способ получения производного гематопорфирина

Формула изобретения

Способ получения производного гематопорфирина с использованием уксусной кислоты, щелочи и обогащения олигомерами, отличающийся тем, что гемин последовательно обрабатывают 50%-ным раствором бромистого водорода в уксусной кислоте, ацетатом натрия и 0,05-0,1N раствором гидроксида натрия с последующим осаждением и обогащением олигомерами экстракцией низшими спиртами (С₁-С₃).

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к химии биологически активных соединений, а конкретно к усовершенствованному способу получения производного гематопорфирина, который используется в качестве фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии (ФДТ) злокачественных новообразований.

Производное гематопорфирина представляет собой сложную полусинтетическую смесь мономерных и олигомерных порфиринов, причем активными в этой смеси являются олигомерные компоненты.

Известен способ получения производного гематопорфирина(ПГП), включающий последовательную обработку гематопорфирина [1] смесью уксусной и серной кислот (19:1) и щелочью с последующим обогащением олигомерами с помощью мембранной фильтрации [2]

К недостаткам этого способа следует отнести следующее:

1) при обработке гематопорфирина смесью серной и уксусной кислот наряду с нужным диацетатом гематопорфирина, который и вступает в реакцию при щелочной обработке, образуются побочные продукты (моноацетаты гематопорфирина и гематопорфирин), что приводит к снижению степени олигомеризации в конечном продукте;

2) способ обогащения ПГП олигомерной фракцией с помощью мембранной фильтрации трудоемкая и длительная операция, в процессе которой состав ПГП может изменяться, что затрудняет его стандартизацию.

Целью изобретения является упрощение процесса получения производного гематопорфирина и повышение содержания активной олигомерной фракции.

Поставленная цель достигается следующим способом.

Гемин обрабатывают 50% раствором бромистого водорода в уксусной кислоте (при меньших концетрациях небходимо брать большие количества раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, а при больших концентрациях сложно работать из-за бурно выделяющегося бромистого водорода), добавляют последовательно уксусную кислоту, плавленный ацетат натрия и воду. Выпавший диацетат гематопорфирина отфильтровывают и обрабатывают 0,05-0,1 N раствором гидроксида натрия в течение 1 часа (при концентрации щелочи больше О, 1N уменьшается степень олигомеризации, а при концетрации меньше 0,05N уменьшается растворимость диацетата гематопорфирина), осаждают полученное ПГП уксусной кислотой, отфильтровывают, промывают водой, перемешивают с низшим спиртом (С₁-С₃) в течение 20 часов (при этом мономерные порфирины преимуществено переходят в раствор), отфильтровывают осадок, промывают спиртом и высушивают на воздухе.

Отличительными признаками заявляемого способа являются: использование в качестве исходного вещества для олигомеризации диацетата гематопорфирина, а не смеси продуктов ацтетилирования гематопорфирина (получение последних требует больше стадий синтеза, чем получение диацетата гематопорфирина), что приводит к сокращению стадий при получении ПГП, исходя из гемина, и повышению степени олигомеризации в конечном продукте; обогащение ПГП активными олигомерными компонентами с помощью простой экстракции низшими спиртами в мягких условиях, что исключает побочные реакции (как это имеет место при использовании мембранной фильтрации) и позволяет получить в будущем препарат для ФДТ.

Пример 1. 10 г гемина добавляют порциями к 60 г 50%-ного раствора бромистого водорода в уксусной кислоте при -5^oС, перемешивают 12 часов ( до полного растворения гемина), добавляют 480 мл уксусной кислоты, затем присыпают порциями 92 г ацетата натрия, перемешивают 1 час, разбавляют 3 л воды, отфильтровывают, промывают водой и высушивают на воздухе. Выход 8,4 г.

Пример 2. 5 г диацетата гематопорфирина растворяют в 250 мл 0,1 N раствора гидроксида натрия и перемешивают в течение 1 часа. Затем рН раствора доводят уксусной кислотой до значений 4-6, выпавший осадок отфильтровывают и промывают водой. Полученное вещество перемешивают с 250 мл метанола в течение 20 часов, отфильтровывают, промывают метанолом и высушивают на воздухе. Выход: 2 г.

Пример 3. 8 г диацетата гематопорфирина растворяют в 800 мл 0,05 N раствора гидроксида натрия и перемешивают в течение 1 часа. Затем рН раствора доводят уксусной кислотой до значений 4-6, выпавший осадок отфильтровывают и промывают водой Полученный осадок перемешивают с 400 мл этанола в течение 20 часов, отфильтровывают, промывают этанолом и высушивают на воэдухе. Выход: 3.3 г.

Пример 4. Диацетат гематопорфирина обрабатывают аналогично второму примеру. Полученный осадок перемешивают с 250 мл изопропанола в течение 20 часов, отфильтровывают, промывают изопропанолом и высушивают на воздухе. Выход: 2.3 г.

Контроль олигомерного состава ПГП осуществляют с помощью хроматографии на геле Fractogel HW-40(S) (Мерк, Германия) в системе диметилсульфоксид-толуол-уксусная кислота (1:1:1). Гель-хроматограммы образцов ПГП приведены на фиг.1-4.

Соотношение площадей пиков на хроматограммах, которые соответствуют содержанию мономеров, димеров и олигомеров приведены в таблице.1.

Полученное производное гематопорфирина охарактеризовано с помощью физико-химических методов анализа масс-спектрометрии, ИК-, и электронной спектроскопии (см.табл.2, cпектры приведены на фиг. 5-11). 2, 4, 6, 8, 10 ТТТ1,