способ получения иммуноглобулинового препарата

Формула изобретения

Способ получения иммуноглобулинового препарата из крови человека путем солевой экстракции спиртового осадка сыворотки крови, очистки его от липопротеидов с последующим выделением целевого продукта осаждением в присутстсвии полиэтиленгликоля, отличающийся тем, что экстракцию спиртового осадка проводят сорока-шестидесятикратным объемом 0,9%-ного раствора хлорида натрия с последующим удалением фракции липопротеидов хлороформом.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности, к иммунологии и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний.

Препараты человеческого иммуноглобулина, применяемые в настоящее время, получили высокую оценку в практике борьбы с рядом заболеваний. Однако современные коммерческие препараты гаммаглобулина, изготовленные этаноловым методом по Кону, содержат, в основном, IgG-иммуноглобулины и лишь небольшие количества иммуноглобулинов других классов, которые удаляются с балластными фракциями в процессе производства.

В коммерческих препаратах иммуноглобулина содержатся антитела против токсинов многих вирусов, но антитела против ряда возбудителей бактериальной природы (эшерихии, сальмонеллы, шинеллы) содержатся в относительно невысоких титрах. Антибактериальные антитела в нормальной сыворотке относятся, в основном, к фракции IgM, которая попадает в препараты в небольших количествах.

Применение обычных препаратов гаммаглобулина недостаточно эффективно при ряде инфекций у новорожденных и детей первых месяцев жизни, кровь которых отличается низким содержанием иммуноглобулинов классов М и А.

В настоящее время в ряде стран выпускаются и применяются в клинике препараты, обогащенные IgM и/или IgA для профилактики и лечения тяжелых бактериальных инфекций, сепсиса, иммунодефицитных заболеваний.

Известен способ получения комплексного иммуноглобулинового препарата (КИП) из осадка Б (III фракции Кона), являющегося балластной фракцией при спиртовом фракционировании сыворотки (Экспериментально-производственный регламент N 338-91 иммуноглобулин человека, сухой, для энтерального применения. УТВ. 06.09.91).

Способ предусматривает солевую экстракцию осадка Б в 0,9%-ном растворе хлорида натрия (в соотношении 1:10, т.е. в десятикратном объеме). Обработку экстракта осадка Б ведут хлоридом (10% по объему) с декстрансульфатом (0,1%) с целью удаления липопротеидов и последующее осаждение иммуноглобулинов полиэтиленгликолем (5%). Препарат, полученный по этому способу содержит 55-60% IgG, 25-30% IgМ и 15-20% IgA он содержит высокие титры антител против ряда энтеробактерий (эшерихий, шигелл, сальмонелл) и ряда вирусов (в частности, ротавирусов). Недостатком способа является то, что он не позволяет получать препарат, свободный от примесей иммунологически неактивных белковых фракций, присутствие которых в препарате вызывает аллергизацию организма. Содержание иммунологически неактивных фракций достигает в нем 3-5%

Кроме того, способ предусматривает применение в технологии дорогостоящего реагента декстрансульфата.

Целью изобретения является получение иммуноглобулинового препарата, свободного от примесей балластных белков, упрощение технологии и снижение себестоимости.

Это достигается тем, что экстракцию осадка Б проводят в сорока-шестидесятикратном объеме 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Последующую обработку экстракта осадка Б проводят одним хлороформом без добавления декстрансульфата, что дает возможность снизить содержание иммунологически неактивных примесей до 0-1% Это происходит благодаря лучшему связыванию хлороформа с положительно заряженными группами на поверхности липопротеидов в разбавленном растворе и выпадению комплекса хлороформ + липопротеины в легко отделяемый осадок. Сорока-шестидесятикратный объем хлорида натрия является оптимальным, т. к. при снижении объема ниже 40 образующийся осадок полностью не отделяется от раствора, а увеличение выше 60 ведет к нерациональному расходу реагентов и увеличению времени технологического процесса. Исключение из технологического процесса декстрансульфата позволяет снизить себестоимость препарата.

П р и м е р. К 1 кг осадка Б добавляют 50 л 0,9%-ного раствора хлорида натрия при постоянном перемешивании. Объем экстракта 50 л, содержание белка 0,5%

К экстракту осадка Б добавляют 5 л хлороформа (10% по объему). Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч, затем центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 50 л, содержание белка 0,1%

К 50 л экстракта для концентрирования иммуноглобулинов добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля (м. м. 6 тыc.) до конечной концентрации 12% при постоянном перемешивании.

Осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300-400 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5 0,2.

Осадок иммуноглобулинов растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка около 5-6% рН 6,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей.

К раствору после центрифугирования добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора.

Специфическая активность (титр антител) полученного препарата не отличается от прототипа: к шигеллам 1:320; к сальмонеллам 1:640; к эшерихиям 1: 1280; к ротавирусу 1:128000.

Содержание иммунологически неактивных фракций, определяемых методом бумажного электрофореза, составляет 0-1% т.е. уменьшается по сравнению с прототипом в 3-5 раз.

Т. о. высокоочищенный от иммунологически неактивных фракций комплексный иммуноглобулиновый препарат получен экономически эффективным способом.

Себестоимость препарата по сравнению с прототипом снижена на 25%