солевая основа питательной среды для культивирования микобактерий туберкулеза

Формула изобретения

СОЛЕВАЯ ОСНОВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА, содержащая калий однозамещенный фосфорнокислый, магний сернокислый, натрий однозамещенный линоннокислый, аммоний однозамещенный лимоннокислый, натрий однозамещенный глютаминовокислый, железоаммиачные квасцы, глицерин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит пируват натрия при следующем соотношении компонентов, г:

Калий однозамещенный фосфорнокислый 60,0 60,1

Магний сернокислый 1,5 1,6

Натрий однозамещенный линоннокислый 3,0 3,1

Железоаммиачные квасцы 0,15 0,18

Аммоний однозамещенный лимоннокислый 15,0 15,2

Натрий однозамещенный глютаминовокислый 30,0 30,1

Пируват натрия 14,0 15,0

Глицерин 60 мл

Дистиллированная вода До 1000 мл

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии и касается питательных сред для культивирования микобактерий туберкулеза.

Для выращивания первичных культур микобактерий туберкулеза используют яичные среды, состоящие из яичной массы и солевой основы. Лучшие результаты культивирования бычьего и человеческого видов микобактерий туберкулеза получены при использовании сред со следующим составом солевой основы:

среда Левенштейна-Йенсена калий однозамещенный фосфорнокислый, магний сернокислый, магний лимоннокислый, аспарагин, глицерин, дистиллированная вода [1]

среда Мордовского калий однозамещенный фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, гликоколл, глицерин, дистиллированная вода;

среда Финн-2 магний сернокислый, натрий лимоннокислый, квасцы железоаммиачные, калий однозамещенный фосфорнокислый, аммоний однозамещенный лимоннокислый, натрий однозамещенный глютаминовокислый, глицерин, дистиллированная вода [2]

Предлагается концентрированная солевая основа питательной среды для культивирования микобактерий туберкулеза, содержащая магний сернокислый, калий однозамещенный фосфорнокислый, натрий однозамещенный лимоннокислый, железоамиачные квасцы, аммоний однозамещенный лимоннокислый, натрий однозамещенный глютаминовокислый, глицерин и дистиллированную воду и дополнительно пируват натрия при следующем соотношении компонентов, г: Магний сернокислый 1,5-1,6 Натрий однозамещенный лимоннокислый 3,0-3,1 Квасцы железоаммиачные 0,15-0,18 Калий однозамещенный фосфорнокислый 60,0-60,1 Аммоний однозаме- щенный лимоннокислый 15,0-15,2 Натрий однозамещенный глютаминовокислый 30,0-30,1 Пируват натрия 14,0-15,0 Глицерин 60,0 мл Дистиллированная вода до 1000 мл

П р и м е р 1. В химически чистую стерильную колбу емкостью 2 л наливают 300,0 мл дистиллированной воды, которую подогревают на водяной бане до 75-85^оС. В ней в указанном порядке растворяют следующие компоненты, г: магний сернокислый 1,5, натрий однозамещенный лимоннокислый 3,0, квасцы железоаммиачные 0,15, калий однозамещенный фосфорнокислый 60,0, аммоний однозамещенный лимоннокислый 15,0, натрий однозамещенный глютаминовокислый 30,0, пируват натрия 14,0, глицерин 60,0 мл. Каждый компонент добавляют в жидкость после того, как растворяется предыдущий. После внесения всех компонентов общий объем доводят стерильной дистиллированной водой до 1000,0 мл. рН основания не коррегируют. Раствор автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин. После стерилизации рН основания 6,3-6,5. Солевую основу фильтруют через стерильную марлю и разливают по 100,0 мл в стерильную посуду, герметически укупоривают, хранят при температуре от 0^оС до + 25^оС в течение 3-5 лет. Перед использованием среды солевую основу разводят дистиллированной водой в соотношении 1:2 и соединяют с яичной массой. Яичную массу предварительно гомогенизируют, добавляют 10,0 мл малахитовой зелени в виде 2%-ного спиртового раствора. Среду фильтруют через стерильный марлевый фильтр, вводят раствор пенициллина из расчета 0,5 мл на 100,0 мл среды (100 ед. пенициллина на 1,0 мл среды), размешивают и разливают по 3-5 мл в стерильные пробирки. Коагулируют в скошенном положении при 85^оС в течение 25 мин в аппарате для свертывания сыворотки.

П р и м е р 2. Лабораторные и свежевыделенные штаммы бычьего и человеческого видов микобактерий туберкулеза высевают на средах Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и предлагаемой среды (по 5 пробирок). Оптическая плотность засеваемой культуры 0,1-0,2. Объем засеваемой суспензии 0,1 мл.

Результаты представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, среда с предлагаемой солевой основой обеспечивает более обильный рост у свежевыделенных штаммов микобактерий.

П р и м е р 3. Питательную среду готовят как в примере 1. Проводят посев 2560 образцов патологического материала от людей (мокрота, моча, смывы бронхов) по среду Левенштейна-Йенсена, среду Финн-2, предлагаемую среду (по 2 пробирки), подсчитывают количество контаминированных посевов, принимая каждые 2 пробирки на 1 посев.

Результаты представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, количество контаминированных посевов на предлагаемой среде в 3 раза меньше, чем на средах Левенштейна-Йенсена и Финн-2.

П р и м е р 4. Среду готовят, как в примере 1. Проводят посев 2560 образцов патологического материала от людей и животных (мокрота, моча, смывы бронхов, инфицированные ткани) на среду Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и предлагаемую среду (по 2 пробирки). Начиная с 3 недель еженедельно просматривают посевы, отмечая начало роста.

Результаты представлены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, на предлагаемой среде выросло дополнительно к средам Левенштейна-Йенсена и Финн-2 еще 6 штаммов, которые идентифицированы преимущественно как M.bovio (5 штаммов). Из 275 штаммов: 271 штамм M.tuberculosis, 4 штамма M. bovis. Следовательно, предлагаемая среда не только обеспечивает рост микобактерий человеческого вида, но и стимулирует рост микобактерий бычьего вида, обладающий малой жизнеспособностью и энергией роста при выделении из патологического материала.