средство для лечения иммунодефицитных состояний

Формула изобретения

Средство для лечения иммунодефицитных состояний, содержащее пептид, отличающееся тем, что в качестве пептида оно содержит гексапептид структурной формулы: аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний различной этиологии.

В современной фармакологии имеется большой арсенал лекарственных средств, содержащих пептиды и используемых при лечении иммунодефицитных состояний у больных вирусным гепатитом, хроническим бруцеллезом, злокачественными новообразованиями и т.д.

Среди зарубежных препаратов наиболее близким аналогом является - Тhimopentin (Тimunох), полученный на основе синтетического пентапептида (аргинил-лизил-аспартил-валил-тирозин), выпускаемый фирмой Cilаg Inteгnatiоnаl (Швейцария); (G. Gоldstein, Т.К.Аudhуа Тhymopоiеtin tо Тhymoреntin: Ехреrimеnta1 Studiеs. Survеy оf immunolоgiс Resеаrсh. (1985), 4: suррl. 1, рр. 1-10).

Данное изобретение направлено на разработку аналогичного препарата с более широким фармакологическим спектром действия при более низких терапевтических дозах.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в качестве средства для лечения иммунодефицитных состояний используется гексапептид структурной формулы: аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинин.

Предложенный препарат содержит в качестве действующего вещества синтетический гексапептид, молекулярная масса 836 Д. Препарат представляет собой белый гигроскопичный порошок без запаха. Легко растворим в воде, изотоническом растворе хлорида натрия и 95%-ном спирте.

Препарат (авторами назван иммунофаном) разработан в Научно-производственном биотехнологическом малом предприятии Бионокс" и ему присвоен Государственный регистрационный номер 1037049 от 06.09.1991 г. из которого с очевидностью не следуют его свойства восстанавливать клеточный и гуморальный иммунитет, стимулировать созревание Т-лимфоцитов, усиливать активность естественных киллеров и кислородзависимую систему бактерицидности, увеличивать синтез иммуноглобулинов М, G, А, стимулировать продукцию химических гормонов иммунитета, регулировать продукцию медиаторов иммунной системы, повышать антибактериальную и противовирусную резистентность организма, увеличивать титры и длительность циркуляции вируснейтрализующих антител, нормализовать генетическую стабильность лимфоцитов, а также значение терапевтической дозы и безвредность.

Экспериментальное и клиническое изучение предложенного препарата показывает, что он не вызывает никаких побочных действий.

Препарат выпускают в виде 0,01%-ного раствора для подкожных инъекций в ампулах по 1,0 мл. Срок хранения 2 года при 4 8^oС.

Экспериментальные данные показывают, что:

1. Иммунофан обладает мощным иммунорегулирующим действием в отношении восстановления нарушенных показателей клеточного и гуморального иммунитета

2. Препарат стимулирует процессы созревания Т-лимфоцитов, кооперативное взаимодействие Т-хелперов и клеток костного мозга, восстанавливает нарушенное соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов, усиливает активность естественных киллеров и кислородзависимую систему бактерицидности нейтрофилов.

3. На фоне врожденной или приобретенной иммунопатологии иммунофан активирует ранние этапы антителогенеза, увеличивает синтез иммуноглобулинов M, G, А, а при гиперпродукции IgЕ снижает уровень его синтеза.

4. Иммунофан стимулирует нарушенную продукцию химических гормонов иммунитета, в том числе сывороточного химического фактора и в 4 6 раз увеличивает количество антителообразующих клеток.

5. Иммунофан регулирует образование медиаторов иммунной системы в зависимости от уровня их продукции. В условиях сниженной пролиферативной активности лимфоцитов препарат стимулирует экспрессию рецепторов и образование интерлейкина 2 (лекарственный или экологический иммунодефицит).На фоне индуцированной гиперпродукции фактора некроза опухоли препарат уменьшает его активность.

6. Препарат повышает антибактериальную и противовирусную резистентность организма, его назначение резко увеличивает выживаемость экспериментальных животных при инфицировании К1еbsiе11а рneumoniае и жизнеспособность потомства при заражении вирусом гриппа.

7. Назначение иммунофана при иммунизации противовирусной вакциной резко увеличивает титры и длительность циркуляции вируснейтрализующих антител.

8. При декомпенсации хронического инфекционного процесса препарат нормализует генетическую стабильность лимфоцитов по показателю стабилизации структуры ДНК и ее способности к репарации.

9. Фармакологическое действие иммунофана не зависит от уровня продукции простагландина Е^2 и эффект препарата достигается в комбинации с противовоспалительными препаратами нестероидной группы (ингибиторов простагландинов).

10. Иммунофан обладает исключительно низкой токсичностью и обеспечивает широкий резерв безопасности. Разовая доза, в 10000 раз превышающая среднюю терапевтическую, не вызывает гибели экспериментальных животных.

11. Определение хронической токсичности препарата демонстрирует его безвредность. Выявленные колебания гематологических и биохимических показателей при назначении животным тимогексина ежедневно, в течение одного месяца, в терапевтической или субтоксической дозе, после отмены иммунофана возвращаются до исходного уровня.

12. Назначение иммунофана не вызывает местно раздражающего действия, препарат не обладает аллергенностью и мутагенной активностью.

Препарат показал хорошие клинические результаты при лечении иммунодефицитных состояний у больных с хроническим активным и персистирующим гепатитом В, бруцеллезом, у лиц, инфицированных ВИЧ, и в клинике детской онкологии при лечении острого лимфолейкоза.

Клиническое применение иммунофана у больных, страдающих активным и персистирующим гепатитом В, проводят с учетом клинико-иммунологического состояния пациентов. Для этого перед назначением препарата проводят определение индивидуальной чувствительности лимфоцитов крови больного in vitro к действию препарата восстановлению количества субпопуляций Т-лимфоцитов хелперов-индукторов, супрессоров, цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров. В сыворотке больных определяют экспрессию НВs и НВе антигенов и наличие соответствующих ним антител. Эффективность терапии оценивают по клинико-иммунологическим показателям, в том числе по положительной динамике биохимических показателей активности патологического процесса, и элиминированию вирусных антигенов.

При проведении клинических испытаний у больных бруцеллезом оценивают показатели клеточного иммунитета, нарастание титров Ig М, IgG, IgA антител, уровень циркулирующих иммунных комплексов, клиническое состояние пациентов, обращая особое внимание на наличие воспалительных реакций и объем движений суставов.

При определении показаний к назначению иммунофана у лиц, инфицированных ВИЧ, учитывают индивидуальную чувствительность лимфоцитов крови больного in vitro к действию препарата его способность восстанавливать иммунорегуляторный индекс CD4/CD8, тормозить продукцию фактора некроза опухоли.

Назначение препарата показано лицам на ранних стадиях заболевания в комплексе со специфической противорирусной терапией (азидотимидином).

Препарат назначают курсами для подкожного введения в дозе: 1 1,5 мкг/кг массы тела, однократно, с интервалом 3 дня в течение 2 6 недель. При необходимости по клинико-иммунологическим показателям проводят повторные поддерживающие курсы в течение 1 2 недель.

С целью создания бустерного эффекта препарат назначают однократно за час до иммунизации подкожно в дозе 1 1,5 мкг/кг массы тела. При вакцинации лиц с выраженным нарушением иммунного статуса иммунофан назначают за 1 час до иммунизации и через каждые три дня в течение 2 3 недель.

Конкретные примеры лечения больных.

Пример N-1.

Больной Ханин К.В. 18 лет, находился во 2 КИБ, г.Москва с 22.01.90г. по 17.04.90г. Клинический диагноз: Хронический активный гепатит, НB AГ-положительный.

Жалобы при поступлении: жалобы на тяжесть в эпигастрии, темную мочу, плохой аппетит, головную боль, зуд кожи, боли в голенях, в коленных суставах, кровоточивость и припухлость десен периодически в течение 4-х лет; заболел остро 18.01.90г. когда исчез аппетит, появилась тяжесть в эпигастрии, зуд кожи, моча темного цвета, температура 37,2^oС, желтуха с 22.01.

Анамнез заболевания: В 1985 году перенес гепатит (этиологию не знает) в классе одновременно заболело 3 человека. Лечился, выписан на 21 день, без осложнений. В 1887 году вновь появилась температура, желтуха, лечился 45 дней, желтуха держалась длительно. Курит, алкоголь употребляет часто, курит анашу с 12 лет, последние 8 месяцев до призыва в армию в/в колол препараты опия. В армии с 2.12.89Г. Рост 178 см, вес 76 кг. Статус на момент поступления: состояние средней тяжести, желтуха, "сосудистые звездочки" на коже лица, печень увеличена до +2+3 см из-под края реберной дуги, селезенка увеличена, выступает из-под реберной дуги. При пальпации печень, селезенка безболезненные. АД l15/80 мл.рт.ст. пульс 70. Рентген легких без патологических изменений. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости печень увеличена в основном за счет левой доли, ткань зернистая, уплотнена, край острый, селезенка увеличена (113 х 47 мм). Биопсия nечени от 15.03.90 г.- балочная структура печени нарушена, зернистая и жировая дистрофия гепатоцитов, ступенчатые некрозы вокруг портальных трактов, пролиферация ретикулоэндотелиальной системы, мелкие некрозы в паренхиме. Заключение - умеренно выраженный xронический активный гепатит.

Биохимические диализы крови приведены в табл. 1.

Показатели противовирусного иммунитета приведены в табл. 2.

Иммунологические показатели см. в табл. 3.

Терапия заболевания: с 13.03 начат курс терапии препаратом иммунофан по предложенной схеме. Больной выписан из клиники 17.04.90г.

При выписке жалоб нет, кожные покровы чистые, желтухи нет, аппетит хороший. Печень, селезенка не увеличены. Кровотечения из десен нет.

Пример N-2. Больной Васильев 3.Н. 19 лет, находился в 2 КИБ с 01.03 по 13. 06.90 г.

Клинический диагноз: хронический персистирующий гепатит. НВsAГ полож.

Сопутствующие заболевания: хронический бронхит.

Жалобы при поступлении: больной переведен из госпиталя, где находился по поводу хронического бронхита (обострение, кашель, одышка, боли в грудной клетке, лихорадка). При поступлении во 2 КИБ жалобы на умеренные боли в правом подреберье, клинически определяется увеличение печени до + 4 см из-под реберной дуги, в крови выявлен HBsAГ. Селезенка до 1,0 см из-под реберной дуги. Кожные покровы чистые, вторичных печеночных знаков нет. Состояние удовлетворительное.

Ультразвуковое исследование органов брюшной полости печень увеличена, контуры ровные, структура однородная, зернистая Селезенка увеличена 116 х 47 мм. Рентгенография легких без патологии.

Биопсия печени от 18.04: балочная структура печени сохранена, синусы расширены и полнокровны, портальные тракты умеренно увеличены фиброзированы и инфильтрированы лимфоцитами и макрофагами. Имеются очаги лимфа-гистиоцитарной инфильтрации внутри дольки. Гепатоциты в состоянии выраженной жировой дистрофии.

Заключение умеренно выраженный хронический персистирующий гепатит.

Биохимические показатели крови приведены в табл.4.

Показатели противовирусного иммунитета см. в табл. 5

Иммунологические показатели см. в табл. 6.

Терапия заболевания: с 24.04. начата терапия препаратом иммунофан по предложенной схеме, больной выписан из клиники 13.06.

При выписке состояние удовлетворительное, жалоб нет. Сохраняется увеличенная печень +3+4 см, селезенка + 1,0 см, при пальпации плотные.

Таким образом, ограниченные клинические испытания иммунофана у больных хроническим вирусным гепатитом демонстрируют достижение терапевтического эффекта на фоне восстановления клеточного и противовирусного иммунитета, элиминирования вирусных антигенов и снижения биохимических показателей активности патологического процесса в печени.

Пример N-3.

Больной С.И.М. 31 год. Поступил в клинику 14.01.91г. по направлению Министерства здравоохранения ДАССР с диагнозом: хронический бруцеллез, локомоторная форма в стадии субкомпенсации.

При поступлении жаловался на боли в грудном, пояснично-крестцовом отделах позвоночника и крупных суставах, а также мышцах нижних конечностей, выраженные боли в правом плечевом суставе и ограничение движений в последнем при подъеме руки в сторону и вверх, познабливание, профузное потоотделение, беспокоящее даже в покое.

Больным считает с мая 1985 г. когда работая чабаном, отмечал лихорадочное состояние, а позднее боли и припухлость в области голеностопных суставов, которое прошли без лечения. Однако в 1988 г. летом состояние ухудшилось, что связывает с физическим перенапряжением и переохлаждением на перегоне скота. Диагноз бруцеллеза впервые выставлен в райбольнице и подтвержден в специализированном отделении клиники инфекционных болезней Дагмединститута по результатам серологических исследований и аллерготеста (реакция Бюрне). Лечебные препараты не помнит, за исключением использования внутривенной вакцинотерапии, после которой отмечал улучшение. В 1990 г. самочувствие вновь ухудшилось, появились боли в крупных суставах конечностей и в грудном отделен позвоночника, резко упала работоспособность. Лечение в условиях Центральной райбольницы эффекта не дало и при повторном обращении в клинику инфекционных болезней был направлен на обследование и лечение в КИБ N 2 г.Москвы.

Из эпиденамнеза обращает внимание,что работал чабаном с 1983 года. Проживает в эндемичной по бруцеллезу сельской местности. Допускает возможность инфицирования преимущественно в результате профессионального контакта с больными животными, т.к. в 1985-1986 г. работал чабаном в неблагополучном по бруцеллезу МРС хозяйстве. В 1988 г. участвовал сакманщиком в охотной кампании. Прививки против бруцеллеза не получал.

Объективно: состояние тяжелое.

Кожа лица и шеи гиперемирована отмечается диффузный гипергидроз и микролимфаденопатия. Активные и пассивные движения в

cycтaвax конечностей в полном объеме, за исключением правого плечевого сустава, в котором отмечается резкая боль при отведении правой верхней конечности, болезненность при пальпации в области плечелопаточного сочленения. Пальпация паравертебральных точек и межкостных промежутков, осевая и ротационная нагрузки на позвоночник резко болезненны в нижне-грудном отделе, отмечается симптом "вожжей" и положительный симптом Кушелевского 1.

Частота дыхательных движений 18-20 в 1 мин. Физикальных отклонений от нормы со стороны легких не отмечается. Сердечная деятельность удовлетворительная. АД 140/95 мм рт.ст. Тахикардия. Печень и селезенка не увеличены. Температура тела субфебрильная (37,2 37,8^oС).

Общий анализ крови от 15.01.91 г. Нв 138; л 6,2: с 60; э 1; лимфоциты 22; моноциты 3, СОЭ 3 мм/час.

Серологические исследования крови: реакция Хеддльсона резко положительная; реакция агглютинации (Райта) 1:200; Кумбса 1:800; РПГА - 1:200.

Реакция Бюрне с бруцеллезным жидким аллергеном для внутрикожного введения (производства Омского НИИ вакцин и сывороток) 21 кв.см (гиперемия, отек, болезненность, лимфангит, регионарный лимфаденит, общая реакция).

На рентгенограммах выявляется деформирующий спондилез в области Д10-Д11 с уменьшением высоты межпозвоночного диска и краевыми костными разрастаниями в области тел этих позвонков. На рентгенограммах правого плечевого сустава без видимой патологии.

На основании вышеуказанных клинико-анамнестических данных, а также лабораторных, аллергологических и рентгенологических исследований выставлен клинический диагноз "Хронический бруцеллез, локомоторная форма в фазе декомпенсации (правосторонний плече -лопаточный периартрит, спондилез Д10-Д11 позвонков с ограниченным остеохондрозом, спондилит грудного отдела позвоночника)

Лечение: иммунофан, артенарон, индометацин, алмагель, тавегил, глюконат кальция, иглорефлексотерапия, ультразвук с гидрокортизоновой мазью на область правого плечевого сустава и грудной отдел позвоночника, лечебная физкультура.

В динамике проводимой терапии состояние больного несколько улучшилось - артралгии и явления правостороннего плече-лопаточного периартрита стихли, объем пассивных и активных движений полностью восстановился, но отмечает умеренную болезненность в правом плечевом суставе при активных движениях с большой амплитудой. Болевой синдром и объективная симптоматика поражения нижне-грудного отдела позвоночника выражены в меньшей степени, но сохраняются. Рекомендовано лечение в санаторно-курортных условиях и программа медицинской реабилитации.

При катамнестическом наблюдении через 6 месяцев и 1 год установлено улучшение состояния больного, а также отсутсвие рецидивов после лечения во 2-й КИБ г.Москвы.

Пример N-4.

Больной И.Э.М. 23 лет находился на стационарном обследовании и лечении с диагнозом хронический бруцеллез, клинически комбинированная (нейролокомоторная) форма в фазе субкомпенсации.

Поступил в 16 отд. 4-го корпуса 2-й КИБ г.Москвы по направлению МЗ Дагестана. Жалуется на боли в правом голеностопном и левом тазобедренном суставах, ноющие болевые ощущения в пояснично-крестцовой области,усиливающиеся при физической нагрузке и переохлаждении, головные боли, особенно по вечерам, ощущение жара, потливость, слабость и быстрая утомляемость при привычной физической нагрузке.

Больным себя считает с апреля 1991 года когда впервые отмечались боли в левом тазобедренном суставе, озноб, сменяющийся профузным потоотделением, появились боли и припухлость в лучезапястных суставах. При обследовании в условиях Дагестанского республиканского диагностического центра диагноз не был установлен. Присоединились головные боли, усилилась потливость, отмечалась эмоциональная неустойчивость и раздражительность. При повторном обращении к врачам райбольницы на основании положительных серологических анализов был выставлен предварительный диагноз "Бруцеллез" и направлен на стационарное лечение в профилизированное отделение Республиканской клинической инфекционной больницы Дагестана, где и был установлен диагноз "Острый бруцеллез". Лечение начали с внутривенного введения бруцеллезной лечебной вакцины, но из-за отсутствия реакции вакцинотерапию не продолжили. Антибиотики не получал.

В последние 3 года, будучи студентом сельхозтехникума, привлекался к сезонным работам в качестве сакманщика, а в 1991 г.взял в аренду отару овец, среди которых отмечались больные животные. Допускает возможность инфицирования как контактным, так и элиментарным путем, т.к. употреблял в пищу свежий овечий сыр и пил парное молоко. Профпрививки не получал.

Объективно: состояние средней тяжести. Отмечается разлитая гиперемия кожи лица, шеи и верхних отделов грудной клетки, стойкий красный дермаграфизм, диффузный гипергидроз. Пальпаторно определяется микролимфаденопатия подкрыльцовых узлов справа. Активные и пассивные движения в суставах не ограничены, но болезненны в пр/голеностопном, л/тазобедренном суставах. Симптом Кушелевского-111 положителен слева. Осевая и ротационная нагрузка на позвоночник безболезненны.

Со стороны органов дыхания без особенностей. АД 130/160 мм рт.ст. Пульс

84 уд.в 1 мин, удовлетворительного наполнения, ритмичный, лабильный. Гепатоспленомегалии нет.

Результаты лабораторных, иммунологических и рентгенологических исследований: общ. ан. крови Нв 144, лейкоциты 7,0, п 12, с 25, э - 4, л 50, м 9, СОЭ-5. Общ. ан. мочи без патологии. Биохимическое исследование крови общий белок 86,3; холестерин 4; В-липопротеиды 720. Билирубин (пр) 0, общий 23,6, АЛТ 45; ЩФ 150, холинэстераза 0,18, "С "-реактивный белок отр. Тимоловая проба 17, сулемовая 2,0. Серология - РХ резко положительная, РА 1:800, РПГА 1: 400, РК 1:200. Анализ субпопуляций лимфоцитов (методом проточной лазерной цитометрии): СD2 - кл.-78,5; СD20 кл.-4,7% СD4 -16,7% (норма 35), СD8 клетки 38,6 (N-36), ИРИ 0,4,

Снижена функциональная активность нейтрофилов в тестах ЛЗХЛ и адгеэии.

На рентгенограммах голеностопного сустава выявляются небольшие деформирующие изменения в пяточной кости с умеренной деструкцией костной ткани.

Реакция Бюрне на в/к введение 0,1 мл бруцеллезного жидкого аллергена - 2,4 мм х 2,6 мм (умеренная гиперемия и отек).

Клинический диагноз: ХРОНИЧЕСКИЙ БРУЦЕЛЛЕЗ, КЛИНИЧЕСКИ КОМБИНИРОВАННАЯ (нейролокомоторная) ФОРМА В СТАДИИ СУБКОМПЕНСАЦИИ.

Лечение:

1. Рифампицин по 0,9 х 2 раза в сутки 12 дней;

2. Иммунофан по 100 мкг п/к N 5 (1 инъекция в 3 суток);

3. Индометацин по 0,025 х 3 раза в сутки 25 дней;

4. Тавегил по 0,01 х 2 раза 25 дней;

5. Глюконат кальция по 0,5 х 3 раза;

6. Физиотерапия ультразвук (фонофорез с гидрокортизоном); 7. Тазепам по 1 т. х 2 раза.

В динамике проводимой терапии состояние больного улучшилось и при выписке расценивается как удовлетворительное. Иммунокорригирующая терапия иммунофаном дала хороший реабилитационный эффект.

Таким образом, иммунофан может быть рекомендован для применения при иммунодефицитных состояниях в качестве лекарственного препарата для профилактики и лечения хронических вирусных и бактериальных инфекций, в том числе: хронического активного и персистирующего вирусного гепатита В, ВИЧ-инфекции, бруцеллеза, а также для создания бустерного эффекта при вакцинации. ТТТ1