соли 2-морфолино-5-фенил-6н-1,3,4-тиадиазина и 4,7-дигидро- 6-нитро-7-оксо-[1,2,4]-триазоло [5,1-с] [1,2,4]-триазинов, обладающие бактерицидной активностью в отношении возбудителя микоплазмоза

Формула изобретения

Соли 2-морфолино-5-фенил-6Н- 1,3,4-тиадиазина и 4,7-дигидро-6-нитро-7-оксо- [1,2,4]-тиазоло[5,1-с][1,2,4] -триазинов общей формулы



где I R H,

II R -SCH₃,

обладающие бактерицидной активностью в отношении возбудителя микоплазмоза.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области новых биологически активных соединений. Заявляемые соединения соль 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 6-нитро-4,7-дигид- ро-7-оксо[1,2,4] триазоло[5,1-c] [1,2,4]триазина (1) и соль 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 2-метилтио-6-нитро-4,7- дигидро-7-оксо[1,2,4]триазоло [5,1-c] [1,2,4]триазина (II) общей формулы

где I: R=H

II: R= -SCH₃ при изучении антибактериального действия показали высокую бактериостатическую и бактерицидную активность в отношении возбудителя микроплазмоза.

Известны близкие по структуре аналоги: в классе 1,3,4-тиадиазинов: 6-гидроксилинотиадиазин-2-тионы, обладающие антимикробной активностью [1] в классе [1,2,4] триазоло [5,1-c] [1,2,4]триазинов: морфолиниевая соль 2-метилтио-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазина, обладающая противовирусной активностью [3] Бактерицидной активности в отношении возбудителя микоплазмоза у представителей этих классов не выявлено.

Целью изобретения является создание нового антибактериального препарата, обладающего высокой бактерицидной активностью против таких устойчивых бактерий, какими являются микоплазмы.

Поставленная цель достигается синтезом солей 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и, соответственно, 6-нитро-4,7- дигидро-7-оксо[1,2,4]триазоло[5,1-c][1,2,4] триазина (I); 2-метилтио-6-нитро-4,7-дигидро-7-оксо[1,2,4] триазоло [5,1-c][1,2,4]триазина (II). Для данных препаратов выявлена высокая бактериостатическая и бактерицидная активность в отношении возбудителя микоплазмоза. Бактериостатическим и бактерицидным действием соединения I и II обладают в дозах 7,8 мкг/мл и 15,6 мкг/мл соответственно. Соединения I и II получены взаимодействием эквимолярных количеств 2-морфолино-5-фенил-1,3,4-тиадиазина основания и соответствующих 1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазинов [2,3]



При изучении антибактериального действия 10 мг вещества растворяли в 0,5 мл ДМСО, добавляли к 10 мл микоплазменного бульона и делали двукратные последовательные разведения. Во все пробирки с различными дозами соединений вносили 0,5 мл трехсуточной бульонной культуры микоплазм и инкубировали при 37^оС в течение 72-120 ч. Контролем служили пробирки с высевом микоплазм без исследуемых соединений. С момента появления роста микоплазм в контроле проводили учет роста микоплазм в пробирках с исследуемыми веществами. За бактериостатическую дозу вещества принимали наименьшую концентрацию соединения, подавляющую рост микоплазм. При определении бактерицидного действия из пробирки, с отсутствием видимого роста микоплазм, делали высевы на специальную плотную питательную среду. За бактерицидную дозу принимали минимальную концентрацию вещества, при которой не происходило роста микоплазм на агаре. Все эксперименты повторяли трижды. В результате проведенных исследований установлено, что исследованные соединения (I и II) обладают высокой бактериостатической (7,8 мкг/мл) и бактерицидной (15,6 мкг/мл) активностью в отношении возбудителя микоплазмоза. В практическом плане такие соединения могут представлять интерес с целью деконтаминации вакцинного сырья для профилактики микоплазмоза.

П р и м е р 1. Соль 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 2-метилтио-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро[1,2,4] триазоло[5,1-c][1,2,4]триазина.

1. 2-N-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазин получен нагреванием на водяной бане в течение 15 мин 2 г (0,01 моль) -бромацетофенона и 1,61 г (0,01 моль) морфолинида тиокарбизиновой кислоты гидрохлорида [4] в 30 мл этанола. Выпавший после охлаждения осадок фильтруют, растворяют в 15 мл водного этанола (1: 1) и нейтрализуют разбавленным раствором аммиака до pH 8-9. Продукт фильтруют, кристаллизуют из водного этанола (1:1). Выход 1,6 г (62%) Т_пл. 117-118^оС. Найдено, С 59,7; Н 5,8; N 16,1; S 12,1 C₁₃H₁₅N₃SO.

Вычислено, C 59,7; H 5,8; N 16,1; S 12,3.

Строение соединения подтверждено ПМР-спектром, в котором наблюдается сигнал двух протонов метиленовой группы тиадиазинового цикла в области 4,4 м. д. дублет протонов морфолинового кольца (СН₂)₂N 3,8 м.д. и (СН₂)₂O 3,9 м. д. а также мультиплет ароматических протонов фенильного кольца в области 7,45-8,1 м. д. ПМР-спектр записан на приборе Перкин-Элмер-12В (60 МГц) в ДМСО-С₆, внутренний стандарт ТМС.

2. 2-Метилтио-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-[1,2,4]триазоло[5,1-c] [1,2,4] триазин.

Растворяют 1,25 г (0,01 моль) 3-метилтио-5-амино-1,2,4-триазола при перемешивании при 25^оС в смеси 1,3 мл уксусной кислоты и 2 мл воды. Полученный раствор охлаждают до 0^оС и прикапывают раствор 0,7 г (0,01 моль) NaNO₂ в 2 мл воды. Температура реакционной массы 0-3^оС. Образующийся раствор соли диазония приливают к охлажденной до 10^оС смеси 1,1 мл (0,01 моль) этилового эфира нитроуксусной кислоты, 5 мл этанола и водного раствора 2 г Na₂CO₃. Перемешивают 3 ч при комнатной температуре. Образовавшийся осадок отфильтровывают, суспендируют в воде и подкисляют 40% H₂SO₄ до pH 1. Через 0,5 ч продукт отфильтровывают, промывают водой, сушат, кристаллизуют из этанола. Выход 1,28 г (60%) Т_пл. 230^оС.

Найдено, C 26,0; H 2,0; N 7,0; C₅H₄N₆SO₃

Вычислено, C 26,3; H 1,7; N 6,9.

3. Соль 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 2-метилтио-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-[1,2,4] триазоло [5,1-c] [1,2,4]три- азина. Растворяют в этаноле в мольном соотношении 1:1 2,6 г (0,01 моль) 2N-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 2,28 г (0,01 моль) 2-метилтио-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро- [1,2,4]-триазоло[5,1-c][1,2,4] триазина. Нагревают на водяной бане в течение 10-15 мин. Тотчас наблюдается выпадение в осадок продукта реакции. Продукт фильтруют, кристаллизуют из водного этанола (2:1). Выход 0,4 г (87% ). Сушат над Р₂О₅ в вакууме Т_пл. 179-180^оС.

Найдено, C 44,4; H 4,0; N 25,8; C₁₈H₁₉N₉S₂O₄.

Вычислено, C 44,2; H 3,9; N 25,8.

П р и м е р 2. Соль 2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-c][1,2,4]триа- зина.

Получают аналогично примеру 1 из 2-N-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазина и 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро[1,2,4]триазоло [5,1-c][1,2,4]триазина.

Выход 80% Т.пл. 196-198^оС

Найдено, С 46,1; Н 4,0; N 28,4; C₁₇H₁₇N₉SO₄.

Вычислено, C 46,0; H 3,9; N 28,7.