способ изготовления пленочного материала для офтальмохирургии

Формула изобретения

Способ изготовления пленочного материала для офтальмохирургии путем гомогенизации ткани, щелочной обработки, нейтрализации, диализа, сушки, отличающийся тем, что в качестве сырья используют пупочные канатики человека, примеси белка удаляют щелочным гидролизом с последующей обработкой трихлоруксусной кислотой, гликозаминогликаны осаждают двумя объемами этанола, сушку проводят под вакуумом, фасуют в стеклянные формы, добавляют дистиллированную воду, сушат до образования прозрачной пленки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмохирургии, и может быть использовано для коррекции репаративной регенерации роговицы.

В настоящее время в мировой практике в офтальмологии среди всех случаев патологии глаза прослеживается чрезвычайно высокая встречаемость (22-38%) повреждений роговой оболочки глаз, связанных с механическими травмами, ожогами, последствиями хирургических вмешательств (С.Н. Федоров и др. 1992; Г. Е. Венгер, 1992).

В настоящее время отечественная и зарубежная медицина не располагают пленочными материалами, являющимися эффективными корректорами репаративной регенерации тканей глаза. Известен способ получения препарата "геалон" фирмы "Фармация", представляющий собой 1%-ный раствор натриевой соли гиалуроновой кислоты, предназначенный для интраокулярного введения, близкий по химической структуре к полученному нами пленочному материалу (D.A. Swan Studies on Hyaluronic Acid // Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 156, p. 17-30).

Способ получения натриевой соли гиалуроновой кислоты заключается в следующем: ткань петушиных гребешков измельчают, осушивают ацетоном, экстрагируют дистиллированной водой, центрифугируют, проводят солевую обработку, осаждают тремя объемами этанола, очищают хлороформом, хроматографией и цитилпиридинхлоридом.

Прототипом настоящего изобретения является коллагеновое покрытие (С.Н. Федоров, С. Н. Багров, Т.С. Амсиславская и др. Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии. А. с. N 1321420 от 07.07.1987, Бюл. N 25), которое получают из склеры глаз свиньи. Склеру глаз свиньи подвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте. Полученный раствор разливают на матрицы для формования, проводят воздушную сушку и гамма-стерилизацию.

Недостатками прототипа являются: негомологичность тканям человека (коллагеновые покрытия получают из склеры глаз свиньи); относительно низкая прозрачность по сравнению с роговицей; стимуляция лишь отдельных этапов репаративной регенерации (в основном фибриллогенеза); трудоемкость при заборе сырья (препарирование вручную глаз свиньи, выделение и очистка склер от прилегающих тканей), ведущая к большим затратам рабочего времени и удорожанию конечного продукта.

Целью изобретения является повышение прозрачности пленочных материалов и стимуляция репаративной регенерации в роговице.

Способ изготовления пленочного материала из гликозаминогликанов для офтальмохирургии осуществляется следующим образом:

Пупочные канатики, полученные от женщин-доноров, проверенных на инфицирование сифилисом, вирусом ВИЧ-инфекции и гепатита, тщательно отмывают от крови, замораживают, гомогенизируют, заливают 2 М раствором едкого натра в соотношении 1 2 (вес/объем), оставляют на 7 сут при 18-24^oC и постоянном перемешивании. Центрифугируют при 3000 G в течение 30 мин, осадок отбрасывают, супернатант нейтрализуют соляной кислотой до pН 6,8-7,2, добавляют трихлоруксусную кислоту до концентрации 5% перемешивают, через 1 час центрифугируют при 3000 G. Осадок отбрасывают, супернатант нейтрализуют едким натром до pН 6,8-7,2, добавляют два объема 95%-ного этанола, оставляют на 24 ч при 4^oC. Центрифугируют 30 мин при 3000 G, супернатант отбрасывают, осадок растворяют в дистиллированной воде, диализуют против дистиллированной воды в течение 22-26 ч при 4^oC. После диализа раствор помещают в круглодонную колбу, воду отгоняют под вакуумом при 37-42^oС, продукт досушивают до постоянного веса при тех же условиях. Полученный бесцветный порошкообразный продукт вносят в стеклянную форму, добавляют 0,1-0,5 мл дистиллированной воды, при этом образуется вязкий прозрачный коллоидный раствор, который сушат в пылезащищенном сушильном шкафу 48 ч при 18-24^oС.

Готовые пленочные материалы из гликозаминогликанов стерилизуют гамма-излучением в дозе 2,5 МРад и мощности 0,5 МРад/ч.

Пример 1. 1 кг отмытых пупочных канатиков человека замораживают при -20^oC, гомогенизируют, заливают 2 л 2 М раствора едкого натра, оставляют 7 сут при 20^oС и постоянном перемешивании. Центрифугируют 30 мин при 3000 G, осадок отбрасывают, супернатант нейтрализуют соляной кислотой до pН 7,0, добавляют трихлоруксусную кислоту до концентрации 5% перемешивают, через 1 ч центрифугируют при 3000 G, осадок отбрасывают, супернатант нейтрализуют едким натром до pН 7,0, добавляют два объема 95%-ного этанола, оставляют на 24 ч при 4^oC. Центрифугируют 30 мин при 3000 G, супернатант отбрасывают, осадок растворяют в дистиллированной воде и диализуют против дистиллированной воды при 4^oC. После диализа раствор помещают в круглодонную колбу объемом 2 л, воду отгоняют под вакуумом при 40^oC, продукт досушивают до постоянного веса при тех же условиях. Получают 1,5 г гликозаминогликанов - бесцветного порошкообразного продукта. По 75 мг продукта вносят в стеклянные формы, имеющие профиль внешней оболочки глаза, добавляют по 0,1 мл дистиллированной воды с образованием прозрачного коллоида, сушат в пылезащищенном сушильном шкафу 48 ч при 20^oC. Готовые пленочные материалы стерилизуют гамма-излучением в дозе 2,5 МРад и мощности 0,5 МРад/ч.

В эксперименте на лабораторных животных показана нетоксичность пленочного материала из гликозаминогликанов (ЛД₅₀ > 5 г/кг при введении в желудок крысам, что позволяет отнести материал к IV классу опасности веществ "мало токсичные и мало опасные", признаки интоксикации отсутствуют при внутривенном введении кроликам в дозе 10 мг/кг). Аллергические реакции отсутствуют при аппликации материала на роговицу кроликам и на модели аллергического контактного дерматита, воспроизведенного на морских свинках. Также не обнаружено по сравнению с биологическим контролем изменений со стороны биохимических и морфологических показателей при ежедневном в течение 24 сут эпикутанном нанесении пленочного материала из гликозаминогликанов морским свинкам. Выявлена стимуляция репаративной регенерации под воздействием пленочного материала на моделях кожных резаных ран у крыс, экспериментальных непроникающих повреждениях роговицы и кератотомии у кроликов. Восстановление полноценного дифференцированного эпителия наблюдалось во всех случаях.

Гистологические и электронно-микроскопические исследования кожи и роговицы после проведенного лечения доказывают полное восстановление дифференцированного эпителия и стромы тканей к 10-12 сут эксперимента.

Предлагаемый пленочный материал при аппликации на роговицу не изменяет ее оптические свойства и обладает выраженным репаративным эффектом для ткани роговицы.

Предлагаемый способ изготовления пленочного материала из гликозаминогликанов технологичен, не требует дорогостоящего оборудования и реактивов, обладает по сравнению с прототипом следующими преимуществами: гомологичность тканям человека; прозрачность материала при аппликации идентична роговице; стимуляция всех этапов репаративной регенерации (пролиферации и дифференциации); дешевизна сырья, меньшая трудоемкость при его заборе и предварительной обработке.