галоидангидридами кислот, как тионилхлорид, в смесях органических растворителях, как смеси из ароматических и спиртовых растворителях, например, толуола с этанолом, при температурах от -50^oC до 50^oС, предпочтительно при от -10^oC до 20^oC.

Получение соединений формулы XIII осуществляют особенно предпочтительным образом в условиях, аналогичных указанным в J. Org. Chem. 47, 3016, 1982; J. Org. Chem. 43, 3624. 1978; или J. Org. Chem. 51, 3921 1986, реакционным условиям.

Для синтеза соединений формулы III полученное соединение формулы XIII вводят во взаимодействие с реакционноспособным тетраалкилсиланом, предпочтительно галогенметил-три-(низший алкил)-силаном, как хлорметилтриметилсилан, в инертном растворителе, например в простом эфире, как диэтиловый эфир, циклическом простом эфире, как диоксан, или сложном эфире, как этилацетат, при температурах от -100^oС до 50^oC, предпочтительно при -65^oС до 40^oC, причем получают соединения формулы:



где R₆, R₇ и R₈ обозначают низший алкил, например метил, а остальные остатки имеют указанные выше значения; полученные соединения, в присутствии кислоты Льюиса, как эфират трехфтористого бора, в инертном растворителе, в особенности галогенированном углеводороде, как метиленхлорид, с последующей дополнительной обработкой с помощью водного основания, например, раствора гидроксида натрия, при температурах от -30^oC до 80^oC, в особенности при 0 50^oС, при удалении и отщеплении защитных групп, переводят в олефиновые соединения формулы:



где R₂ имеет указанные для соединений формулы I значения; в соответствующий олефин снова вводят защитную для аминогруппы группу Ра, как описано в способе а) для введения защитных для аминогруппы групп, в особенности с помощью ангидрида кислоты в хлорированном углеводороде, как метиленхлорид, при температурах от -50^oC до 80^oC, в особенности при 0 35^oC; причем получается защищенный амино-олефин формулы:



в котором остатки имеют указанные выше значения, двойную связь превращают в оксиран, предпочтительно стеpеоселективно при использовании пероксидов, в особенности надкарбоновых кислот, например галогеннадбензойной кислоты, как м-хлорнадбензойной кислоты, в инертном органическом растворителе, предпочтительно в галогенированном углеводороде, как метиленхлорид, при температурах от -50^oC до 60^oС, в особенности при от -10^oC до 25^oC, и, необходимо, осуществляют разделение диастереомеров, причем получают эпоксиды формулы:



в которых остатки имеют указанные выше значения; к соответствующим олефинам присоединяют соответствующий сложный диэфир малоновой кислоты, например диметиловый эфир малоновой кислоты или диэтиловый эфир малоновой кислоты, например, путем активирования метиленовой группы сложного диэфира малоновой кислоты с помощью щелочного металла, например натрия, в полярном безводном растворителе, например спирте, как метанол или этанол, при температурах от -50^oC до 80^oC, в особенности при 0 35^oC, и раствор обрабатывают кислотой, такой как карбоновая кислота, например лимонная кислота; причем получается лактон формулы:



где R₉ обозначает низший алкоксил, например метокси или этокси, а прочие остатки имеют указанные выше значения; при желании в соединениях, в которых R₂ обозначает фенил, незамещенный или замещенный как описано для соединений формулы I, этот остаток восстанавливают до циклогексила, в особенности путем гидрирования, предпочтительно в присутствии катализатора, как оксиды благородных металлов, например смеси оксидов Ph (III) Pt (VI) (согласно Nichimura), предпочтительно в полярных растворителях, как спирты, например метанол, при нормальном давлении или вплоть до 5 бар, предпочтительно при нормальном давлении, при температурах от -20^oC до 50^oC, предпочтительно при 10 35^oC; непосредственно или после гидрирования полученные соединения формулы XVIII вводят во взаимодействие с вводящим остаток R₃-CH₂-реагентом, например формулы R₃-CH₂-W, где R₃ имеет указанные для соединений формулы I значения, а W обозначает нуклеофильную удаляемую группу, выбираемую из этерифицированного с помощью сильной неорганической или органической кислоты гидроксила, например этерифицированного с помощью неорганической кислоты, например галогенводородной кислоты, как хлорводородная, бромводородная или иодводородная кислота, или с помощью сильной органической сульфокислоты, как в случае необходимости замещенная, например, галогеном, как фтор, (низшая алкан)-сульфокислота, или ароматической сульфокислоты, например, которая может быть замещена низшим алкилом, как метил, галогеном, как бром, и/или нитрогруппой бензолсульфокислоты, например метансульфокислоты, триметансульфокислоты или п-толуолсульфокислоты, гидроксила, как в особенности бромид; в безводном полярном растворителе, например спирте, как этанол, в присутствии щелочного металла, например натрия, при температурах от -50^oС до 80^oC, предпочтительно при 0 35^oC; с получением соединений формулы:



где остатки имеют указанные выше значения;

соединение формулы XIX гидролизуют и декарбоксилируют, например, путем гидролиза с помощью основания, как гидроксид щелочного металла, например гидроксида лития, при температурах от -50^oC до 80^oC, предпочтительно примерно при 0 35^oC; в органическом растворителе, например простом эфире, как диметоксиэтан, и последующего декарбоксилирования путем нагревания в инертном растворителе, предпочтительно в углеводороде, например ароматическом углеводороде, как толуол, при температурах 40 120^oС, предпочтительно 70 100^oC, причем получается соединение формулы:



где остатки имеют указанные выше значения;

полученные (R, S, S)- и (S,S,S)-изомеры разделяют путем колоночной хроматографии; (R,S,S)-изомер применяют далее и для раскрытия лактонового кольца вводят во взаимодействие с основанием, как гидроксид щелочного металла, например гидроксид лития, с инертном растворителе, как простой эфир, например диметоксиэтан, с получением соединения формулы:



где остатки имеют указанные выше значения,

в полученное соединение вводят защитную для гидроксила группу Ру, например одну из указанных в способе а) защитных для гидроксила групп при указанных там условиях, в особенности три-(низший алкил) силильную группу, с помощью соответствующего галоген-три-(низший алкил)-силана, например трет. -бутилдиметилхлорсилана, в полярном растворителе, как ди-(низший алкил)-(низший алканоил)-амид, как диметилформамид, в присутствии пространственно затрудненного аминосоединения, как циклического амина, например имидазола, при температурах -50^oC до 80^oC, предпочтительно при 0 35^oC, с получением соединения формулы:



где остатки имеют указанные выше значения, и соединения формулы III c указанными в способе а) остатками получают, например, путем конденсации с соединением формулы VII, где остатки имеют указанные в способе в) значения, при указанных в способе а) условиях, в особенности путем реакции in situ в присутствии конденсационного средства, как бензотриазол-1-ил-окситри-(диметиламино) -фосфонийгексафторфосгексафторфосфат или О-бензтриазол-1-ил-N,N,N",N"-тетраметилуронийгексафосфат, пространственно затрудненного амина, как N-метилморфолин, и препятствующего рацемизации соединения, как 1-оксибензтриазол, в полярном растворителе, предпочтительно амиде кислоты, например ди-(низший алкил)-амино-(низший алканоил)-амиде, как диметилформамиде, при температурах от -50^oC до 80^oC, в особенности при 0 35^oC, и путем последующего отщепления защитных групп Ра, как описано в способе е), если Ра не обозначает никакого соответствующего радикалу Н-В₁- с указанными выше для соединений формулы I значения, кроме связи, остатка; конденсации с соединением формулы Н-В₁-OH, где В₁ имеет указанные в способе б) значения, при указанных выше условиях конденсации и, наконец, отщепления Ру и/или других защитных групп, как описано в способе е). Для получения соединений формулы III возможно последовательное взаимодействие соединений формулы XXII с соединениями, которые вводят радикалы -B₁-, -A₁-, -A₂-, -A₁A₂-, -A₂NR₄R₅ и/или NR₄R₅ в соединение формулы VII.

Вышеуказанные соединения формулы XV также у несущего остаток -NH₂ атома углерода могут быть в (R,3)-конфигурации вместо указанной (S)-конфигурации; соединения формул XII, XIII, XVI и в особенности формул XVII, XVII, XVIII, XIX, XX, XXI и/или также у несущего остаток Ра-NH-атома углерода могут быть в (R, S)-конфигурации вместо (S)-конфигурации, причем соответствующие рацемические смеси или смеси диастереомеров можно разделять на всех стадиях.

Соединения формулы XX, в которых остатки имеют указанные значения, получают также из соединений формулы XIII, в которых остатки имеют указанные значения, тем, что альдегиды формулы XIII вводят во взаимодействие со сложными эфирами 2-галогенпропионовой кислоты, в особенности сложными эфирами 2-иодпропионовой кислоты, как этиловый эфир 2-иодпропионовой кислоты, причем получают соединения формулы:

где остатки имеют указанные значения и где несущий атом углерода остаток Ра-NH- также альтернативно может быть в (R,S)-конфигурации.

Взаимодействие осуществляют прежде всего при образовании гомоенолята сложного эфира 2-галогенпропионовой кислоты в присутствии смеси цинка с медью в ди-(низший алкил)-(низшем алканоил)-амиде, например диметилацетамиде, при температурах 0 100^oC, в особенности при 20 80^oC. В другом случае предпочтительно в атмосфере инертного газа, как азот или аргон, тетра-(низший алкил)-ортотитанат, как тетраизопропилортотитанат, в ароматическом растворителе, как толуол или ксилол, в присутствии галогенуглеводорода, как метиленхлорид, смешивают с тетрагалогенидом титана, как тетрахлорид титана, и перемешивают при 0 50^oC, в особенности при 20 30^oC, причем образуется соответствующий дигалогентитан-ди-(низший алкилат) или предпочтительно тригалоген-титан-(низший алкилен), в особенности трихлортитан-диизопропилат. К нему при температурах от -50^o до 0^oC, в особенности при от -40^oC, до -25^oC, прикапывают раствор гомоенолята цинка и затем прикапывают альдегид формулы XIII в галогенуглеводороде, например метиленхлориде, причем взаимодействие протекает при от -50^o до 30^oC, предпочтительно примерно при от -20^oC до 5^oС, с образованием сложного эфира, в особенности сложного этилового эфира, соединения формулы XXIII. Этот сложный эфир затем гидролизуют с получением соединения формулы XIII, как описано выше, предпочтительно в органическом растворителе, как ароматический углеводород, например в толуоле или ксилоле, в присутствии кислоты, как карбоновая кислота, например уксусная кислота, при температурах от 20^oC до температуры кипения реакционной смеси, в особенности при 70 90^oC. Если необходимо, то осуществляет разделение диастереомеров, например, путем хроматографии, например, на силикагеле, с помощью смеси органических растворителей, как смесь из алкана со сложным эфиром, как низший алкан и сложный (низший алкил)-(низший алканоил)-эфир, как гексан/этилацетат.

Из соединения формулы XXIII затем путем депротонирования с помощью сильного основания, при получении образовавшегося у -углерода, наряду с оксогруппой лактона, карбаниона и последующего нуклеофильного замещения остатка W в соединении формулы R₃-CH₂-W, где R₃ и W определены как указано выше при получении соединений формулы XIХ, получают соответствующее соединение формулы XX, причем реакция предпочтительно стереоселективно приводит к (R)-конфигурации у несущего остаток R₃-CH₂-атома углерода в соединении формулы XX. Взаимодействие с сильным основанием, в особенности с амидом кремнийорганического соединения щелочного металла, например бис-(три-низший алкил)-силил-амид щелочного металла, как бис-(триметилсилил)-амид лития, или, далее, ди-(низший алкил)-амида щелочного металла, как диизопропиламид лития, предпочтительно осуществляется в инертном органическом растворителе, в особенности простом эфире, например циклическом простом эфире, как тетрагидрофуран, при температурах от -100^oC до 0^oC, предпочтительно при от -78^o до -50^oC; нуклеофильное замещение in situ осуществляется путем добавления соединения формулы R₃-CH₂-W, в том же самом растворителе, при температурах от -100^oC до 0^oC, предпочтительно при от -60^o до -40^oC.

Соединение формулы XV, где остатки имеют указанные значения, и где предпочтительно несущий группу -NH₂ атом углерода находится в (R,S)-конфигурации, также можно получать тем, что сложный эфир муравьиной кислоты, например низший алкиловый эфир муравьиной кислоты, как этилформиат, путем реакции с аллиламином при температурах 20 70^oC, в особенности при 50 60^oC, превращают в аллиламид муравьиной кислоты. Этот амид затем в атмосфере инертного газа, как азот или аргон, дегидратируют, предпочтительно с помощью галоидангидрида кислоты, как оксихлорид фосфора, фосгена или в особенности галоидангидрида органической сульфокислоты, например хлорангидрида арилсульфокислоты, как хлорангидрид толуолсульфокислоты, в присутствии основания, например три-(низший алкил)-амина, как триэтиламин, или в особенности моно- или бициклического амина, как пиридил или хинолин, при температурах 50 100^oC, в особенности примерно 80 100^oC. При этом образуется аллилизоцианид, который путем взаимодействия с литийорганической солью, например (низший алкил)-литий, как н-бутиллитий, переводят в соответствующую литиевую соль, причем реакция предпочтительно осуществляется в инертном органическом растворителе, в особенности в простом эфире, как диоксан или диэтиловый эфир, или в алкане, например гексане, или в смеси этих растворителей, при температурах от -120^oC до -50^oC, в особенности примерно при от -100^o до -90^oC. Образовавшуюся литиевую соль затем in situ вводят во взаимодействие с соединением формулы R₂-CH₂-W, где R₂ имеет указанные для соединения формулы I значения и W имеет указанные выше для соединений формулы R₂-CH₂-значения, предпочтительно бром; предпочтительно путем прикапывания R₂-CH₂-W в органическом растворителе, например в простом эфире, как тетрагидрофуран, при указанных в последний раз температурах и последующего нагревания до 0 50^oC, предпочтительно до 20 30^oC. При этом образуется изоцианат формулы:



где остатки имеют указанные значения. Соединение формулы XXIV затем гидролизуют, предпочтительно в водном растворе, в который добавлена кислота, например в водной галогенводородной кислоте, как соляная кислота, в особенности в концентрированной соляной кислоте, при температурах от -20^oC до 30^oC, в особенности примерно при 0 10^oC, и получают соединение формулы XV, где остатки определены выше и где предпочтительно несущий группу -NH₂ атом углерода находится в (R,S)-конфигурации.

Соединение формулы IV известны или получаются по известным способам, например путем конденсации карбоновых кислот формулы II, или их реакционноспособных производных, с аминосоединениями формулы Н-B₁-OH, где R₁ имеет указанные для соединений формулы IV значения, причем конденсацию осуществляют как описано выше или в случае соединений формулы II, где R₁ обозначает N-(гетероциклил)-(низший алкил)-N-(низший алкил)-аминокарбонил, как N-(2-пиридилметил)-метиламинокарбонил, аналогично европейскому патенту N 0 402 646, 1990 (пример 218).

Соединения формулы V получают, например, из соединений формулы XXII путем конденсации с соединением формулы VII или последовательной конденсации с соединениями (например, H-A₁-OH, H-A₂-OH; H-A₁-A₂-OH), или соединением формулы XI, где, смотря по обстоятельствам, остатки имеют вышеуказанные значения, фрагменты которых соответствуют соединению формулы VII. Условия конденсации аналогичны описанным для получения соединений формулы III.

Соединения формулы VI получают, например, из аминосоединений формулы XXII, например путем введения защитной для карбоксила группы, как описано в способе а) и отщепления защитной группы Ра, как описано в способе е), путем конденсации с карбоновой кислотой формулы R₁-B₁-OH, где остатки имеют указанные для соединений формулы I значения.

Соединения формулы VII получают, например, из соответствующих аминокислот Н-А"₁-OH или Н-А"₂-OH или пептидов Н-А₁-А₂-OH и аминокомпонент формулы XI, где остатки, смотря по обстоятельствам, имеют вышеуказанные значения, путем конденсации аналогично описанному в способе а) способу. Для получения соединений с восстановленной пептидной связью предпочтительно на стадии дипептида, например, с помощью водорода в присутствии катализаторов на основе благородных и тяжелых металлов, как платина или палладий, при необходимости на носителях, как активный уголь, или благодаря комплексным гидридам, предпочтительно комплексным гидридам, например литийалюмогидриду или диизоамилборану, в полярных растворителях, как спирты, например этанол, или простых эфиров, как циклические простые эфиры, например тетрагидрофуран, при температурах 0 150^oC, предпочтительно при от 20^oC до температуры кипения соответствующей реакционной смеси. Амин формулы XI известен или получается известными методами.

Соединения формулы VIII можно получать, например, из соединений формулы VI путем конденсации с вводящей остаток А₁ аминокислотой. Взаимодействие осуществляется аналогично описанным для способа а) условиям.

Соединения формулы IX получают, например, из аминокислоты Н-А"₂-OH, где А"₂ имеет указанные в способе г) значения, и амина формулы XI, где остатки имеют указанные для соединений формулы I значения, путем конденсации.

Соединения формулы Х получают, например, из соединений формулы VI и из соответствующих аминокислот Н-А"₁-OH или Н-А"₂-OH или пептидов Н-А₁-А₂-OH и аминокомпонент формулы XI, где остатки, смотря по обстоятельствам, имеют вышеуказанные значения, путем конденсации аналогично способу,

описанному в способе а). Для получения соединений с восстановленной пептидной связью между А₁ и А₂ восстанавливают пептидную связь между А₁ и А₂, предпочтительно на стадии дипептида, например, с помощью водорода в присутствии катализаторов на основе благородных и тяжелых металлов, как платина или палладий, при необходимости на носителях, как активный уголь, или благодаря комплексным гидридам, предпочтительно комплексным гидридам, например, как литийалюмогидрид или диизоамилборан, в полярных растворителях, как спирты, например этанол, или простых эфирах, как циклические простые эфиры, например тетрагидрофуран, при температурах 0 - 150^oC, предпочтительно при от 20^oC до температуры кипения реакционной смеси.

Остальные исходные соединения известны, получаются известным способом или имеются в продаже.

Следующие примеры служат для иллюстрации изобретения, однако никоим образом не ограничивают его объема защиты.

Температуры даны в градусах Цельсия (^oC). Если не указано никакой температуры, то реакция проводится при комнатной температуре. Rf-значения, которые указывают соотношение пройденного расстояния соответствующего вещества к пройденному расстоянию фронта растворителя, определяются на пластинах с силикагелем для тонкослойной хроматографии путем тонкослойной хроматографии (ТСХ) в следующих системах растворителей:

Системы растворителей для ТСХ:

А гексан/этилацетат 1 1

Б этилацетат -

В гексан/этилацетат 4 1

Г гексан/этилацетат 2 1

Д гексан/этилацетат 3 1

Е метиленхлорид/метанол 9 1

Ж хлороформ/метанол/вода/ледяная уксусная кислота 85 13 1,5 0,5

З этилацетат/этанол 9 1

И гексан/этилацетат 1 2

К хлороформ/метанол/уксусная кислота/вода 75 27 0,5

Л этилацетат/уксусная кислота 19 1

M метиленхлорид/метанол 7 3

Н метиленхлорид/эфир 49 1

О метиленхлорид/эфир 3 1

Сокращение "Rf/А/" обозначает, например, что Rf-значение определено в системе растворителей А. Количественное соотношение растворителей друг с другом всегда указано в объемных долях (по объему). При определении системы растворителей для колоночной хроматографии количественные соотношения используемых растворителей даны в объемных долях (по объему).

Другие используемые краткие обозначения и сокращения имеют следующие значения:

абс. абсолютный

атм. физические атмосферы (единица давления) 1 атм. соответствует 1,013 бар

Boc трет.-бутоксикарбонил

BOP бензотриазол-1-илокси-трис-диметиламино)- фосфонийгексафторфосфат

TCX тонкослойная хроматография

ДЦК дициклогексилкарбодиимид

ДМФ диметилформамид

ДМСО диметилсульфоксид

уксусный эфир этилацетат

эфир диэтиловый эфир

FAB-MS масс-спектроскопия по метод бомбардировки быстрыми атомами

час. час (часы)

HBTU 0-бензтриазол-1-ил-N,N,N",N"-тетраметилуронийгексафосфат

НОБт 1-оксибензтриазол

ИК инфракрасная спектроскопия

мин. минута (минуты)

NMM N-метилморфолин

орг. органический

Pd/C палладий на активном угле (катализатор)

KT комнатная температура

т. пл. точка плавления

рассол насыщенный раствор хлорида натрия

ТБАФ тетрабутиламмонийфторид (тригидрат)

Z бензилоксикарбонил

Масс-спектроскопические измеренные величины получают по методу "бомбардировки быстрыми атомами" (Fast-Atom-Bom-vardment FAB-MS). Массовые данные относятся к протонированным молекулам (М + Н)⁺.

Значения для ИК-спектров указаны в см^-1, в круглых скобках указан соответствующий растворитель.

Для обозначения двухвалентных радикалов природных -аминокислот применяют обычные в химии пептидов сокращения. Конфигурация у --атома углерода указывается путем приставки (L)- или (D); -Cha- обозначает циклогексилаланил; -(п-F-Phe)- обозначает замещенный в п-положении фенильного кольца фтором; -(п-СН₃-Phe)-замещенный в п-положении фенильного кольца метокси-группой; и -(п-CN-Phe)-замещенный в п-положении фенильного кольца циано-группой фенилаланил.

Следующие краткие обозначения остатков определяются путем соответствующих изображений формул и обозначений:

Остаток с сокращением -Phe(C)Phe- обозначает двухвалентный радикал 5-(S)-амино-2-(R)-бензил-4-(S)-окси-6-фенилгексановой кислоты и имеет формулу:

-

Остаток с сокращением -Cha(C) (п-CN)-Phe- обозначает двухвалентный радикал 5-(S)-амино-2-(R)-(п-цианофенилметил)-6-циклогексил-4-(S) -оксигексановой кислоты и имеет формулу:



Остаток с сокращением -Cha(C)Cha)- обозначает двухвалентный радикал 5-(S)-амино-2-(R)-6-циклогексил-2-(R)-циклогексилметил-4-(S) -оксигексановой кислоты и имеет формулу:



Остаток с сокращением -Cha(C) (п-F)-Phe- обозначает двухвалентный радикал 5-(S)-амино-6-циклогексил-2-(R)-(п-фторфенилметил)-4-(S) -оксигексановой кислоты и имеет формулу:



Остаток с сокращением -(п-F)-Phe(C)Phe- обозначает двухвалентный радикал 5-(S)-амино-2-(R)-бензил-6-(п-фторфенил)-4-(S)-оксигексановой кислоты и имеет формулу:



Нижеприведенные дальнейшие изображения формул центральных звеньев соответствуют следующим сокращениям, которые применяются в нижеследующих примерах, приведенных в табл. 1.

Соответственно этому, -Phe[C] [п-F] Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S] -амино-2[R] -[п-фторфенилметил] -4[S] -окси-6-фенилгексановой кислоты; -Phe[C] (п-CN)-Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S]-амино-2[R] -(п-цианофенилметил)-4[S] -окси-6-фенилгексановой кислоты; -Phe[C] (п-СН₃OPhe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S]-амино-4[S]-окси-2[R] -(п-метоксифенилметил)-6-фенилгексановой кислоты; -Phe[C](п-CF₃)Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S] -амино-4[S]-окси-6-фенил-2[R]-(п-трифторметил)-гексановой кислоты; -(п-F)Phe[C](п-F)Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S]-амино-6-(п-фторфенил)-2[R]-(п-фторфенилметил)-4[S] -оксигексановой кислоты; -(п-F)Phe[C](п-СN)Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S] -амино-2[R]-(п-цианофенилметил)-6-(п-фторфенил)-4[S]-оксигексановой кислоты; -Сha[C] (п-СН₃Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S] -амино-2[R] -(п-метоксифенилметил)-6-циклогексил-4[S] -оксигексановой кислоты; -Сha[C](п-CF₃)Phe- соответствует двухвалентному радикалу 5[S]-амино-6-циклогексил-4[S]-окси-2[R] -(п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты (см. табл. 2).

Остаток -(п-F)Phe[C] (п-CF₃)Phe- соответствует, соответственно этому, двухвалентному радикалу 5[S]-амино-4[S]-окси-6-(п-фторфенил)-2[R]-(п-трифторметилфенилметил) -гексановой кислоты.

Символ () должен выражать, что остатки -(СF₃)Phe[C]-Phe-, -(CF₃)Phe[C] (п-F)Phe- и -(CF₃[C](п-СF₃)Phe-, которые соответствуют двухвалентным радикалам 5-амино-2-фенил-4-окси-6-(п-трифторметилфенил)-гексановой кислоты, 5-амино-2-(п-фторфенил)-4-окси-6-(п-трифторметилфенил)-гексановой кислоты и 5-амино-2-(п-трифторметилфенил)-4-окси-6-(п-трифторметилфенил)-гексановой кислоты, в соответствующих примерах находятся в виде смеси 2[R] 4[S] 5[S]-изомеров с 2[S] 4[R] 5[R]-изомеров.

Пример 1. Boc-Cha(C) (n-F)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид

Раствор 160 мг 5[S]-Вос-амино-4[S]-трет.бутилдиметилсилокси)-6- циклогексил-2(R)-(n-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-(Val-(L)-Phe -морфолин-4-ил-амида в 1,8 мл абс. ДМФ смешивают с 116 мг ТБАФ и реакционную смесь затем перемешивают 4,5 ч при КТ. Бесцветный раствор выливают в 50 мл воды и экстрагируют 4 раза уксусным эфиром. Объединенные экстракты, смотря по обстоятельствам, промывают дважды водой и один раз рассолом и затем сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток кристаллизуют из диизопропилового эфира и получают титульное соединение.

ТСХ Rf (И) 0,14; FAB-MS (M + H)⁺ 753.

Исходный материал получают следующим образом.

1 a) N-3-[S]-(Boc-амино)-2-(R,S)-окси-4-фенил-1-триметилсилилбутан.

24,7 г магния вносят в 100 мл абс. эфира и в течение 35 мин смешивают с небольшим количеством йода и одновременно с 132,5 мл хлорметилтриметилсилана и 300 мл эфира, причем температура поддерживается при 38^oC с помощью ледяной бани. Полученную реакционную смесь затем перемешивают с суспензией 48,6 г N-Boc-фенилаланиналя (получение: D.J, Kempf. J. Org. Chem, 51, 3921. 1986) в 1,1 л эфира. Через 90 мин реакционную смесь нагревают до КТ и перемешивают следующие 90 мин при этой температуре. После этого выливают в 2 л ледяной воды и 1,5 л 10-ной водной лимонной кислоты. Отделенную водную фазу экстрагируют дважды 500 мл эфира. Все эфирные экстракты промывают с помощью 500 мл 10 -ного водного раствора лимонной кислоты и дважды рассолом. После высушивания над сульфатом натрия концентрируют в вакууме и полученное титульное соединение применяют далее без дополнительной очистки.

ТСХ Rf (B) 0,6; FAB-MS (M + H)⁺ 3,38.

1 б) 1-Фенил-3-бутен-2(S)-амин.

Раствор 18,8 г н-3(S)-(Boc-амино)-(R,S)-окси-4-фенил-1-триметилсилилбутана в 420 мл метиленхлорида при 5^oC в течение 10 мин смешивают в 35,6 мл примерно 48-ного раствора трифторида бора. Реакционную смесь затем перемешивают 16 ч при КТ, охлаждают до 10^oС и в течение 20 мин смешивают с 276 мл 4 н. раствора гидроксида натрия. Водную фазу отделяют и дважды экстрагируют по 400 мл метиленхлоридом. Объединенные органические экстракты промывают рассолом и сушат над сульфатом натрия. Титульный продукт применяют дальше без дополнительной очистки.

ТСХ Rf (Ж) 0,15; ИК (метиленхлорид) (см^-1): 3370, 3020, 2920, 1640, 1605.

в) N-Boc-1-Фенил-3-бутен-2(S)-амин.

21,5 г 1-фенил-3-бутен-2(S)-амина растворяют в 500 мл абс. метиленхлорида и по каплям смешивают с раствором 38,3 г Boc-ангидрида в 250 мл метиленхлорида. После перемешивания в течение 1,5 ч при КТ концентрируют до 100 мл, затем разбавляют с помощью 1,5 л эфира и последовательно промывают дважды 400 мл 10-ной лимонной кислоты, один раз 400 мл воды, один раз 400 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и дважды рассолом и сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя очищают с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир 95 5 80/20) и титульное соединение выкристаллизовывают из гексана. Т. пл. 67 68^oС.

ТСХ Rf (B) 0,4; FAB-M (M + H)⁺ 248.

1г) 2(R)-[I(S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил]-оксиран.

Раствор 1,45 г N-Boc-1-Фенил-3-бутен-2(S)-амина в 20 мл метиленхлорида в течение 15 мин при 0 5^oС смешивают с раствором 9,74 г м-хлорнадбензойной кислоты в 50 мл метиленхлорида. После перемешивания в течение 18 ч при той же температуре перемешивают еще следующие 8 ч при нагревании до КТ и выливают в охлажденный льдом 10-ный раствор карбоната натрия. Водную фазу экстрагируют трижды эфиром. Объединенные органические фазы промывают последовательно трижды 10 -ным раствором сульфата натрия, трижды насыщенным раствором бикарбоната натрия, раствором тиосульфата натрия и рассолом и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования растворителя титульное соединение очищают путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир: 4/1) и перекристаллизуют из гексана. Т.пл. 51 52^oC.

ТСХ Rf (B) 0,33; FAB-MS (M + H)⁺ 264.

1д) 5(S)-(I(S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил-(3-(R,S) -карбоэтоксидигидрофуран-2-(3Н)-он.

Раствор 26 мл диэтилового эфира малоновой кислоты в 260 мл абс. этанола порциями смешивают с 3,4 г натрия. После расхода натрия (примерно 1,5 ч) в течение 10 мин прикапывают раствор 13 г 2(R)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-оксирана в 100 мл этанола. После перемешивания в течение 5 ч при КТ реакционную смесь выливают в 1,5 л ледяной воды и с помощью 10-ной лимонной кислоты устанавливают рН 4. После 4-кратного экстрагирования эфиром объединенные органические фазы последовательно промывают два раза насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, один раз рассолом, снова насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и еще раз рассолом. После концентрирования растворителя титульное соединение получают путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир: 4/1).

TCX Rf (B) 0,33; FAB-MS (M + H)⁺ 378.

1e) 5(S)-(I(S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R, S) -карбэтоксидигидрофуран-2-(3H)-он.

10 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3-(R,S) -карбэтоксидигидрофуран-2-(3Н)-она в 100 мл этанола вместе с 1 г катализатора Nishimura (оксиды Ph (III) и Pt (VI) (моногидрид, Дегусса)) в течение 2 ч гидрируют при нормальном давлении (примерно 1 атм.). Катализатор отфильтровывают через целит (диатомовая земля, Сигма, Швейцария), промывают этанолом и фильтрат выпаривают.

ТСХ Rf (B) 0,23.

1ж) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R,S) -карбэтокси-3-(п-фтор-фенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-он

10,2 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R,S) -карбэтоксидигидрофуран-2-(3Н)-она вводят во взаимодействие с 5,39 г п-фторбензилбромида (Fluka, Buchs, Швейцария) и 0,68 г натрия в 180 мл этанола при КТ. Так как, согласно ТСХ, спустя 1,5 ч еще не весь лактон вступил во взаимодействие, добавляют еще 0,2 г натрия и 0,7 г п-фторбензилбромида. Спустя 16 ч выливают смесь 10-ной лимонной кислоты и льда и экстрагируют три раза эфиром. Органические фазы промывают два раза водой и рассолом, сушат над Na₂SO₄ и выпаривают. После добавления гексана с уксусным эфиром выкристаллизовывается маслянистый продукт под воздействием частично ультразвука при получении титульного соединения (соотношение диастереомеров 4 1). Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/уксусный эфир 4 1) маточного раствора дает дополнительное количество титульного соединения (соотношение диастереомеров примерно 1 4).

TCX Rf (B) 0,29; FAB-MS (M + H)⁺ 492.

1з) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R)-(п-фторфенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-он и 5(S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(S)-(п-фторфенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-он.

10 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R, S)- карбэтокси-3-(п-фторфенилметил)-дигидрофуран-2(3Н)-она (соотношение диастереомеров примерно 1 1) в 174 мл 1,2-диметоксиэтана в течение 5 мин по каплям смешивают с 91 мл раствора гидроксида лития, при КТ, и перемешивают 15 ч при КТ. После выпаривания растворителя полученный остаток выливают в 500 мл 10-ной лимонной кислоты и экстрагируют трижды эфиром. Объединенные эфирные фазы промывают один раз рассолом и сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают сырую карбоновую кислоту, которую с помощью последующего декарбоксилирования путем нагревания в течение 9 ч при 90^oC в 450 мл толуола переводят в смесь титульных соединений. Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/уксусный эфир 9 1 --> 4:1) дает сначала 3(R)-эпимер (TCX Rf (Д) 0,45), за ним 3(S)-эпимер (ТСХ Rf (Д) 0,41).

1и) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-циклогексил-2(R)-(п-фторфенилметил) -гексановая кислота.

2,05 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R)-(п-фторфенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-она в 78 мл диметоксиэтана и 39 мл воды при 20 25^oC по каплям в течение 2 мин смешивают в 19,6 мл 1 М раствора гидроксида лития. После перемешивания в течение 3 ч при КТ концентрируют при пониженном давлении и остаток растворяют в 100 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и 5 мл 10-ной лимонной кислоты и экстрагируют четыре раза метиленхлоридом. Объединенные органические фазы промывают рассолом и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования получают титульное соединение в виде пены, которое без дальнейшей очистки используют в самой ближайшей стадии.

1к) 5(S)-(Boc-амино)-4-(S)-(трет. -бутилдиметилсилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановая кислота.

Раствор 2,01 г 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-4(S)-окси-6-циклогексил-2(R)-(п-фторфенилметил)- гексановой кислоты в 6,4 мл ДМФ вместе 2,73 г имидазола и 3,39 г трет. -бутилдиметилхлорсилана перемешивают 18 ч при КТ. Затем реакционную смесь вливают в ледяную воду, экстрагируют 3-я порциями уксусного эфира, промывают объединенные органические фазы с помощью 10-ной лимонной кислоты, воды и рассола, сушат над сульфатом натрия и выпаривают их. Получают масло. Это масло растворяют в 68 мл метанола и 23 мл ТГФ, смешивают при КТ с раствором 4,1 г карбоната калия в 23 мл воды, перемешивают в течение одного часа и, наконец, частично выпаривают при КТ. Водный остаток выливают в 10 -ный раствор лимонной кислоты и лед, экстрагируют три раза уксусным эфиром, органические фазы промывают два раза водой и рассолом, высушивают их над сульфатом натрия и выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂ гексан/уксусный эфир от 5 1 --> 2 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (Д) 0,2; FAB-MS (M + H)⁺ 552.

1л) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 102 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты, 90 мг ВОР и 27 мг НОБт перемешивают в течение 30 мин при КТ в примерно 2 мл ДМФ и затем смешивают с 74 мг Н-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амида (получение см. в 1м) 1п)). После 16 ч при КТ выпаривают и остаток распределяют между 3-я порциями уксусного эфира, воды, насыщенного раствора бикарбоната натрия, воды и рассола, высушивают органические фазы с помощью сульфата натрия и выпаривают их. Получают титульное соединение в виде сырого продукта.

TCX Rf (И) 0,57; FAB-MS (M + H)⁺ 867.

1м) Z-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 4,49 г Z-(L)-Phe-ОН в 190 мл метиленхлорида охлаждают до 0^oC и смешивают с 3,09 г ДЦК. После перемешивания в течение 20 мин при 0^oC, в течение 15 мин прикапывают раствор 1,31 мл морфолина в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают следующие 24 ч при КТ и после отфильтровывания выделившейся дициклогексилмочевины промывают последовательно метиленхлоридом, водным раствором бикарбоната натрия и рассолом. После высушивания над сульфатом натрия и концентрирования получают сырое титульное соединение, которое выкристаллизовывают из эфира.

ТСХ Rf (Б) 0,55.

1н) Н-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 5,5 г Z-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амида с 1,5 г 10-ного Pd/C в 150 мл метанола при КТ в течение одного часа с помощью рассчитанного количества водорода путем гидрогенолиза переводят в титульное соединение. После отфильтровывания катализатора концентрируют и после разбавления уксусным эфиром полученный раствор промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. После колоночной хроматографии (аналогично примеру 1п)) получают титульное соединение в чистой форме.

ТСХ Rf (T) 0,3.

1o) Z-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 2,14 г Z-(L)-VaI-OH в 80 мл абс. охлажденного льдом метиленхлорида смешивают с 1,75 г ДЦК и после перемешивания в течение 20 мин при этой температуре по каплям смешивают в течение 15 мин с раствором 2 г Н-(L)-Phe-морфолин-4-иламида. Реакционную смесь перемешивают следующие 24 ч при КТ и образовавшуюся мочевину отфильтровывают. Фильтрат промывают последовательно водным раствором бикарбоната натрия и рассолом и после высушивания над сульфатом натрия, концентрируют. Путем растирания с эфиром и отфильтровывания нерастворимого остатка получают, после концентрирования, титульное соединение, которое без дополнительной очистки перерабатывают далее.

ТСХ Rf (E) 0,7.

1п) Н-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н) 3,9 г Z-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амида переводят путем гидрогенолиза с помощью 0,5 г 10-ного Pd/C в 150 мл метанола в сырое титульное соединение, которое очищают путем колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид вплоть до метиленхлорид/метанол 97,5 2,5 (по объему).

ТСХ Rf (E) 0,4.

Пример 2. Boc-Phe(C)Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 330,3 мг 5(S)-Boc-амино-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметил-гексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амида в 3 мл абс. ДМФ с помощью 247,2 мг ТБАФ переводят в титульное соединение, которое выкристаллизовывается из гексана. ТСХ Rf (E) 0,5. FAB-MS (M + H)⁺ 729.

Исходный материал получают следующим образом.

2a) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R,S)-карбэтокси-3 -фенилметилдигидрофуран-2-(3Н)-он

Раствор 23,8 г 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-фенилэтил)-3(R,S)-карбэтоксидигидрофуран-2-(3Н)-он в 410 мл абс. этанола и 14,4 мл бензилбромида добавляют к раствору 2,76 г натрия в 410 мл абс. этанола. Реакционную смесь перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 18 ч и затем выливают в смесь льда с 10-ной лимонной кислотой. После трехкратного экстрагирования эфиром объединенные органические экстракты промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования получают титульное соединение в виде бесцветного масла, которое без дополнительной очистки используют в самой ближайшей стадии.

ТСХ Rf (B) 0,4. FAB-MS (M + H)⁺ 468.

2б) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R)-фенилметилдигидрофуран-2-(3Н)-он и 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(S)-фенилметилдигидрофуран.

Раствор 10 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R,S)-карбэтокси-3 -фенилметилдигидрофуран-2-(3Н)-она в 175 мл диметоксиэтана по каплям в течение 5 мин смешивают с 81,4 мл 1 М водного раствора гидроксида лития, при КТ. Затем перемешивают 15 ч при КТ и после выпаривания растворителя полученный остаток выливают в 500 мл 10-ной лимонной кислоты и экстрагируют трижды эфиром. Объединенные эфирные фазы промывают однократно рассолом и сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают 9,8 г сырой карбоновой кислоты, которую декарбоксилируют до титульного соединения путем нагревания в течение 14 ч при 90^oC в 450 мл толуола. Титульное соединение очищают путем колоночной хроматографии (гексан/уксусный эфир 9/1), причем сначала получают 5(S)-(I/S)-Вос-амино)-2-фенилэтил)-3-(R)-фенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-он (ТСХ Rf (B) 0,3; FAB-MS (M + H)⁺ 396, a затем получают 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(S)-фенилметилдигидрофуран-2-(3Н)-он.

ТСХ Rf (B) 0,25; FAB-MS (M + H)⁺ 396.

2в) 5(S)-(Boc-амино)-(4/S)-окси-6-фенил-2(R)-фенилметилгексановая кислота.

Раствор 17,6 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил-3(R)-фенилметилдигидрофуран-2-(3Н)-она в 710 мл простого этиленгликольдиметилового эфира и 352 мл воды в течение 10 мин при 20^oC по каплям смешивают с 176 мл 1М раствора гидроксида лития. Затем реакционную смесь перемешивают 1,5 ч при КТ и растворитель выпаривают. Остаток выливают в 1 л холодной 10-ной лимонной кислоты и кислый раствор экстрагируют трижды по 800 мл уксусным эфиром. Объединенные экстракты промывают сначала 800 мл воды, затем 800 мл рассола. После высушивания органического раствора над сульфатом натрия растворитель отгоняют. Сырое титульное соединение без дальнейшей очистки используют в самой ближайшей стадии.

FAB-MS (M + H)⁺ 414.

2г) 5(S)-(Boc-амино)-(4/S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R) -фенилметилгексановая кислота

Раствор 6,35 г 5(S)-(Boc-амино)-(4/S)-окси-6-фенил-2(R)-фенилметилгексановой кислоты в 90 мл ДМФ при перемешивании смешивают с 8 г имидазола и 10 г трет. -бутилдиметилхлорсилана. После перемешивания в течение 18 ч при КТ желтый прозрачный раствор вливают в ледяную воду и экстрагируют трижды по 250 мл уксусного ангидрида. Объединенные экстракты промывают последовательно трижды с помощью 10-ной лимонной кислоты, один раз водой и трижды водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, один раз водой и, наконец, рассолом. После высушивания над сульфатом натрия растворитель выпаривают и таким образом полученный простой трет.-бутилдиметилсилиловый эфир (13,5 г) растворяют в 53 мл ТГФ и обрабатывают с помощью 53 мл уксусной кислоты и 20 мл воды. После перемешивания в течение 3 ч при КТ выливают воду и трижды экстрагируют эфиром. Объединенные эфирные экстракты промывают дважды водой и один раз рассолом и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир 3,5/1,5) и получают титульное соединение.

ТСХ Rf (Г) 0,37; FAB-MS (M + H)⁺ 528.

2д) 5(S)-(Boc-амино)-(4/S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R) -фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л) 250 мг 5(S)-(Вос-амино)-(4/S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты в 3 мл ДМФ с помощью 230,5 мг ВОР, 70,4 мг НОБт, 182,6 мл N-метилморфолина и 189,5 мг Н-VaI-Phe-морфолин-4-иламида переводят в титульное соединение.

TCX Rf (A) 0,24; FAB-MS (M + H)⁺ 843.

Пример 3. Boc-Cha(C)-(п-CN/Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амид.

Аналогично примеру 1 185 мг 5(S)-(Boc-амино)-(4/S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (n-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-VaI)-(Phe-морфолин-4-иламида с помощью 13 мг ТБАФ в 2,5 мл абс. ДМФ переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,33; FAB-MS (M + H)⁺ 760.

Исходный материал получают следующим образом.

3a) 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3- карбометоксидигидрофуран-2-(3Н)-он

2,5 г 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-фенилэтил)-3-карбэтоксидигидрофуран-2-(3Н)-она (пример 1д) в 50 мл метанола гидрируют в присутствии 250 мг оксидов Ph (III) и Pt/VI) (моногидрат) (катализатор Nishimura, Дегусса) в течение 2 ч при КТ и нормальном давлении (примерно 1 атм). После отфильтровывания и дополнительной промывки катализатора метанолом концентрируют и титульное соединение путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексaн/уксусный эфир 3/1 (по объему)) получают в чистой форме.

TCX Rf (Д) 0,2; FAB-MS (M + H)⁺ 370.

3б) 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R, S)-карбометокси-3- (п-цианофенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 1 ж) 2,25 г 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R, S)- карбометоксидигидрофуран-2-(3Н)-он с помощью 1,32 г n-цианобензилбромида (Fluka, Buchs Швейцария) и 156 мг натрия в метаноле переводят в титульное соединение. После обработки получают титульное соединение.

ТСХ Rf (Д) 0,27.

3в) 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R)-(п-цианофенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-он и 5(S)-(I/S)-(Вос-амино)-2-циклогексилэтил)-3(S)-(п-цианофенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 1з) 2,95 г 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3- карбометокси-(n-цианофенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она в 55 мл 1,2-диметоксиэтана с помощью 24,4 мл 1 М раствора гидроксида лития переводят в соответствующую карбоновую кислоту и с помощью последующего декарбоксилирования путем нагревания в 130 мл толуола переводят в титульное соединение. Разделение с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир: 4/1 3,5/1,5 (по объему)) дает сначала 3-(R)-форму титульного соединения, которая выкристаллизовывается из смеси эфира с гексаном (т. пл. 106 108^oC. TCX Rf (A) 0,53; FAB-MS (M + H)⁺ 427) и затем дает 3(S)-форму титульного соединения (ТСХ Rf (A) 0,47; FAB-MS (M + H)⁺ 427).

3г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-циклогексил-2(R)-(n-цианофенилметил) -гексановая кислота.

Раствор 550 мг 5(S)-(I/S)-(Boc-амино)-2-циклогексилэтил)-3(R)-(п-цианофенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-она в 20 мл 1,2-диметоксиэтана и 14 мл воды при 20 25^oC по каплям в течение 2 мин смешивают с 7 мл 1 М раствора гидроксида лития. После перемешивания в течение 2 ч при КТ концентрируют при пониженном давлении и остаток растворяют в 100 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и 5 мл 10-ной лимонной кислоты и четырежды экстрагируют метиленхлоридом. Объединенные органические фазы промывают рассолом и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования получают титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,4.

3д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (n-цианофенилметил)-гексановая кислота

790 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-циклогексил-2(R)-(n-цианофенилметил) -гексановой кислоты примерно в 10 мл ДМФ при перемешивании смешивают с 1,18 г трет.-бутилдиметилхлорсилана и имидазола. После перемешивания в течение 18 ч при КТ желтый прозрачный раствор выливают в ледяную воду и экстрагируют трижды по 250 мл уксусным эфиром. Объединенные экстракты последовательно промывают трижды с помощью 10-ной лимонной кислоты, один раз водой, трижды водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, один раз водой и, наконец, рассолом. После высушивания над сульфатом натрия растворитель выпаривают и таким образом полученный простой трет.-бутилдиметилсилиловый эфир (13,5 г) растворяют в 53 мл ТГФ и обрабатывают с помощью 53 мл уксусной кислоты и 20 мл воды. После перемешивания в течение 3 ч при КТ выливают воду и экстрагируют трижды эфиром. Объединенные эфирные экстракты промывают трижды водой и сушат над сульфатом натрия. После концентрирования сырой продукт подвергают конечной очистке. Конечную очистку осуществляют путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир 3/1 1/1 (по объему)). Получают титульное соединение.

ТСХ Rf (A) 0,42; ИК (метиленхлорид), см^-1: 2856, 2230, 1711, 1609, 1440.

3e) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-Val -(L)P-Phe-морфолин-4-иламид

Аналогично примеру 1л) 138 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексановой кислоты с помощью 122 мг ВОР, 37 мг НОБт, 0,069 мл N-метилморфолина и 100 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение. Очистку осуществляют путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир 1/1 по объему). Получают чистый титульный продукт.

TCX Rf (A) 0,25; FAB-MS (M + H)⁺ 874.

Пример 4. H-Phe(C)Phe-(L)-Val(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 1,048 г Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-ил-амида (пример 2) в 20 мл абс. метиленхлорида при 5^oC в течение 3 мин смешивают с 20 мл трифторуксусной кислоты. После следующих 90 мин перемешивания, при КТ, выпаривают, остаток смешивают со 150 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагируют трижды уксусным эфиром. Объединенные экстракты промывают последовательно 100 мл воды, 100 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 100 мл воды и рассолом. После высушивания над сульфатом натрия растворитель выпаривают и сырой продукт очищают путем колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид/метанол/аммиак 95/5/0,1 90/10/0,1 по объему) с получением титульного соединения. ТСХ Rf (Ж) 0,33; FAB-MS (M + H)⁺ 629.

Пример 5. 3-Бензофураноил-Phe(C)Рhe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 30,9 г бензофуран-3-карбоновой кислоты (получение согласно Chin-Hsing Chou и др. G. Org. Chem. 51, 4208 4212, 1986) в 3 мл ДМФ смешивают последовательно с 93 мг ВОР, 29 мг НОБт и 0,044 мл N-метилморфолина и затем перемешивают 30 мин при КТ. После добавки 100 мг Н-Phe(C)Phe-(L)-Val(L)-Phe-морфолин-1-иламида (пример 4) перемешивают еще следующие 3 ч при КТ и после этого выливают в 100 мл воды. После трехкратных экстракции по 50 мл уксусным эфиром объединенные органические фазы промывают последовательно 100 мл воды, 100 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 100 мл воды и 100 мл рассола. После высушивания над сульфатом натрия и выпаривания остаток настаивают в эфире и полученное соединение высушивают.

ТСХ Rf (Ж) 0.73; FAB-MS (M + H)⁺ 773.

Пример 6. Никотиноил-Phe(C)Phe-(L)-Val-(C)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 5 23,5 мл никотиновой кислоты в 3 мл ДМФ с помощью 93 мг ВОР, 29 мг НОБт, 0,044 мл N-метилформолина и 100 мг Н-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-1-иламида переводят в титульное соединение. После кристаллизации из эфира и высушивания получают чистое титульное соединение.

ТСХ Rf (Ж) 0,57; FAB-MS (M + H)⁺ 734.

Пример 7. Морфолинокарбонил-Val-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 5,44 мг N-морфолинокарбонил-(L)-Val в 3 мл ДМФ с помощью 93 мл ВОР, 29 мг НОБт, 0,044 мл N-метилморфолина и 100 мг Н-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 4) переводят в титульное соединение. Кристаллизация из эфира и высушивание приводят к титульному соединению.

ТСХ Rf (Ж) 0,5; FAB-MS (M + H)⁺ 841,5.

7a) N-Хлоркарбонилморфолин.

180 мл толуола в течение 5 мин при КТ смешивают с 180 мл 20-ного раствора фосгена в толуоле и затем в течение 10 мин при охлаждении до 5 - 10^oC раствором 18 мл морфолина в 180 мл толуола. Белого цвета суспензию перемешивают 1 ч при КТ и еще 2 ч в токе азота. После отсасывания твердого вещества и последующей промывке его толуолом фильтрат выпаривают. Таким образом полученное титульное соединение без дополнительной очистки обрабатывают далее. ИК (CH₂Cl₂): 1730, 1400, 1205 см^-1.

7б) N-Морфолинокарбонил-(L)-Val-бензиловый сложный эфир.

3 мл N-хлоркарбонилморфолина в 210 мл CH₂Cl₂ смешивают с 15 г п-толуолсульфоновой соли (L)-валин-бензилового сложного эфира (Fluka, Buchs, Швейцария) и 15,4 мл n-этилдиизопропиламина. После перемешивания в течение 16 ч при КТ еще раз смешивают с 1,5 мл затем, спустя 23 ч, снова с 0,8 мл N-хлоркарбонилморфолина. Спустя в целом 39 ч реакционную смесь концентрируют, разбавляют уксусным эфиром и промывают последовательно дважды с помощью 1 н. соляной кислоты один раз водой, один раз насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и дважды рассолом. После высушивания над сульфатом натрия концентрируют при пониженном давлении. Сырой продукт очищают путем колоночной хроматографии (SiO₂, уксусный эфир) с получением титульного соединения.

ТСХ Rf (Б) 0,5.

7в) N-Морфолинокарбонил-(L)-Val.

Раствор 9,7 г N-Морфолинокарбонил-(L)-Val-бензилового сложного эфира в 300 мл уксусного эфира гидрируют в течение 3 ч ч при КТ в присутствии 2 г 10 -ного Pd/C при нормальном давлении. После отфильтровывания и дополнительной промывки катализатора уксусным эфиром маточный раствор концентрируют. Остаток обрабатывают уксусным эфиром, фильтруют через Hyflo Super Cel (кизельгур, Fluka, Buchs, Швейцария) и концентрируют при пониженном давлении. Полученное титульное соединение без дальнейшей очистки перерабатывают далее.

Пример 8. Boc-Cha(C)Cha-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 3а) 100 г Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 2) в 30 мл метанола гидрируют в присутствии 40 мг катализатора Nichimura в течение 4 ч при КТ. После отфильтрования катализатора и концентрирования, остаток выкристаллизовывается из гексана и очищается путем колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/уксусный эфир 1/2 по объему) для получения титульного соединения.

ТСХ Rf (И) 0,5; FAB-MS (M + H)⁺ 747.

Пример 9. Boc-Cha(C)(п-F(Phe-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 0,18 г 5(S)-(Вос-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)P-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-ил-амида с помощью 114 мг ТБАФ в 1,8 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,44; FAB-MS (M + H)⁺ 771.

Исходный материал получают следующим образом.

9а) Z-(L)-п-Фторфенилаланин.

К раствору 5,0 г Н-(L)-(п-F-Phe)-OH(L)-п-фторфенилаланин (Fluka, Buchs, Швейцария) в 55 мл ТГФ и 20 мл Н₂O добавляют 2 н. NaOH вплоть до значения рН примерно 10. К полученной суспензии прикапывают 4,66 г бензилового эфира хлормуравьиной кислоты и дополнительно перемешивают в течение 4 ч при КТ; рН-значение поддерживают путем добавления 2 н. NaOH примерно равным 10. Реакционную смесь выпаривают, остаток распределяют между этилацетатом, 10-ным раствором лимонной кислоты и рассолом и сушат над Na₂SO₄. Путем колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан/метанол 7 3) получают чистое титульное соединение.

TCX Rf (K) 0,50.

9б) Z-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1м) 9,01 г Z-(L)-(п-F-Phe)-OH и 2,38 г морфолина в 350 мл дихлорметана с помощью 5,62 г ДЦК переводят в титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, уксусный эфир) получают в чистой форме.

TCX Rf (Б) 0,6.

9в) Н-(L)-(п-F-Phe)-формолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н) 0,90 г Z-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида в 50 мл метанола путем гидрогенолиза с помощью 0,2 г 10-ного Pd/C переводят в титульное соединение.

TCX Rf (M) 0,4.

9г) Z-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1о) 1,36 г Н-(L)-(p-F-Phe)-морфолин-4-иламида и 1,36 г Z-(L)-Val в 70 мл дихлорметана с помощью 1,11 г ДЦК переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,55.

9д) Н-(L)-Val-(L)-(n-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н) 2,80 г Z-(L)-Val-(L)-(n-F-Phe)-морфолин-4-иламида в 150 мл метанола путем гидрогенолиза с помощью 0,6 г 10-ного Рd/C переводят в титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан метанол 9 1) получают в чистой форме.

ТСХ Rf (E) 0,44; FAB-MS (M + H)⁺ 352.

9e) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Раствор 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил--2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 1 к) и 70,3 мл Н-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида в 1,7 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М (0,25 М NMM в СН₃CN) смешивают с 76 мг HBTU. Спустя 6 ч при КТ выпаривают. Распределение остатка между 3-мя порциями этилацетата, водой, 2-мя порциями 10-ного раствора лимонной кислоты, воды, 2-мя порциями насыщенного раствора бикарбоната натрия, воды и, наконец, рассола, высушивание органических фаз над сульфатом натрия и выпаривание дают титульное соединение.

TCX Rf (A 0,2; FAB-MS (M + H)⁺ 885.

Пример 10. Boc-Сha-(C)(п-F)Phe-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 0,18 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)(п-CH₃)Phe- морфолин-4-ил-амида с помощью 114 мг ТБАФ в 1,8 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,4; FAB-MS (M + H)⁺ 783.

Исходный материал получают следующим образом.

10a) Z-(DL)-n-Метоксифенилаланин.

Аналогично примеру 9а) 2,5 г DL-(п-метоксифенилаланина (Bachem, Bubendorf, Швейцария) в 64 мл ТГФ и 17,9 мл Н₂О вводят во взаимодействие с 2,3 г бензилового эфира хлормуравьиной кислоты, причем рН-значение поддерживается примерно равным 10 путем добавления 1 н. Na₂CO₃-раствора. Выпаривание реакционной смеси и распределение остатка между этилацетатом и разбавленной соляной кислотой и рассолом дает титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,3; ИК (CH₂Cl₂): 1720, 1612, 1513 см^-1.

10б) Z-(DL)-(p-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1м) 2,4 г Z-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-OH(Z-DL)-p-метоксифенилаланин в 36 мл метиленхлорида и 0,63 г морфолина в 36 мл метиленхлорида вводят во взаимодействие с 1,5 г ДЦК с получением титульного соединения.

ТСХ Rf (Б) 0,5; ИК (СН₂Cl₂): 1720, 1641, 1612, 1512 см^-1.

10в) Н-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 н) 3,8 г Z-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида в 170 мл метанола путем гидрогенолиза с помощью 0,8 г 10-ного Pd/C превращают в титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид/метанол 9 1) получается чистым.

ТСХ Rf (E) 0,3; ИК (СН₂Cl₂): 1642, 1613, 1514, 1463, 1443 см^-1.

10г) Z-(L)-Val-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1о) 1,80 г Z-(L)-Val-OH в 40 мл метиленхлорида и 1,90 г Н-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида в 40 мл метиленхлорида вводят во взаимодействие с 1,48 ДЦК с получением титульного соединения.

ТСХ Rf (Б) 0,12; ИК (CH₂Cl₂) 1722, 1674, 1643, 1612, 1512, 1465, 1443.

10д) Н-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид и Н-(L)-Val-(D)-(п-СH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н) 3,6 г Z-(L)-Val-(DL)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида в 150 мл метанола путем гидрогенолиза с 0,6 г 10-ного Pd/C переводят в смесь титульных соединений. Колоночная хроматография (SiO₂, дихлорметан --> дихлорметан/метанол 19 1 --> дихлорметан/метанол 9 1 дает сначала функцию, которая согласно аминокислотному анализу с помощью гель-хроматографии (GC) на Хиразил-L-Val-колонке (Е. Bayer Z. Naturforschung, B. 1983, 38, 1281) содержит Н-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид ТСХ Rf (E) 0,52; FAB-MS (M + H)⁺ 364; GC T_Ret ((п-CH₃O-Phe)-производное 27,65 мин); затем идет фракция с эпимером Н-(L)-Val-(D)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида ТСХ Rf (E) 0,37; GC T_Ret (п-СН₃O-(Phe-производное) 27,65 мин)

10e) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е) раствор 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 1к) и 72,7 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4-иламида в 1,7 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, и 1 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 76 мг НBTU для получения титульного соединения.

TCX Rf (A) 0,18; FAB-MS (M + H)⁺ 879.

Пример 11. Boc-Cha(C)(п-F/Phe-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 0,16 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламида с помощью 114 мг ТБАФ в 1,8 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,49; FAB-MS (M + H)⁺ 759.

Исходный материал получают следующим образом.

11a) H-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 3а) 1,0 г Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 1п) в 25 мл метанола гидрируют с помощью 0,15 г катализатора Nishimura до титульного соединения, которое путем колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид --> метиленхлорид/метанол 40 1) и выдержки в гексане получается чистым.

TCX Rf (Г) 0,5; FAB-MS (M + H)⁺ 340. ИК (СH₂Cl₂): 1645, 1509, 1463, 1449.

11б) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Cha -морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е) 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 1 к)) и 67,9 мг Н-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламида в 1,7 мл NMM/CH₃CN, 0,25 M, вводят во взаимодействие с 76 мг НВTU до титульного соединения.

TCX Rf (A) 0,47; FAB-MS (M + H)⁺ 873.

Пример 12. 1,2,3,4-Тетрагидроизохинолин-3(S)-карбонил-Val-Phe(C)-Phe-(L)-Val-Phe- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 4 242 мг N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)- карбонил-Val-Phe(C)-Phe-(L)-Val/-Phe-морфолин-4-ил-амида в 8 мл метиленхлорида расщепляют с помощью 8 мл трифторуксусной кислоты.

TCX Rf (K) 0,5; FAB-MS (M + H)⁺ 887,5; ИК (КВr): 1639, 1531, 1495, 1453.

Исходный материал получают следующим образом.

12a) N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбоновая кислота.

В 400 мл смеси дигексана с водой 1 1 в течение 4 ч при КТ перемешивают 20 г 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбоновой кислоты (получение по P. L. Julian, W. J. Karpel, A. Magnani и E. W. Meyer, J. Am. Chem. Soc. 1948, 70, 180, однако, исходя из (L)----фениланина), 233,6 г карбоната калия и 37 г Boc-ангидрида. Реакционную смесь подкисляют разбавленной НСl до рН 2 и экстрагируют 3 раза с помощью этилацетата. После промывки органических фаз 1 н. раствором гидросульфата калия, водой и рассолом, высушивания над Na₂SO₄, выпаривания и кристаллизации из смеси метиленхлорида с гексаном получают титульное соединение.

TCX Rf (B) 0,2; ()_D= 16 (c 1, метанол).

12б) N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбонил-L-Val-бензиловый сложный эфир.

В атмосфере азота 6,47 г N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбоновой кислоты в 70 мл метиленхлорида при 0^oC с помощью 4,7 г 1-хлор-N,N-2-триметилпроп-1-ениламина (Haveaux, B. Dekoker, A. Rens, M. Sidani, A. R. Toye, J. Ghoser и L. Org. Synth. 59, 29 34) переводят в соответствующий хлорангидрид кислоты и спустя 15 мин смешивают с 9,0 г основания Hunig и раствором 6,83 г L-Val-бензилового сложного эфира в виде гидрохлорида в 54 мл метиленхлорида. Спустя 15 мин при 0^oC и 16 ч при КТ реакционную смесь промывают с помощью 10-ного раствора лимонной кислоты, воды, насыщенного раствора бикарбоната натрия, воды и рассола. Водные фазы экстрагируют двумя порциями метиленхлорида, объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Так как согласно данным ¹H-ЯМР при этом Boc-защитная группа частично удаляется, сырой продукт еще раз вводят во взаимодействие с 6,8 г Boc-ангидрида в 160 мл метиленхлорида и 2,7 г основания Hunig. Колоночная хроматографии (SiO₂, гексан/этилацетат 3 1) дает чистое титульное соединение.

ТСХ Rf (Д) 0,15.

12в) N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбонил-L-Val.

Аналогично примеру 7в) 1,97 г N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбонил-L-Val-бензилового сложного эфира в 50 мл этилацетата гидрируют с помощью 0,4 г 10-ного Pd/C до титульного соединения. Этот материал используется без дальнейшей очистки в самой ближайшей стадии.

TCX Rf (K) 0,53; FAB-MS (M + H)⁺ 377.

12г) N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)- карбонил-Val-Phe(C)Phe-(L)-Val(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 5 180 мг N-Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3(S)-карбонил-L-Val в 4 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 232 мг ВОР, 71 мг НОБт, 011 мл NMM и раствором 250 мг Н-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 4) в 2 мл ДМФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат) дает титульное соединение, которое согласно аминокислотному анализу (GC, Chirasil L Val: /E. Bayer, Z. Naturforschung B. 1983, 38, 12881) в виде побочного продукта содержит эпимер, примерно 14 D-Val.

TCX Rf (Б) 0,4; FAB-MS (M + H)⁺ 987; ИК (КВr): 1697, 1643, 1523, 1496.

Пример 13. Boc-Phe(C)-Phe-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 375 мг 5(S)-Boc-амино(4-(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида в 7 мл ДМФ десилилируют с помощью 275 мг ТБАФ с получением титульного соединения, которое после кристаллизации из смеси диэтилового эфира с гексаном получается чистым.

TCX Rf (Б) 0,50; FAB-MS (M + H)⁺ 747.

Исходный материал получают следующим образом.

13a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л) 250 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 230,6 мг ВОР, 70,4 мг НОБт, 130 мкл NMM и 199,7 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида (получение см. пример 9д), растворенные в 2 мл ДМФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) дает титульное соединение.

ТСХ Rf (И) 0,43; FAB-MS (M + H)⁺ 861.

Пример 14. Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 238 мг 5(S)-Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2-(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4-иламида в 7 мл ДМФ десилилируют с помощью 204,5 мг ТБАФ до титульного соединения, которое после настаивания со смесью диэтилового эфира с гексаном 1 1 и колоночной хроматографии (SiO₂, этилацетат) получается чистым.

TCX Rf (Б) 0,37; FAB-MS (M + H)⁺ 759.

Исходный материал получают следующим образом.

14a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R))- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л) 250 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 230,6 мг ВОР, 70,4 мг НОБт, 130 мкл NMM и 206,6 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида (получение см. пример 10д), растворенными в 2 мл ДМФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,37; FAB-MS (M + H)⁺ 873.

Пример 15. Boc-Phe(C)Phe0-(L)-Val(L)-(Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1 430 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(Cha-морфолин-4-иламида в 5 мл ДМФ десилилируют с помощью 320 мг ТБАФ до титульного соединения, которое после колоночной хроматографии (SiO₂ этилацетат) и настаивания в гексане получается чистым.

TCX Rf (E) 0,51; FAB-MS (M + H)⁺ 735.

Исходный материал получают следующим образом.

15а) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л) 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 3 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 277 мг ВОР, 84,5 мг НОБт, 0,22 мл NMM и 231 мг Н-(L)-Val-(L)-(-Cha-морфолин-4-иламида (получение см. пример 11а), растворенными в 2 мл ДМФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (A) 0,28; FAB-MS (M + H)⁺ 849.

Пример 16. Boc-Phe(C)Phe-(L)-Ile)-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 329,8 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламида в 5 мл ДМФ десилилируют с помощью 242,7 мг ТБАФ с получением титульного соединения, которое после настаивания с гексаном получается чистым.

TCX Rf (Б) 0,57; FAB-MS (M + H)⁺ 743.

Исходный материал получают следующим образом.

16a) Z-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1о) 294 мг Z-(L)-Ile в 10 мл дихлорметана с помощью 229 мг ДЦК и 260 мг Н-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 1н) переводят в титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, этилацетат/гексан 1 1) получается в чистой форме.

TCX Rf (A) 0,43; FAB-MS (M + H)⁺ 482.

16б) Н-(L)-ILe-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 0,398 г Z-(L)-ILe-(L)-Phe-морфолин-4-иламида в 15 мл метанола путем гидрогенолиза с 0,12 г 10-ного Pd/C переводят в титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан/метанол 9 1) получается в чистой форме.

TCX Rf (E) 0,5; FAB-MS (M + H)⁺ 348.

16в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R))- фенилметилгексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 240,5 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 242 мг ВОР, 73,8 мг НОБт, 125,5 мкл NMM и 190 мг Н-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламида. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 1 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (A) 0,21; FAB-MS (M + H)⁺ 857.

Пример 17. Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 343,7 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-Gly-морфолин-4-иламида в 5 мл ДМФ десилилируют с помощью 282,7 мг ТБАФ с получением титульного соединения и, наконец, настаивают в диэтиловом эфире.

ТСХ Rf (Б) 0,23; FAB-MS (M + H)⁺ 639.

Исходный материал получают следующим образом.

17a) Z-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1м), 8,37 г Z-Gly-ОН в 500 мл дихлорметана с помощью 8,25 г ДЦК и 3,49 мл морфолина переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,28.

17б) H-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 10,8 г Z-Gly-морфолин-4-иламида в 600 мл метанола путем гидрогенолиза с 3 г 10-ного Рd/C переводят в титульное соединение, которое после отфильтровывания катализатора и испарения фильтрата используется прямо в самой ближайшей стадии.

TCX Rf (Б) 0,2; ИК (CH₂Cl₂): 1654, 1461, 1440.

17в) Z-(L)-VaI-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 3,7 г Z-(L)-валина в 75 мл дихлорметана с помощью 2,06 г ДЦК и 1,44 г Н-Gly-морфолин-4-иламида переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,21.

17г) H-(L)-VaI-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 3,78 г Z-(L)-VaI-Gly-морфолин-4-иламида в 160 мл метанола путем гидрогенолиза с 0,6 г 10-ного Pd/С переводят в титульное соединение, которое после отфильтровывания катализатора путем колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан/метанол 9 1 --> 4 1) получается в чистой форме.

ТСХ Rf (E) 0,23; FAB-MS (M + H)⁺ 244; ИК (СН₂Cl₂): 1650, 1508, 1467, 1439.

17д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 302 мг ВОР, 92,1 мг НОВт, 156,5 мкл NMM и 175,5 мг Н-(L)-VaI-Gly-морфолин-4-иламида. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 1 9 --> этилацетат) дает титульное соединение.

TCX Rf (Б) 0,44; FAB-MS (M + H)⁺ 753.

Пример 18. Boc-Рhe(C)Phe-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 362,4 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламида в 5 мл ДМФ десилилируют с помощью 292,7 мг ТБАФ до титульного соединения и, наконец, настаивают в диэтиловом эфире.

ТСХ Rf (Б) 0,30; FAB-MS (M + H)⁺ 653.

Исходный материал получают следующим образом.

18a): Z-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1о), 2,65 г Z-(L)-Ile в 75 мл дихлорметана вводят во взаимодействие с 2,06 г ДЦК и 1,44 г Н-Gly-морфолин-4-иламида (пример 17б). После настаивания в диэтиловом эфире получают титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,7.

18б) Н-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 3,2 г Z-(L)-Gly-морфолин-4-иламида в 160 мл метанола путем гидрогенолиза с 0,6 г 10-ного Pd/C переводят в титульное соединение, которое после отфильтровывания катализатора путем колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан/метанол 9 1) получается в чистой форме.

TCX Rf (E) 0,3; FAB-MS (M + H)⁺ 258; ИК (СН₂Cl₂): 1653, 1510, 1467, 1439.

18в): 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенил-2(R)-фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 301,8 г ВОР, 92,1 мг НОВт, 156,5 мкл NMM и 185 мг Н-(L)-Ile-Gly-морфолин-4-иламида. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 9 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (Б) 0,40; FAB-MS (M + H)⁺ 767.

Пример 19. Boc-Phe(C)Phe-(L)-VaI-(L)-(-VaI-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 416 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-VaI-морфолин-4-иламида в 10 мл ДМФ десилилируют с помощью 330 мг ТБАФ до титульного соединения и, наконец, настаивают в диэтиловом эфире.

TCX Rf (Б) 0,39; FAB-MS (M + H)⁺ 681.

Исходный материал получают следующим образом.

19а) Z-(L)-VaI-(L)-VaI-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1м), 2,0 мг Z-(L)-VaI-(L)-VaI-OH (Bachem, Bubendorf, Швейцария) в 50 мл дихлорметана с помощью 1,17 г ДЦК и 0,96 мл морфолина, растворенных в 50 мл дихлорметана, переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,5.

19б) H-(L)-VaI-(L)-VaI-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1н), 2,3 г Z-(L)-VaI-(L)-VaI-морфолин-4-иламида в 220 мл метанола путем гидрогенолиза с 0,5 г 10-ного Pd/C переводят в титульное соединение, которое после отфильтровывания катализатора путем колоночной хроматографии (SiO₂, дихлорметан --> дихлорметан/метанол 19 1 --> 9:1) и растирания в смеси диэтиловый эфир/гексан получается в чистой форме.

TCX Rf (E) 0,74; FAB-MS (M + H)⁺ 286; ИК (CH₂Cl₂): 1642, 1507, 1461, 1440.

19в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-VaI-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 277 мг ВОР, 84,5 мг НОБт, 156,5 мкл NMM и 194 мг Н-(L)-VaI-морфолин-4-иламида. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,27; FAB-MS (M + H)⁺ 795.

Пример 20. Boc-Phe(C)Phe-(L)-VaI-(L)-(-Phe-тиоморфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 484 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламида в 10 мл ДМФ десилилируют с помощью 356 мг ТБАФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) и настаивание в гексане дает титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,31; FAB-MS (M + H)⁺ 745.

Исходный материал получают следующим образом.

Аналогично примеру 1к), 1,99 г Z-(L)-VaI-(L)-Phe-OH (Bachem, Bubenforf, Швейцария) в 40 мл дихлорметана вводят во взаимодействие с 1,03 г ДЦК и раствором 0,52 г тиоморфолина в 40 мл дихлорметана с получением титульного соединения, которое после экстракции получается в виде масла.

TCX Rf (E) 0,8; ИК (CH₂Cl₂): 1725, 1675, 1642, 1499, 1465, 1454.

20б) H-(L)-VaI-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламид.

При охлаждении льдом 2 г Z-(L)-VaI-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламида смешивают с 45 мл НВr (уксусная кислота, 33-ная (Fluca, Burchs, Швейцария)) и перемешивают 1,5 ч при КТ. Затем реакционную смесь выпаривают, распределяют остаток между тремя порциями этилацетата, насыщенного раствора гидрокарбоната натрия, воды и рассола, высушивают органические фазы над Na₂SO₄ и выпаривают их. Колоночная хроматография (SiO₂, метиленхлорид/метанол 9 1) дает сначала титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,56; FAB-MS (M + H)⁺ 350; ИК (CH₂Cl₂): 1641, 1502, 1463, 1454, 1448; аминокислотный анализ (GC, Chirasil -L-VaI-колонка) Е. Bayer, Z. Naturforchung, B 1983, 38, 1281): T_Ret(L)-VaI-производное) 8,36 мин (ее > 99 ), T_Ret (L)-Phe-производное) 22,73 мин (ее > 94%).

20в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г), в 5 мл ДМФ вводят во взаимодействие с 277 мг ВОР, 84,5 мг НОБт, 219 мл NMM им 238,4 мг Н-(L)-VaI-Phe-тиоморфолин-4-иламида, растворенного в 3 мл ДМФ. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 1 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (A) 0,43; FAB-MS (M + H)⁺ 859.

Пример 21.

Аналогичным образом, как описано в одном из предыдущих примеров, или указанным ниже детально образом, получают следующие соединения:

А) 1) Boc-(п-F/Phe(C)(п-F(Phe-(L)-BaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 83 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламида с помощью 60 мг ТБАФ в 0,95 мл ДМФ переводят в титульное соединение: FAB-MS (M + H)⁺ 765.

Исходный материал получают следующим образом.

1)a) N-Boc-(п-фторфенилаланин).

В 0,4 л смеси диоксана с водой в соотношении 1 1, 20 г (109 ммоль) п-фторфенилаланина (Fluka, Buchs, Швейцария) вводят во взаимодействие с 35,5 г (163 ммоль) Boc-ангидрида и 150 г (1,09 моль) карбоната калия. Спустя 4 ч реакционную смесь подкисляют раствором лимонной кислоты и экстрагируют тремя порциями этилацетата. Органические фазы промывают 10-ной лимонной кислотой, водой и рассолом, высушивают их над сульфатом натрия и выпаривают. Растворение остатка в небольшом количестве метиленхлорида и кристаллизация за счет добавки гексана дает титульное соединение.

1)б) N-Boc-(п-фторфенилаланинола)

При температуре от -5^oC до -10^oC раствор 17,9 г (63 моль) N-Boc-(п-фторфенилаланина) в 73 мл абс. ТГФ смешивают с 9,66 мл (69 ммоль) триэтиламина и прикапывают раствор 9,05 мл (69 моль) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в 44 мл абс. ТГФ. После перемешивания 0,5 ч при КТ образовавшийся осадок отсасывают. Фильтрат при охлаждении прикапывают к 4,77 г (126 моль) боргидрида натрия в 28 мл воды. После перемешивания 4 ч при КТ подкисляют с помощью 10-ной лимонной кислоты. ТГФ частично выпаривают на роторном испарителе и остаток распределяют между тремя порциями этилацетата, двумя порциями 2 н. раствора гидроксида натрия воды, насыщенного раствора бикарбоната натрия и рассола. Высушенные над сульфатом натрия и выпаренные органические фазы дают после растворения в небольшом количестве метиленхлорида и кристаллизации за счет добавки гексана титульное соединение.

ТСХ Rf (А) 0,36; ¹H-ЯМР (200 мГц, CD₃OD): 7,24 (дд, 8 и 5 Гц, 2H); 6,98 (т, 8 Гц, 2Н); 3,73 (м. 1Н); 3,47 (д. 5 Гц, 2Н); 2,88 (дд, 13 и 6 Гц, 1Н); 2,62 (дд, 13 и 8 Гц, 1Н); 1,36 (с, 9Н).

1) в) N-Boc-(п-фторфенилаланиналь).

В атмосфере азота к охлажденному до -60^oC раствору 4,0 мл (46,8 ммоль) оксалилхлорида в 44 мл метиленхлорида прикапывают 4,44 мл (62,4 ммоль) ДМСО, растворенные в 76 мл метиленхлорида. После перемешивания 15 ч добавляют к прозрачному реакционному раствору 8,4 г (31,2 ммоль) N-Boc-(п-фторфенилаланинола) в виде раствора в 185 мл смеси метиленхлорида с ТГФ 1 1 --> осаждение) и перемешивают дополнительно 25 мин. Затем добавляют 17,3 мл (124,8 ммоль) триэтиламина, растворенные в 38 мл метиленхлорида. После перемешивания в течение 30 мин прикапывают 278 мл 20-ного раствора гидросульфата калия, затем 220 л гексана. Оставляют нагреваться до КТ, водную фазу отделяют и экстрагируют ее 2 раза эфиром. Органические фазы, после промывки насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивания над сульфатом натрия и выпаривания, дают титульное соединение, которое без дальнейшей очистки используют в самой ближайшей стадии.

¹H-ЯМР (200 мГц, СDСl₃): 9,63 (c. 1H); 6,9 7,2 (2м, 4Н); 5,04 (м. 1Н): 4,42 (м. 1Н); 3,10 (м. 2Н); 1,43 (с. 9Н).

1) г) 5(S)-(1/S)-амино)-2-(п-фторфенил)этил)-дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 21 Б) 1) б), 16,7 г этилового эфира 2-иодпропионовой кислоты в 124 мл толуола, 8,1 г Zn/Cu и 12,4 мл диметилацетамида получают гомоенолят цинка. Его с помощью канюли переводят в охлажденный до (-40) - (-25)^oC трихлортитанизопропилат (получен из 5,11 мл тетраизопропилортотитаната и 5,71 мл тетрахлорида титана в 16 мл толуола и 88,5 мл метиленхлорида). Нагревают в течение 5 мин до -25^oC и снова охлаждают до -40^oС. Затем прикапывают раствор 9,28 г N-Boc-(п-фторфенилаланиналя) в 33 мл метиленхлорида и перемешивают 15 ч примерно при -20^oC и, наконец, один час при 0^oC дополнительно. Реакционную смесь выливают в 0,43 кг ледяной воды и 0,55 л трет. -бутилметилового эфира и в течение 10 мин интенсивно перемешивают. Отделяют водную фазу, экстрагируют ее два раза эфиром, промывают органические фазы водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают их. Получают кристаллический этиловый эфир и получают 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-(п-фторфенил)-гексановой кислоты в виде промежуточного продукта. Этот промежуточный продукт в 244 мл толуола и 7,34 мл уксусной кислоты нагревают 2 ч при 100^oC. Охлаждают реакционную смесь смешивают с 0,5 л воды, отделяют водную фазу, экстрагируют ее два раза эфиром, органические фазы промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивают их над сульфатом натрия и выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1) дает чистое титульное соединение.

ТСХ Rf (Г) 0,22; FAB-MS (M + H)⁺ 324. ()_D= 20,7 (c 1, этанол).

1) д) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил)-этил)-3(R)-(п-фторфенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 21г) 1в), 1,0 г 5(S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил/этил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она, растворенные в 7,9 мл ГТФ, депротонируют с помощью 6,05 мл бис-(триметилсилил)амида лития в виде 1 М раствора в ТГФ и алкилируют с помощью 0,673 г п-фторбензилбромида при -75^oС (1 ч). Колоночная хроматография (SiO₂, метиленхлорид/эфир 49 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (H) 0,17: ¹H-ЯМР (200 мГц, CДCl₃): 7,19 7,05 и 7,04 6,88 (2м. по 4Н; 4,50 (д. 10 Гц, HN); 4,11 (м. 1Н); 3,87 (км, примерно 8 Гц, 1Н); 3,1 2,7 (м. 5Н); 2,33 2,14 и 2,02 1,85 (2м. по 1Н); 1,35 (с. 9Н).

1) e) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-(п-фторфенил)-2(R)-п-фторфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1 и), 790 мг 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил/этил)-3(R)-(п-фторфенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-она в 29 мл диметоксиэтана и 15 мл воды гидролизуют с помощью 7,3 мл 1 М раствора гидроксида лития с получением титульного соединения, которое непосредственно применяется далее.

1) ж) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R)-п-фторфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 956 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-(-6-(п-фторфенил)-2(R)-п-фторфенилметил)- гексановой кислоты в 2,3 мл ДМФ силилируют с помощью 1,47 г трет. -бутилдиметилхлорсилана и 1,19 имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции помола с помощью карбоната калия в 50 мл смеси этанола/ТГФ/вода 3 1 1 дает после колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1), титульное соединение.

TCX Rf (Г) 0,13; FAB-MS (M + H)⁺ 564.

1) з) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилиокси)-6-(п-фторфенил)-2(R)- фторфенилметил-гексаноил-(L)-Val-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 110 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил-2(R)-(п-фторфенилметил)-гексановой кислоты и 71,5 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 1п), в 1,83 мг НВTU. Чистое титульное соединение получают после колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид/эфир 3 1).

ТСХ Rf (O) 0,14; FAB-MSD (M + H)⁺ 897.

2) Boc-(п-F/Phee(C)(п-F/Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 150 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(-п-F-Phe)-морфолин-4-иламида с помощью 105 мг ТБАФ в 2,5 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 783.

Исходный материал получают следующим образом.

2) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(п-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилокси)-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Б) 1) ж) и 68,5 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида (примерно 9 в) в 1,67 мл NMM/CH₃CH, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 74 мг НВTU с получением чистого титульного соединения.

TCX Rf (O) 0,17; FAB-MS (M + H)⁺ 897.

3) Boc-(п-F(Phe(C)(p-F(Phe)-(L)-VaI-(L)-(п-СН₃-Phe)- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 126 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-фторфенилметил)- гексаноил-(L)-VaI-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида с помощью 87 мг ТБАФ в 2 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 795.

Исходный материал получают следующим образом.

3) а) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(n-CH₃O-Phe)- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 80 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Б) 1) е) и 56,7 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 10 дв) в 1,3 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 590,2 мг НВTU с получением титульного соединения.

FAB-MS (M + H)⁺ 909.

4) Boc-(п-F(Phe)(C)(п-F(Phe)-(L)-VaI-(L)-(Cha)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 230 мг 5(S)-(Boc-амино)4-(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(Cha)-морфолин-4-иламида с помощью 164 мг ТБАФ в 3,8 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 771.

Исходный материал получают следующим образом.

4) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(-L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 150 мг 5(S)-Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Б) 1)е), и 99,4 мг Н-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламида (пример 11 а), в 2,4 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 111 мг НВTU с получением титульного соединения.

FAB-MS (M + H)⁺ 885.

5) Boc-(п-F(Phe)(п-F(Phe-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Б) 1) Boc-Phe(C))(п-F(Phe-(L)-VaI-(L)-)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 0,31 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида подвергают удалению защитной группы с помощью ТВАФ в 3,0 мл ДМФ для получения титульного соединения, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, этилацетат) получается чистым.

TCX Rf (Б) 0,55; FAB-MS (M + H)⁺ 747.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) Этиловый эфир 2-иодпропионовой кислоты.

Суспензию 170 мл этилового эфира 2-бромпропионовой кислоты (Fluka, Buchs, Швейцария) и 950 г йодида натрия в 1,8 л ацетона перемешивают 20 ч при 60^oC. Реакционную смесь отфильтровывают, фильтрат частично выпаривают, выливают примерно на 2,5 л эфира, промывают с помощью 1,0 л 11-ного раствора тиосульфата натрия и, наконец, рассолом, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Перегонка (83^oC; 2 мбар) дает чистое титульное соединение.

MS M⁺ 228; ¹H-ЯМР (200 мГц, СДСl₃): 4,17 (к. 7 Гц, 2Н); 3,34 и 2,97 (2т. 7 Гц, 2 х 2Н); 1,28 (т. 7 Гц, 3Н).

1) б) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично А. Е. Ce Vamp, А. Т. Каwaguchi, R. P. Volante и I, Shinkai Tetrahedron Lett. 32, 1967. 1991. В атмосфере азота к раствору 17,4 г этилового эфира 2-иодпропионовой кислоты в 130 мл толуола добавляют 8,03 г Zn (Cu) получение: P. D. Smith, H. E. Simmons, W. E. Parham, M. D. Bhavsar, Org Synth. Coll. Vol. 5, 855, 1973 и 12,96 мл диметилацетамида и интенсивно перемешивают в течение 1 ч при КТ и 4 ч при 80^oС дополнительно. Получают раствор гомоенолята цинка. Во втором аппарате (атмосфера азота), раствор 5,58 мл (18,9 ммоль) тетраизопропилортотината в 16,4 мл толуола и 91,8 мл метиленхлорида при легком охлаждении смешивают с 5,90 мл (53,8 ммоль) тетрахлорида титана, перемешивают 15 мин при КТ (образуя желтый раствор) его охлаждают до -40^oC, проходит частично кристаллизация трихлортитанизопропилата. С помощью канюли декантируют охлажденный до КТ раствор гомоенолята цинка от металлического твердого вещества и прикапывают его к трихлортитанизопропилату, причем температура поддерживается при температуре от -40^oC до -30^oС до получения раствора темно-красного цвета, нагревают в течение 5 мин до -25^oC и снова охлаждают до -40^oC. Затем прикапывают раствор 9,0 г N-Boc-фенилаланиналя (получение: D. J. Kempf, J. Org. Che, 51, 3921. 1986) в 32,8 мл метиленхлорида и перемешивают 15 ч примерно при -20^oC и, наконец, еще 1 ч при 0^oC. Реакционную смесь выливают в 0,5 кг ледяной воды и 0,5 л эфира и интенсивно перемешивают в течение 10 мин. Отделяют водную фазу, экстрагируют ее два раза эфиром, органические фазы промывают два раза водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат их над сульфатом натрия и выпаривают. Получают в виде промежуточного продукта кристаллический этиловый эфир 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-фенилгексановой кислоты. Этот промежуточный продукт в 295 мл толуола и 9 мл уксусной кислоты нагревают в течение 2,5 ч при 80^oC. Реакционную смесь смешивают с 0,5 л воды, отделяют водную фазу, экстрагируют ее двумя порциями эфира, промывают органические фазы насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом и сушат их над сульфатом натрия. Частичное выпаривание органические фаз и смешивание с гексаном дает кристаллическое титульное соединение, которое согласно аналитическим исследованиям содержит примерно 10 (4R)-эпимера (ТСХ Rf (Д) 0.08). Колоночная хроматография (SiO₂ гексан/этилацетат 2 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,14; ()_D= 17,7 (c 1, этанол).

1) в) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R)-(п-фторфенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично А. К. Ghosh, S. P. McKee и W. J. Thompson, J. Org. Chem. 56, 6500. 1991. В атмосфере азота раствор 300 мг (0,982 ммоль) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она в 6 мл ТГФ при -75^oC смешивают с 1,92 мл бис-(триметилсилил)-амида лития, 1 М, в ТГФ (Aldrich) и дополнительно перемешивают в течение 15 мин при этой температуре. Затем прикапывают 132 мкл (1,077 ммоль) п-фторбензилбромида (Fluka, Buchs, Швейцария) и перемешивают в течение 30 мин при -50^oC. После дополнительного охлаждения до -75^oC, добавляют 0,3 мл пропионовой кислоты и затем 0,3 мл воды. Нагревают до 0^oC, разбавляют этилацетатом, промывают с помощью 10-ного раствора лимонной кислоты, насыщенного раствора бикарбоната натрия и рассола, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/этилацетат 4 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (Г) 0,54; FAB-MS (M + H)⁺ 414.

1) г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси)-6-фенил)-2(R)-(п-фторфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1и), 1,46 г 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-(фенилэтил)-3(R)-(п-фторфенилметил) -дигидрофуран-2-(3Н)-она в 57 мл диметоксиэтана и 29 мл воды гидролизуют с помощью 14,1 мл 1 М раствора гидроксида лития с получением титульного соединения, которое без дальнейшей очистки применяется далее.

1) д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)-p- фторфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 0,9 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси)-6-фенил-2(R)-п-фторфенилметил)-гексановой кислоты в 4 мл ДМФ силилируют с помощью 1,49 г трет.-бутилдиметилхлорсилана в 1,2 г имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции с помощью 1,9 г карбоната калия в 50 мл смеси метанол/ТГФ/вода 3 1 1 дает после подкисления раствором лимонной кислоты и экстракции с помощью этилацетата титульное соединение. TCX Rf (Г) 0,2.

1) e) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 200 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилиокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты и 134 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 1п) в 3,6 мг NMM/CH₃, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 153 мг HBTU. После кристаллизации из гексана получают чистое титульное соединение.

TCX Rf (А) 0,25.

2) Boc-Phe(C)(п-F(Phe-(L)-VaI-(L)-(Cha)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), в 120 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(Cha)-морфолин-4-иламида с помощью 87 мг ТБАФ в 1,4 мл ДМФ удаляют защитные группы с получением титульного соединения.

TCX Rf (Б) 0,61; FAB-MS (M + H)⁺ 753.

Исходный материал получают следующим образом.

2) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Cha-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Г) 1) д) и 68 мг Н-(L)-Val-(L)-(Cha-морфолин-4-иламида (пример 11 а), в 1,8 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 76,4 г НВТU.

TCX Rf (Д) 0,50.

B) 1) Boc-Phe(C)(CN/Phe-(L)-VaI-(L)-(Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, в 60 мг 5(S)-(Boc-амино)4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил)-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида с помощью 64,3 мг ТБАФ в 1,0 мл ДМФ удаляют защитную группу с получением титульного соединения. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (Б) 0,26; FAB-MS (M + H)⁺ 754.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R)-(п-цианофенилметил)- дигидрофуран-2(3Н)-он.

Аналогично примеру 21 Г) 1) в), 1,5 г 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она (пример 21 Б) 1) б), растворенные в 32 мл ТГФ, депротонируют с помощью 9,8 мл 1 М раствора бис-(триметилсилил)-амида лития в ТГФ и алкилируют с помощью 1,0 г 4-бромметилбензонитрила (Fluka, Buchs, Швейцария), растворенных в 3 мл ТГФ. Колоночная хроматография (SiO₂ гексан/этилацетат 1 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (Г) 0,33.

1) б) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси)-6-фенил)-2(R)-(п-цианофенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1и), 0,50 г 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-(фенилэтил)-3(R)-(п-цианофенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-она в 19 мл диметоксиэтана и 10 мл воды гидролизуют с помощью 4,8 мл 1 М раствора гидроксида лития с получением титульного соединения.

TCX Rf (E) 0,3.

1) в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 0,62 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси-6-фенил-2(R)-(п-цианофенилметил)-гексановой кислоты в 6,2 мл ДМФ силилируют с помощью 0,98 трет.-бутилдиметилхлорсилана и 0,79 г имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции с помощью 1,2 г карбоната калия в 31 мл смеси метанол/ТГФ/вода 3 1 1 дает после подкисления раствором лимонной кислоты и экстракт этилацетатом титульное соединение.

TCX Rf (Г) 0,29. FAB-MS (M + H)⁺ 553.

1) г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 72 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексановой кислоты и 43,3 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 1п) в 1,14 мг NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 50 мг НВTU для получения титульного соединения.

ТСХ Rf (А) 0,19.

2) Boc-Phe(C)(п-CN/Phe-(L)-Ile-(L)-(Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 510 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-(Phe)-морфолин-4-иламида дистиллируют с помощью 362,3 мг ТБАФ в 10 мл ДМФ. Реакционную смесь выливают в ледяную воду, экстрагируют три раза метиленхлорида, промывают органические фазы насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивают их над сульфатом натрия и выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат) дает чистое титульное соединение.

ТСХ Rf (Б) 0,51; FAB-MS (M + H)⁺ 768.

Исходный материал получают следующим образом.

2) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил)-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9)е), 360 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-цианофенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Д) 1) г) и 253 мг Н-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 16 б) в 6,36 мл NMM/CH₃CN, 0,25 M, вводят во взаимодействие с 276 мг НВTU. Распределение остатка после выпаривания между метиленхлоридом, 10-ным раствором лимонной кислоты, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивание органических фаз над сульфатом натрия и выпаривание дают титульное соединение.

ТСХ Rf (Г) 0,07.

Г) 1) Boc-Phe(C)(п-F(Phe-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 350 мг (0,395 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(-п-F-Phe)-морфолин-4-иламида с помощью 374 мг (1,19 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 765.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 265 мг (0,485 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Г) 1) д) и 188 мг (0,53 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 9д) в 4,6 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 202,6 мг (0,53 ммоль) HBTU: TCX Rf (Д) 0,28.

2) Boc-Phe(C)(п-F(Phe-(L)-VaI-(L)-(п-CH₃O-PHe)-морфолин-4-иламид

Аналогично примеру 1), 280 мг (0,312 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4- иламид с помощью 295 мг (0,94 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 4 1 этилацетат) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (B) 0,56; FAB-MS (M + H)⁺ 777.

Исходный материал получают следующим образом.

2) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет. -бутилдиметилсилиокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-(n-CH₃O-Phe)-морфолин-4- иламид.

Аналогично примеру 9е), 200 мг (0,366 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-п-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Г) 1) д) и 146 мг (0,402 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 10 д) в 3,6 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М вводят во взаимодействие с 153 мг (0,402 ммоль) НВТU: TCX Rf (Д) 0,22.

3) Boc-Phe(C)(p-F(Phe-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 220 мг (0,251 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид с помощью 2490 мг (0,75 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/тетрагидрофуран 9 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (0) 0,3; FAB-MS (M + H)⁺ 761.

Исходный материал получают следующим образом.

3) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 200 мг (0,366 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 21 Г) 1) д) и 140 мг (0,403 ммоль) Н-(L)-Ile-(L)-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 16 б) в 3,5 мл NMM/CH₃ 0,25 M вводят во взаимодействие с 153 мг (0,40 ммоль) HBTU.

ТСХ Rf (Д) 0,16.

Д) 1) Boc-Phe(C)(п-CH₃O(Phe-(L)-Val-(L)-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1) 417 мг (0,48 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламида с помощью 301 мг (0,95 ммоль) ТБАФ в 5 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (F) 0,4; FAB-MS (M + H)⁺ 759.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) п-метоксибензилйодил.

Раствор 1,7 мл (12,8 ммоль) 4-метокси-бензилхлорида (Fluka, Buchs/Швейцария) в 25 мл ацетона размешивают при комнатной температуре с 9,4 г (62,6 ммоль) йодида натрия. Газовая хроматография реакционной смеси по истечении 90 мин показывает полное превращение, поэтому реакционную смесь выливают на эфир и промывают ее 10-ным раствором тиосульфата натрия и рассолом. Высушивание органической фазы с помощью Na₂SO₄ и выпаривание дает титульное соединение.

¹H-NMR (200 MHz, CD₃OD): 3,78 (s, 3H), 4,54 (s, 2H), 6,8 - 6,95 и 7,2 7,4 (2m, по 2Н).

1) б) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R)-(п-метоксифенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 21 г) 1) в) 2,98 г (9,74 ммоль) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она (пример 21 Б) 1б), растворяют в 40 мл ДГФ, депротонируют при -75^oC c помощью 19,5 мл 1 М раствора бис-(триметилсилил)-амида лития в ТГФ и алкилируют с помощью 2,9 г (11,7 ммоль) раствора п-метоксибензилйодида в тетрагидрофуране (45 мин). Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1) и настаивание в диизопропиоловом эфире дают чистое титульное соединение.

TCX Rf (Д) 0,32.

1) в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-гидрокси-6-фенил)-2(R)-(п-метоксифенилметил)- гексановая кислота

Аналогично примеру 1 и), 1,7 г (3,99 ммоль) 5(S)-(1/S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил)-3(R)-(п-метоксифенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-она в 43 мл диметоксиэтана и 11 мл воды гидролизуют с 16 мл 1 М раствора гидроокиси лития. Размешивание в эфире дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (F) 0,53; FAB-MS (M + Na)⁺ 466.

1) г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 0,93 мг (2,10 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-гидрокси)-6-фенил-2(R)-(п-метоксифенилметил)- гексановой кислоты в 20 мл ДМФ силилируют с помощью 1,4 г (9,64 ммоль) трет.-бутилдиметилхлорсилана и 1,17 г (17,2 ммоль) имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции с помощью 1,7 г карбоната калия в смеси метанол (23 мл) / ТГФ (7 мл) / вода (7 мл) и размешивание сырого продукта в гексане дают чистое титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 558.

1) д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 300 мг (0,537 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексановой кислоты и 197 мг (0,59 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 10) в 5,2 мл NMM/CH₃CN 0,25 M вводят во взаимодействие с 224 мг (0,59 ммоль) HBTU.

FAB-MS (M + H)⁺ 873.

E) 1) Boc-Phe(C)(п-CH₃)-Phe-(L)-VaI-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4- иламид

Аналогично примеру 1) 200 мг (0,22 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(п-СН₃O-Phe)- морфолин-4-иламида с помощью 210 мг (0,66 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

Колоночная хроматография (SiO₂, метилхлорид/метанол 19 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (F) 0,66; FAB-MS (M + H)₊ 789.

Исходный материал получают следующим образом.

1) а) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-(п-CH₃O-Phe)- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 200 мг (0,358 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-метоксифенилметил)-гексановой кислоты и 143 мг (0,39 ммоль) Н-(L)-VaI-(L)-(п-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 10 д) в 3,6 моль ПММ/CH₃CN, 0,25 М вводят во взаимодействие с 149 мг (0,39 ммоль) НBTU; полученное соединение непосредственно используют в дальнейших реакциях.

Ж) 1) Boc-Phe(C)(п-CF₃)-Phe-(L)-Val-(L)-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 120 мг (0,13 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-трифторметил)-фенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4- иламида с помощью 124 мг (0,39 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение. Осаждение с помощью диизопропилового эфира из концентрированного раствора в ДМФА дает чистое титульное соединение

FAB-MS (M + H)⁺ 797.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) 5(S)-(1(S)-(Boc-амино)-2-фенилэтил-3(R)-(п-трифторметил-фенилметил)- дигидрофуран-2-(3H)-он.

Аналогично примеру 21 Б) 1) в) 0 1,0 г (3,26 ммоль) 5(S)-(1(S)-Boc-амино)-2-фенилэтил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она (пример 21 Б) 1) в), растворяют в 20 мл ТГФ, депротонируют при -75^oС с помощью 6,5 мл 1 М раствора бис-(триметилсилил)-амида лития в ТГФ и алкилируют с помощью 0,93 г (3,91 ммоль) п-трифторметил-бензилбромида (Fluka, Buchs, Швейцария) при начальной температуре в -75^oC (нагрев в течение 45 мин до -60^oC). Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (Д) 0,4; FAB-MS (M + H-бутен)⁺ 408.

1) б) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-гидрокси-6-фенил-2(R)-(п-трифторметил-фенилметил)- гексановая кислота.

Аналогично примеру 1и), 4,3 г (9,3 ммоль) 5(S)-(1(S)-(Boc-амино)-2-(фенилэтил)-3(R)-(п-трифторметилфенилметил)- дигидрофуран-2-(3Н)-она, в 100 мл диметоксиэтана и 25 мл воды гидролизуют с 37 мл 1 М раствора гидроокиси лития до получения титульного соединения.

TCX Rf (H) 0,68.

1) в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 3,2 г (6,65 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-гидрокси-6-фенил-2(R)-п-трифторметил-фенилметил)- гексановой кислоты в 25 мл ДМФ силилируют с помощью 4,6 (30,6 ммоль) трет.-бутилдиметилхлорсилана и 3,7 г (54,5 ммоль) имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции с помощью 5,5 г карбоната калия в смеси метанол (75 мл) ТГФ (22 мл) / вода (12 мл) дает титульное соединение, которое затем непосредственно используют в последующих реакциях.

1) г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 200 мг (0,335 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты и 123 мг (0,369 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 10), в 3,2 мл NMM/CH₃CN 0,25 М вводят во взаимодействие с 140 мг (0,347 ммоль) НВTU; титульное соединение затем непосредственно используют в последующих реакциях.

3) 1) Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 360 мг (0,418 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-VaI-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида с помощью 263 мг (0,84 ммоль) ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (B) 0,28; FAB-MS (M + H)⁺ 745.

Исходный материал получают следующим образом.

1) a) Z-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

В охлажденную льдом суспензию 14,04 г (40 ммоль) Z-(L)-Tyr-ОН в 750 мл метиленхлорида добавляют 9,08 г (44 ммоль) ДЦК и размешивают в течение 20 мин. Затем добавляют 10з,81 г (80 ммоль) НОБт и раствор 5,23 г (60 ммоль) морфолина в 50 мл метиленхлорида. После размешивания в течение 18 ч при КТ фильтруют, фильтрат промывают насыщенным раствором NaHCO₃, водой и рассолом и экстрагируют водные фазы двумя порциями метиленхлорида. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат) с высушенными с помощью Na₂SO₄ и выпаренными органическими фазами даст титульное соединение.

TCX Rf (B) 0,39.

Исходный материал получают следующим образом.

1) б) Н-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Раствор 2,05 г (5,3 ммоль) Z-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 91 мл метанола гидрируют в присутствии 0,5 г 10-ного Pd/C в течение 1,5 ч при КТ. Фильтрация с помощью цеолита (фильтровальное вспомогательное вещество из кизельгура, John-Mavnille Corp.) и выпаривание фильтрата дают титульное соединение.

TCX Rf (метанол) 0,34.

1) в) Z-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

При 0^oC в раствор 6,3 г (25 ммоль) Z-(L)-Val-OH в 400 мл метиленхлорида добавляют 5,18 г (25 ммоль) ДЦК и 3,73 г (27,5 ммоль) НОБт и размешивают в течение 20 мин. Затем добавляют раствор 6,27 г (25 ммоль) H-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 600 мл метиленхлорида. После размешивания в течение 18 ч при КТ следуют процедуре, описанной в примере 41 А) а).

TCX Rf (B) 0,50.

1) г) Н-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Гидрирование раствора 4,83 г (10 ммоль) Z-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 182 мл метанола в присутствии 1 г 10-ного Pd/C в течение 1,5 ч при КТ дает по окончании фильтрации с помощью цеолита, выпаривания фильтрата и колоночной хроматографии (SiO₂, метиленхлорид/метанол 9 1) титульное соединение.

TCX Rf (F) 0,30, FAB-MS (M + H)⁺ 350.

1) д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1л), 300 мг (0,569 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (пример 2г) в 5 мл ДМФ активируют с помощью 277 мг (0,626 ммоль) ВОР, 84,5 мг (0,625 ммоль) НОБт и 157 мл (1,42 ммоль) NMM и вводят во взаимодействие с 198,6 мг (0,568 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 2 мл ДМФ (2 ч, КТ). Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/гексан 2 1) дает титульное соединение.

TCX Rf (I) 0,26; FAB-MS (M + H)⁺ 859.

1) e) (п-Трифторметилфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 200 мг (0,335 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты подвергают взаимодействию с 123 мг (0,369 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пр. 10) в 3,2 мл NMM/CH₃CN 0,25 М с 140 мг (0,37 ммоль) НВТU. Указанное в названии соединение тотчас используется дальше.

Пример 22.

А) Boc-Cha(C)-(п-F)Phe-(L)-Ile(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 0,15 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид с помощью 117 мг ТБАФ в 1,7 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,18; FAB-MS (M + H)⁺ 767.

Исходный материал получают следующим образом.

A) a) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Ile-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 102 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 1 к), и 70,8 мг Н-(L)-Ile-(L)-Phe-(-морфолин-4-иламида (пример 16 б) в 1,77 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 77,4 мг НВTU.

TCX Rf (А) 0,17; FAB-MS (M + H)⁺ 881.

Б) Boc-Cha-(C)(p-F(Phe-(L)-Val-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 0,16 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-N-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламид с помощью 114 мг ТБАФ в 1,8 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,38; FAB-MS (M + H)⁺ 769.

Исходный материал получают следующим образом.

Б) а) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил)-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 100 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-циклогексил-2(R)- (п-фторфенилметил)-гексановой кислоты (пример 1к), и 70 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe-тиоморфолин-4-иламида (пример 20 б), в 1,7 мл NMM/CH₃CN (0,25 М) вводят во взаимодействие с 76 мг НВТU. Спустя 18 ч при КТ часть титульного соединения получают прямо из реакционной смеси путем фильтрации. Дополнительное количество титульного соединения получают путем распределения остатка после выпаривания фильтрата между тремя порциями этилацетата, водой, двумя порциями 10-ного раствора лимонной кислоты, водой, двумя порциями насыщенного раствора бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивания органических фаз над сульфатом натрия и выпаривания.

TCX Rf (A) 0,55; FAB-MS (M + H)⁺ 883.

Пример 23. Желатиновый раствор.

Стерильно отфильтрованный водный раствор одного из биологически активных веществ формулы I, указанных в вышеприведенных или нижеследующих примерах 1

2 и 32 39, который дополнительно содержит 20 циклодекстрина, и стерильный, консервированный с помощью фенола желатиновый раствор при нагревании в асептических условиях смешивают так, чтобы 10 мл раствора имел следующий состав:

Биологически активное вещество 3 мг

Желатина 150,0 мг

Фенол 4,7 мг

Дистиллированная вода с 20 циклодекстринов 1,0 мг

Пример 24. Стерильное сухое вещество для инъекций.

5 мг одного из указанных в выше- или нижеприведенных примерах 1 22 и 32 39 соединений формулы I в качестве биологически активного вещества растворяют в 1 мл водного раствора с 20 мг маннита и 20 циклодекстринов в качестве агента растворения. Раствор стерильно фильтруют и при асептических условиях заливают в ампулу емкостью 2 мл, глубоко охлаждают и лиофилизируют. Перед употреблением лиофилизат растворяют в 1 мл дистиллированной воды или 1 мл физиологического раствора хлорида натрия. Раствор применяют внутривенно или внутримышечно. Состав можно также помещать в двухкамерные ампулы для инъекций.

Пример 25. Носовой аэрозоль (пульверизатор).

В смеси 3,5 мл Myglyol 812 и 0,08 г бензилового спирта суспендируют 500 мг тонко измельченного (< 5,0 мкм) порошка одного из указанных в вышеприведенных или нижеследующих примерах 1 22 и 32 39 соединений формулы I в качестве биологически активного вещества. Эту суспензию помещают в сосуд с дозировочным вентилем (клапаном). Его заполняют 5,0 г фреона 12^R под давлением через вентиль в сосуде. Путем встряхивания "фреон" растворяется в смеси Myglyol с бензиловым спиртом. Этот сосуд с аэрозолем содержит примерно 100 разовых доз, которые можно вводить по отдельности.

Пример 26. Покрытие лаком таблетки.

Для приготовления 10000 таблеток, содержащих по 100 мг биологически активного вещества, перерабатывают следующие составные части:

Биологически активное вещество 1000 г

Кукурузный крахмал 680 г

Коллоидальная кремневая кислота 200 г

Стеарат магния 20 г

Стеариновая кислота 50 г

Карбоксиметилкрахмал натрия 250 г

Вода требуемое количество

Смесь одного из указанных в вышеприведенных или нижеследующих примерах 1 22 и 32 39 соединений формулы I в качестве биологически активного вещества, 50 г кукурузного крахмала и коллоидальной кремневой кислоты вместе с крахмальным клейстером из 250 г кукурузного крахмала и 2,2 кг деминерализованной воды перерабатывают во влажную массу. Ее протирают через сито с размером отверстий 3 мм и высушивают при 45^oC в течение 30 мин в сушилке с псевдоожиженным слоем. Высушенный гранулят продавливают через сито с размером отверстий 1 мм, смешивают с заранее просеянной смесью (сито в размером отверстий 1 мм) 330 г кукурузного крахмала, стеарата магния, стеариновой кислоты и карбоксиметилкрахмала натрия и прессуют в слабо выпуклые таблетки.

Пример 27. Орально употребляемая дисперсия 1.

625 мг одного из указанных в вышеприведенных или нижеследующих примерах 1 22 и 32 39 соединений формулы I, например Boc-Phe(C)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида, в качестве биологически активного вещества и 625 мг ПОПХ (1-пальмитоил-2-олеоил-фосфатидилхолин 1-гексадеканоил-2-(9-цис-октадеценоил)-3-sn-фосфатидилхолин) растворяют в 25 мл этанола. Раствор разбавляют десятикратным количеством воды. Для этого этанольный раствор при КТ прикапывают к имеющемуся количеству воды со скоростью 10 мл в минуту. Этанол удаляют из смеси путем тангенциального диализа ("Cross. Flow Filtration") против 1750 мл воды (система: Minitan 700 cм²-мембрана из полиэфиросульфона с пределом исключения (Ausschlussgrense) 100 кД, фирмы Миллипор (США). Смесь при применении той же самой системы концентрируют до 15 мг биологически активного вещества путем ультрафильтрации. После добавления 1,24 мг/мл лимонной кислоты и 1,24 мг/мл динатрийгидрофосфата. 2Н₂O для установления рН 4,2 и 1 мг/мл сорбиновой кислоты в качестве антимикробного консерванта, дисперсию снова концентрируют до 15 мг/мл и вносят в стаканчики, например, емкостью 20 мл. Частицы дисперсии имеют диаметр 0,1 2 мкм. Они стабильны при 2 8^oC по меньшей мере полгода и пригодны для орального введения.

Пример 28. Орально употребляемая дисперсия 2.

Приготовление осуществляют аналогично примеру 27, однако при применении 25 мг биологически активного вещества и 50 мг ПОПХ для приготовления этанольного раствора.

Пример 29. Орально употребляемая дисперсия 3.

Приготовление осуществляют аналогично примеру 27, однако при применении 25 мг биологически активного вещества и 125 мг ПОПХ для приготовления этанольного раствора.

Пример 30. Орально употребляемая дисперсия 4.

Приготовление осуществляют аналогично примеру 27, однако при применении 50 мг биологически активного вещества и 50 мг ПОПХ для приготовления этанольного раствора.

Пример 31. Орально употребляемая дисперсия 5.

Приготовление осуществляют аналогично одному из примеров 27 30, однако при применении биологически активного вещества и фосфатидилхолина из сои или фосфатидилхолина из яичного желтка (70 100-ной чистоты) вместо ПОПХ для приготовления этанольного раствора. В желательном случае добавляют антиоксидант, как аскорбиновая кислота, в концентрации 5 мг/мл.

Пример 32. Boc-(п-F(Phe)(C)(п-CF₃-(L)-Val-(L)-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 265 мг (0,48 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-трифторметилфенилметил)- гексаноил-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламида с помощью 180 мг ТБАФ в 4,2 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,3; FAB-MS (M + H)⁺ 815.

Исходный материал получают следующим образом.

32) a) 5(S)-(1(S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил)-этил)-3(R)- (п-трифторметилфенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-он.

Аналогично примеру 21 Г) 1) в), 1,0 г 5(S)-(1(S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил)-этил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она растворяют в 6,3 мл ТГФ, депротонируют с помощью 6,05 мл бис-(триметилсилил)-амида лития в виде 1 М раствора в ТГФ и алкилируют с помощью 0,739 г раствора п-трифторметилбензилбромида (Fluka, Buchs, Швейцария), при -75^oC (40 мин). Колоночная хроматография (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (Д) 0,48; FAB-MS (M + H)⁺ 482.

32) б) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси(-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1и), 1,05 г (3,99 ммоль) 5(S)-(1(S)-(Boc-амино)-2-(п-фторфенил)-этил)-3(R)- (п-трифторметилфенилметил)-дигидрофуран-2-(3Н)-она в 35,5 мл диметоксиэтана и 17,9 мл воды гидролизуют с помощью 8,7 мл 1 М раствора гидроксида лития с получением титульного соединения, которое прямо используют дальше.

32) в) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-трифторметилфенилметил)-гексановая кислота.

Аналогично примеру 1к), 1,06 г 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-окси(-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты в 2,3 мдл ДМФ силилируют с помощью 1,47 г трет.-бутилдиметилхлорсилана и 1,18 г имидазола. Гидролиз сложноэфирной силильной функции с помощью 1,76 г карбоната калия в 50 мл метанол/ТГФ/вода 3 1 1 дает после колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/этилацетат 2 1) титульное соединение.

ТСХ Rf (Г) 0,15.

2¹H-ЯМР (200 мГц, СД₃ОД): 7,59 и 7,39 (2 д. 8 Гц, по 2Н). 7,19 и 6,98 (2 м. по Н), 6,47 и 5,90 (д. примерно 9 Гц, вместе 1Н); 3,9 - 3,65 (м. 2Н); 3,15 2,8 (м. 4Н); 2,53 2,37 2,07 1,9 и 1,6 1,4 (3м. по 1Н); 1,37 1,22 (м. 9Н). 0,94 (с. 9Н); 0,2 0,1 (м. 6Н).

32) г) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R)-п-трифторметилфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)-Phe- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9) е), 300 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-фторметилфенилметил)-гексановой кислоты и 107,5 мг Н-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 1п), в 2,8 мл NMM/CH₃CN, 0,25 M, вводят во взаимодействие с 122 мг НВТU.

FAB-MS (M + H)⁺ 929.

Пример 33. Boc-(п-F(Phe(C)(п-CF₃-(L)-Val-(L)-(п-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 270 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R-)-(п-трифторметилфенилметил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)- (п-Phe)-морфолин-4-иламида с помощью 180 мг ТБАФ в 4,2 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

TCX Rf (И) 0,2 FAB-MS (M + H)⁺ 833.

Исходный материал получают следующим образом.

33 a) 5(S)-(Вос-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R)-(п-фторфенилметилфенилметил)- гексаноил-(L)-Val-(L)-(п-F-Phе)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 180 мг 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6-(п-фторфенил) -2(R)-(п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты (пример 32) и 113,2 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-F-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 9д), в 2,8 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М, вводят во взаимодействие с 202 мг НВТU.

FAB-MS (M + H)⁺ 947.

Пример 34. Boc-(п-F(Phe)C(п-CF₃Phe-(L)-VaI-(L)-(п-СН₃O-Phe)- морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1, 193 мг 5(S)-(Boc-амино))-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R)-(п-трифторметилфенил)-гексаноил-(L)-VaI-(L)- (п-СH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид с помощью 127 мг ТБАФ в 3 мл ДМФ переводят в титульное соединение.

ТСХ Rf (И) 0,47; FAB-MS (M + H) 845.

Исходный материал получают следующим образом.

34 а) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет.-бутилдиметилсилилокси)-6- (п-фторфенил)-2(R)-(п-трифторметилфенилметил)-гексаноил-(L)-Val-(L)- (n-CH₃O-Phe)-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 9е), 180 мг (0,366 ммоль) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси-6-(п-фторфенил)-2(R)- (п-трифторметилфенилметил)-гексановой кислоты (пример 33) в) и 117,2 мг Н-(L)-Val-(L)-(п-СН₃O-Phe)-морфолин-4-иламида (пример 10в), в 2,8 мл NMM/CH₃CN, 0,25 М вводят во взаимодействие с 123 мг НВТU.

FAB-MS (M + H)⁺ 959.

Пример 35. Морфолиносульфонил-(L)-Val-Phe(C)Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 5, 102 мг N-морфолиносульфонил-(L)-VaI в 4 мл ДМФ активируют с помощью 186 мг ВОР, 57 мг НОБт и 0,09 мл NMM и вводят во взаимодействие с 200 мг Н-Phe(C)-Phe-(L)-Val-(L)-(Phe)-морфолин-4-иламида (пример 4) в 1 мл ДМФ с получением титульного соединения. Реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют большим количеством этилацетата (плохо растворим) и промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом. Растирание сырого продукта в эфире дает чистое титульное соединение.

FAB-MS (M + H)⁺ 877.

Исходный материал получают следующим образом.

35a) N-Хлорсульфонилморфолин.

При интенсивном охлаждении к 23,5 мл морфолина примерно при 0^oC добавляют 32,7 мл сульфурилхлорида. Затем суспензию нагревают осторожно до 60^oC, причем начинается выделение НСl. Спустя 5 ч при 60^oC выделение НСl заканчивается. Охлажденную коричневого цвета реакционную смесь выливают на лед, выделяющееся при этом масло экстрагируют эфиром, промывают водой, 5-ным раствором бикарбоната натрия и водой и сушат над сульфатом натрия. Перегонка при повышенной температуре и пониженном давлении (90^oC, 1 мбар) выпаренных органических фаз дает титульное соединение.

¹H-ЯМР (200 мГц, ДМСО-d₆) 3,80 и 3,29 (2 т. 5 Гц, по 4Н).

35б) N-Морфолинсульфонил-(L)-Val.

К 6,3 г n-Хлорсульфонилморфолина в 20 мл ТГФ прикапывают 2 г (L)-валина, растворенных в 50 мл 1 н. NaOH, и перемешивают 17 ч при КТ. Желтую эмульсию смешивают с 15 мл 1 н. NaOH и экстрагируют эфиром. Водную фазу подкисляют с помощью 2 н. НСl и экстрагируют ее этилацетатом. Этилацетатную фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Кристаллизация из эфира дает, согласно ¹H-ЯМР-спектру, побочный продукт. Чистое титульное соединение получается из остатка после выпаривания фильтрата путем кристаллизации из гексана.

TCX Rf (E) 0,25.

Пример 36. Морфолинсульфонил-Phe-(C)Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Раствор 200 мг Н-Phe-(C)-Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид (пример 4) в 5 мл ДМФ смешивают с 0,132 мл триэтиламина и 71 мг N-хлорсульфонилморфолина (пример 36 а) в 1 мл ДМФ. Так как спустя 2 ч при КТ согласно ТСХ имеется еще много Н-Phe-(C)-Phe-(L)-Phe-морфолин-4-иламида, то еще раз добавляют 71 мг N-хлорсульфонилморфолина. Спустя 18 ч выливают в воду, экстрагируют три раза этилацетатом, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂, метиленхлорид/метанол 9 1) дает чистое титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,60; FAB-MS (M + H)⁺ 778.

Пример 37. N-(N-(2-Пиридилметил)-N-метиламинокарбонил)-(L)-Val- (Phe(C)-Phe-(L)-Val-(L)-Phe-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 5), 152 мг N-(N-(2-пиридилметил)-N-метиламинокарбонил)-N-метиламинокарбонил)- (L)-валина (получение см. европейский патент 402646 А1, 1990) в 5 мл ДМФ активируют с помощью 279 мг ВОР, 85 мг НОБт и 0,132 мл NMM и вводят во взаимодействие с 300 мг Н-Phe(C)Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламид (пример 4) с получением титульного соединения. Колоночная хроматография (SiO₂, этилацетат/ацетон 9 1 --> ацетон) дает после выдержки в эфире чистое титульное соединение.

TCX Rf (E) 0,28; FAB-MS (M + H)⁺ 876.

Пример 38. 5(S)-(Вос-амино)-4(S)-ацетокси)-6-фенил)-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-(-Phe-морфолин-4-иламид.

К 400 мг Вос-(C)-Phe-(L)-VaI-(L)-Phe-морфолин-4-иламида (пример 2) в 8 мл ТГФ добавляют 0,114 мл триэтиламина, 1 мг диметиламинопиридина и 0,08 мл ацетангидрида. Спустя 30 мин при КТ бесцветный раствор выливают в воду и экстрагируют 3-мя порциями этилацетата. Органические фазы после промывки водой насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, высушивания над сульфатом натрия и выпаривания, дают титульное соединение, которое после колоночной хроматографии (SiO₂, гексан/этилацетат 1 2) получается чистым.

TCX Rf (B) 0,59; FAB-MS (M + H)⁺ 771.

Пример 39. Boc-Phe-(C)-Phe-(L)-VaI-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1), 360 мг (0,418 ммоль) 5(S)-(Вос-амино)-4(S)-трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметил-гексаноил-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид подвергают взаимодействию для удаления защитных радикалов в 263 мг (0,94 ммоль) ТБАФ в 7 мл ДМФ до получения указанного в названии соединения.

ТСХ Rf (B) 0,28; FAB-MS (M + H)⁺ 745.

Исходное вещество получают следующим образом.

а) Z-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

К охлажденной льдом суспензии в количестве 14,04 г (40 ммоль) Z-(L)-Tyr-ОН в 750 мл метиленхлорида добавляют 9,08 г (44 ммоль) ДЦК и мешают в течение 20 мин. Затем добавляют 10,81 г (80 ммоль) НОВт и раствор 5,23 г (60 ммоль) морфолина в 50 мл метиленхлорида. После 18 ч перемешивания при КТ раствор фильтруют. Фильтрат промывают насыщенным раствором NaHCO₃, водой и рассолом и экстрагируют водную фазу двумя порциями метиленхлорида. Колоночная хроматография (SiO₂, этиловый эфир уксусной кислоты) позволяет получить выпаренную и высушенную с помощью Na₂SO₄ органическую фазу указанного в названии соединения.

TCX (Rf (метанол) 0,39.

б) H-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Раствор 2,05 г (5,3 ммоль) Z-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 91 мл метанола гидрируют в присутствии 0,5 г 10-ного Pd/C в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После фильтрации с помощью Ctlite^R (вспомогательное фильтрующее средство из кизельгура, фирмы John-Manville Corp.) и выпаривания фильтрата получают указанное в названии соединение. ТСХ Rf (метанол) 0,34.

в) Z-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

При 0^oC к раствору 6,3 г (25 ммоль) Z-(L)-Val-OH в 400 мл метиленхлорида добавляют 5,18 г (25 ммоль) ДЦК и 3,73 г (27,5 ммоль) НОВт кипятят в течение 20 мин. Затем смешивают с раствором 6,237 г (25 ммоль) Н-(L)-Tyr-морфолин-4-иламидом в 600 мл метиленхлорида. После перемешивания в течение 18 ч при комнатной температуре выделяют аналогично примеру 39а) продукт, указанный в заголовке. DC TVX Rf (B) 0,50.

г) H-(L)-Val-Tyr-морфолин-4-иламид.

Гидрируют раствор 4,83 г (10 ммоль) 2-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 182 мл метанола с помощью 1 г 10-ного Pd/C в течение 1 ч при комнатной температуре. После фильтрации через Celite^R, полученный фильтрат хроматизируют (SiO₂, метиленхлорид метанол 9 1), TCX дает вышеназванное соединение.

Rf (F) FAB-MS (M + H)⁺ 350.

д) 5(S)-(Boc-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексаноил-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламид.

Аналогично примеру 1к) проводят реакцию 300 мг (0,569 ммоль) 5(S)-(Вос-амино)-4(S)-(трет. -бутилдиметилсилилокси)-6-фенил-2(R)- фенилметилгексановой кислоты (полученной по 2д), в 5 мл ДМФ с 277 мг (0,626 ммоль) ВОР, 84,5 мг (0,625 ммоль) НОВт и 157 мл (1,42 ммоль) NMM как активатора и с 198,6 мг (0,568 ммоль) Н-(L)-Val-(L)-Tyr-морфолин-4-иламида в 2 мл ДМФ в течение 2 ч при комнатной температуре. После тонкослойной хроматографии (SiO₂, этиловый эфир уксусной кислоты (гексан 2 1) получают продукт, указанный в заголовке.

TCX Rf (U) 0,26, FAB-MS (M + H)⁺ 859.

Результаты испытаний на биологическую активность и токсичность заявленных соединений, приведены в табл. 1 3 и приложениях IV V. В табл. 1 показывается, что испытанные соединения ингибируют ВИЧ-протеазу в наномолярном количестве. В табл. 2 на клеточной модели демонстрируется эффективность соединений против инфицированной ВИЧ-вирусом человеческой клеточной линии лимфоцитов. Здесь также очевидна эффективность указанных соединений преимущественно в микромолярном количестве и ниже. Из табл. 3 следует, что при пероральном введении, испытанное соединение (служащее в качестве предмета для остальных соединений) достигает в крови мышей концентрации, значительно превышающей ЭД90 в упомянутой табл. 2 клеточной системе. Первый опыт на человеке демонстрирует аналогичную положительную фармакодинамическую картину. Тот факт, что даже и в таких случаях (на здоровых индивидумах) ЭД90 превышена, позволяет предполагать, что терапевтическое действие может быть в конечном действии обнаружено (см. приложение IV), и, наконец, в приложении V приведены токсикологические данные. Принимая во внимание тот факт, что речь в данном случае идет о трудно поддающейся лечению болезни обнаруженная токсичность от низкой до умеренной категории токсичности представляется хорошо переносимой.

I. Данные по ингибированию ВИЧ-1-протеазы.

В результате использования Икозапептидов и применения способа определения степени ингибирования ВИЧ-протеазы, изложенного выше в описании, получают следующие IC₅₀-значения для каждого из указанных соединений:

Пример IC₅₀

1 0,03

2 0,048

3 0,025

5 0,07

6 0,04

7 0,0042

8 0,42

9 0,078

10 0,0085

11 0,032

12 0,0055

13 0,25

14 0,18

15 0,24

16 0,054

17 0,028

18 0,06

19 0,18

20 0,043

21Б) 1) 0,037

21Б) 2) 0,014

21Б) 3) 0,005

21Б) 4) 0,18

21Г) 1) 0,04

21Г) 1) 0,04

21Г) 2) 0,055

21Г) 3) 0,033

21Г) 4) 0,07

21Г) 5) 0,01

21Д) 1) 0,0014

21Д) 5) 0,0017

21E) 1) 0,022

21Ж) 1) 0,025

22B) 0,14

22И) 0,018

33 0,015

34 0,016

35 0,022

36 0,02

37 0,31

38 0,0045

II. Ингибирующее действие соединений формулы I на размножение ВИЧ в ТМ-2-клетках.

В результате применения детально изложенной в описании системы тестов, предусматривающих использование ТМ-2-клеток, получают следующие ЭД90-значения по ингибированию активности обратной транскриптазы (мера вирусного присутствия) для каждого из указанных в примерах соединений:

Соединение из примера ЭД90 M

1 0,1

2 0,1

3 0,1

5 1

6 1

7 1

8 10

9 0,5

10 0,5

11 1

12 1

13 0,1

14 0,1

15 0,5

16 1

17 0,5

18 0,5

20 0,1

21Б) 2) 0,1

21Б) 2) 0,1

21Б) 4) 1

21Г) 1) 0,1

21Г) 4) 0,1

21Д) 1) 0,1

21Д) 5) 0,1

21E) 1) 0,1

22B) 0,1

22И) 0,1

33 0,1

34 0,1

35 1

36 1

37 10

38 1

III. Фармакокинетика соединений формулы I в организме мышей.

В результате орального введения соединения формулы I из примера 2 в организм мышей в дозе, составляющей 120 мг/кг, как детально изложено в описании, обнаруживают концентрации в плазме крови по истечении указанного времени, которые представлены в табл. 3.

Концентрация соединения из примера 2, таким образом, во все из вышеуказанных моментов, явно превышает ЭД90-значения, полученные в тесте на МТ-2-клетках (0,1M, см. табл. 2).

IV. Фармакокинетика соединения из примера 2 в организме человека.

В первом исследовании использовались следующие дозы: 150, 300, 600, 900 и 1200 мг (оральное введение). Соединение из примера 2 быстро абсорбируется. Полученные плазменные концентрации явно превышают ЭД90-значения в тесте на МТ-2-клетках. При введении 600 мг после еды получают концентрацию в плазме, которая в течение 8 12 ч держится на уровне, превышающем ЭД90 в тесте на МТ-2-клетках.

V. Токсикология.

После введения в организм мартышек соединения из примера 2 в дозе до 300 мг/кг не обнаруживают никакого признака токсичности. В крысах признаки токсичного действия на печень обнаруживаются лишь при дозе, превышающей 30 мг/кг. Соединение не проявляет мутагенного действия в тесте Эймса и по отношению к клеткам яичника китайского хомячка.

Таким образом, можно предположить, что соединения изобретения обладают лишь от низкой до умеренной степени токсичностью.