способ приготовления бактериального препарата ацидофильной культуры

Формула изобретения

Способ приготовления бактериального препарата ацидофильной культуры, предусматривающий приготовление питательной среды на основе осветленной молочной сыворотки с внесением солевых добавок, нейтрализацию среды, поэтапное раскисление ее в процессе культивирования закваской ацидофильной культуры с установлением заданной величины рН среды и подкормку раствором глюкозы, охлаждение, отделение бактериальной массы, смешивание ее с защитной средой, содержащей сахарозу, воду и желатозу, замораживание и сушку, отличающийся тем, что в качестве солевой добавки используют натрий фосфорнокислый двузамещенный, нейтрализацию среды проводят водным раствором аммиака до pН 6,2 6,8, причем для подкормки используют раствор глюкозы 10%-ной концентрации, а замораживание и сушку ведут в двустадийном режиме.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии и медицине, и касается бактериальных препаратов, применяемых в молочной промышленности для производства продуктов в качестве пищевой добавки, как иммуномоделирующий фактор основанный на конкурентном вытеснении условно-патогенной микрофлоры с последующей стабилизацией биоценоза при инфекционной патологии у детей и взрослых.

Известен способ приготовления бактериального препарата ацидофильных культур, предусматривающий приготовление питательной среды на основе осветленной молочной сыворотки с добавлением биостимуляторов и солевых добавок, нейтрализацию среды и поэтапное раскисление ее в процессе культивирования закваски ацидофильной культуры с установлением заданной величины pH среды, охлаждение, отделение бактериальной массы, смешивание с защитной средой, содержащей сахарозу, желатину и воду, замораживание и сушку [1]

Недостатком способа является то, что бактериальный препарат не обладает достаточно высокими, антибиотическими и кислотообразующими свойствами и не может быть рекомендован для применения в медицине.

Наиболее близким является способ приготовления бактериального препарата ацидофильных культур, предусматривающий приготовление питательной среды на основе осветленной молочной сыворотки с добавлением биостимуляторов и солевых добавок, нейтрализацию и поэтапное раскисление ее в процессе культивирования закваски ацидофильной культуры с установлением заданной величины pH среды, охлаждение, отделение бактериальной массы, смешивание с защитной средой, содержащей сахарозу, желатину и воду, замораживание и сушку. В своем составе содержит в качестве солевой добавки фосфорно-кислый и серно-кислый аммоний. В защитной среде содержится 0,75 1,0 мас. иодистого калия или молибденовокислого аммония. Раскисление среды проводится газообразным аммиаком. Подкормку осуществляют 40%-ным раствором глюкозы в количестве 0,8 - 1,2 мас. и серно-кислым марганцем в количестве 0,016 0,017 мас. [2]

Недостатком данного бактериального препарата и способа его получения является: раскисление биомассы ведется газообразным аммиаком до pH 5,8 6,5, что жестко влияет на микроорганизмы, препарат в своем составе содержит молибден и марганец, что в свою очередь снижает химическую чистоту препарата и сужает сферу его применения.

Цель изобретения изменение экспозиции культивирования, применение щадящего режима леофилизации, получение бактериального препарата химически чистого с высокой антибиотической кислотообразующей активностью для профилактики и лечения инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у детей и взрослых.

Поставленная цель достигается тем, что в способе приготовления бактериального препарата ацидофильной культуры, предусматривающем приготовление питательной среды на основе осветленной молочной сыворотки с добавлением солевых добавок, нейтрализацию среды и поэтапное раскисление ее в процессе культивирования закваской ацидофильной культуры с установлением заданной величины pH среды, охлаждение, отделение бактериальной массы, смешивание с защитной средой, содержащей сахарозу, воду, желатину, замораживание и сушку, в качестве солевой добавки содержит натрий фосфорно-кислый двузамещенный, нейтрализацию питательной среды осуществляют водным раствором аммиака до pH 6,2 6,8 и при последнем раскислении добавляют в качестве подкормки 10%-ный стерильный раствор глюкозы, а леофилизацию проводят в двустадийном режиме.

Использование натрия фосфорно-кислого двузамещенного вместо фосфорно-кислого и серно-кислого аммония позволяет снизить содержание аммиака в среде, а также использовать соль-плавитель, разрешенный органами здравоохранения для применения в пищевых целях.

Исключение из защитной среды йодистого калия или молибдено-вокислого аммония не снижает антибиотических и кислотообразующих свойств препарата, при этом повышается его химическая частота.

Применение водного раствора аммиака для поэтапного раскисления среды смягчает процесс и делает его щадящим для микроорганизмов.

Применение двустадийной сушки препарата сначала при температуре минус (451)^oC в конце плюс (261)^oC с продолжительностью (255) ч до массовой доли влаги не более 5% позволяет провести леофилизацию в более мягком режиме без химических и структурных изменений готового бактериального препарата.

Способ осуществляется следующим образом:

Пример 1. К обезжиренной молочной сыворотке добавляют молочную кислоту до pH 4,5, нагревают до температуры 100^oC и выдерживают 20 мин. Сыворотку осветляют отстаиванием.

На 100 л осветленной сыворотки добавляют 700 г натрия фосфорно-кислого двузамещенного, подготовленную таким образом среду стерилизуют при 120^oC и 1,0 атм в течение 16 мин, затем охлаждают до температуры 42^oC, устанавливают значение pH 6,2 водным раствором аммиака и добавляют 3 л глюкозы в виде стерильного 10% раствора.

В подготовленную питательную среду вносят 3 кг закваски штаммовой ацидофильной культуры и культивируют при температуре 42^oC в течение 12 ч. В процессе культивирования проводят раскисление водным раствором аммиака до величины 6,2. По окончании культивирования среду охлаждают до 18^oC. Затем отделение клеток ацидофильных бактерий от питательной среды проводят на суперцентрифуге. Степень отделения клеток от среды контролируют по прозрачности осветленной жидкости, отходящей от суперцентрифуги, и микроскопией.

Бактериальную массу в количестве 1,0 кг извлекают из ротора центрифуги с соблюдением правил ассептии в стерильную емкость и смешивают с 7 л 10%-ного стерильного раствора сахарозы, 1% желатина при температуре 18^oC, гомогенизируют, фасуют во флаконы по 4 5 мл, замораживают и высушивают в сублимационной сушилке при двустадийном режиме:

температура в начале сушки минус 44^oC, в конце сушки 25^oC.

Продолжительность сушки 30 ч, до массовой доли влаги не более 5%

В 1 г препарата содержится 50 млрд. клеток ацидофильной палочки.

Пример. 2. Получают осветленную сыворотку. На 50 л этой сыворотки вносят 350 г натрия фосфорно-кислого двузамещенного. Подготовленную смесь стерилизуют при температуре 122^oC в течение 20 мин при 1 атм, охлаждают до температуры 46^oC, устанавливают pH 6,2 6,8 водным раствором аммиака, добавляют 1,5 л глюкозы в виде стерильного 10%-ного раствора. В подготовленную питательную среду добавляют 1,5 л закваски штаммовой ацидофильной культуры и культивируют при температуре 46^oC в течение 12 ч. По окончании культивирования среду охлаждают до 22^oC. На суперцентрифуге проводят отделение бакмассы в количестве 0,5 кг, смешивают с 3,5 л стерильного раствора, содержащего 10% сахарозы и 2% желатина при температуре 22^oC, гомогенизируют, фасуют во флаконы по 4 5 мл замораживают и высушивают до массовой доли влаги не более 5% в сублимационной сушилке при двустадийном режиме:

температура в начале минус 46^oC, в конце сушки 20^oC. Продолжительность сушки 20 ч.

В 1 г препарата содержится 50 млрд. клеток ацидофильной палочки.

Препарат обладает высокими антибиотическими и кислотообразующими свойствами. Биобактон имеет исключительно высокую химическую чистку, термически устойчив, не подвергается микробной диструкции. Биобактон высокой степенью адаптации к молочной сыворотке, отличается высокой биологической активностью, устойчив к фенолу, индолу, желчи и щелочам. Состав препарата отличается подбором определенного количества активных бактерий, взятого в наиболее рациональном соотношении с защитной средой 1:7, что обеспечивает высокую эффективность его действия.

Лечебный эффект препарата основан на конкурентном вытеснении условно патогенной флоры с последующей стабилизацией кишечного биоценоза. Органолептические свойства препарата представляют возможным применение его у детей всех возрастных групп.

Биобактон рекомендуется для применения в виде водного раствора. Для его приготовления вскрывают содержимое флакона, разводят его в 10 мл воды и выливают в емкость, содержащую необходимое количество (20-40-90 мл) воды комнатной температуры, взбалтывают и настаивают 30 мин. Кратность приема от 2 до 4 раз (в зависимости от тяжести биоценоза) по назначению врача.