сложные эфиры органических кислот со спиртами 19-нор- стероидов или их соли щелочных металлов, проявляющие прогестомиметическую, антипрогестероновую и антиглюкокортикоидную активность

Формула изобретения

Сложные эфиры органических кислот со спиртами 19-нор-стероидов общей формулы I



где R₁ - метил;

G - фенил, замещенный в положении 4-диалкил-С₁ - С₄-аминогруппой, алкил-С₁ - С₄-тиогруппой или С₁ - С₄-ацилгруппой;

X - CO - A - Z-группа, где А - алифатический линейный двухвалентный радикал С₁ - С₆;

Z - COON или - SO₃H-группы,

или их соли щелочных металлов

-CH=CH-CH₃-CH=CH₂, -CCCl, -CC-CH₃, -CCH,

проявляющие прогестомиметическую, антипрогестероновую и антиглюкокортикоидную активность.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области стероидных соединений, в частности, касается сложных эфиров органических кислот со спиртами общей формулы I



(I) где R₁ метил или этил;

G фенил, замещенный в положении 4 радикалом, выбранным из: диалкил(С₁-С₄)амино, алкил(С₁-С₄)тио, ацил(С₁-С₄);

X означает СO-А-Z группу, где А алифатический линейный двухвалентный радикал С₁-С₆, Z означает -СООН или SO₃H-группу, которая может находиться в виде соли щелочного металла;

Y означает -ССН; -СН=СН₂; -СН=СН-СН₃; -СС₁; -СС-СН₃волнистая черта в положении 13 означает, что R₁ может находиться в - или -положении.

Соединения общей формулы (I) обладают интересными фармакологическими свойствами, Изучение этих соединений на гармонных рецепторах позволило выявить прогестомиметическую ли антипрогестомиметическую активность, а также андрогенную или антиандрогенную активность. Продукты, полученные по предлагаемому способу могут также проявлять антиглюкокортикоидные, антипролиферационные, антиэстрогенные и/или эстрогенные свойства.

Таким образом, эти продукты можно использовать в качестве лекарств при борьбе с побочными явлениями глюкокортикоидов, они позволяют также бороться против расстройств, вызванных повышенной секрецией глюкокортикоидов и, в частности, против старческих симптомов, в частности против повышенного давления, глаукомы, атеросклероза, остеопороза, тучности, а также против депрессии иммунитета и бессонницы.

Продукты, которые обладают антипрогестомиметическими свойствами, могут употребляться для приготовления оригинальных контрацепторов или в качестве средств прерыва беременности.

Продукты согласно изобретению могут также использоваться в качестве индуктора менструаций у женщины и вообще у всех животных самок (теплокровных животных). Тогда эти продукты вводятся во время периода, когда прогестерон играет главную физиологическую роль, т.е. в частности, во время лютеальной фазы цикла, во время имплантации зародыша и в течение беременности.

Новые соединения не проявляют токсичности при действии на человека. Эти соединения, обладающие антипрогестомиметическими свойствами, могут также употребляться против гормональных расстройств и, кроме того, они могут представлять интерес при лечении гормонозависящих опухолей. Их действие на гиповизарные выделения делает возможным применение продуктов при менопаузе. Эти продукты могут также употребляться при синхронизации зструса у животных, в частности рогатого скота и животных овечьей породы. Эти продукты могут также употребляться для регулирования плодовитости домашних животных, например собак или кошек. Продукты, которые проявляют прогестомиметические свойства, могут употребляться при лечении аменорей, дисменорей и лютеальной недостаточности. Продукты, которые проявляют антиандрогенные свойства, могут употребляться при лечении гипертрофий и рака простаты, гипервоспроизведения, анемии, гирсутизма и акне. Они могут также употребляться для контрасепции у мужчины. Наконец, продукты, полученные по предлагаемому способу, которые проявляют антипролиферативные, антиэстрогенные и/или эстрогенные свойства, могут быть применяемы при лечении гормонозависящих карцином, например грудных карцином и их метастаз. Эти свойства делают продукты также применяемыми при лечении доброкачественных наростов груди.

Соединения формулы (I) могут быть получены несколькими путями. Один из них заключается в том, что соединение формулы II



(II) где R₁ и G имеют указанное значение, при необходимости защищенные, подвергают в нейтральном растворителе и в присутствии основания

а) либо действию соединения формулы III

^{O = = O}

(III) с получением после возможного снятия защиты реакционных функций и, по желанию, превращения в соль карбоксильной функции, продукта общей формулы (I), отвечающей соответственно формуле (I_A)



(I_A) где Z, G, A и Z имеют указанное значение, с последующим при необходимости гидрогенированием тройных связей, или гидролизом щелочной соли карбоксильной группы или омылением карбоксильной группы,

б) либо действию кислоты формулы (III₁)

НООС-A-V (III₁) или действию функционального производного этой кислоты, где V группы -СООН, -СООR₅, где R₅ радикал алкил с 1 6 атомами углерода, или SH, с получением после снятия, если нужно, защитных групп продукта формулы (IV_A)



(IV_A) и, в случае, когда V свободная карбокси группа, после возможного превращения в соль, с получением продукта формулы (I_А) и, в случае, когда V группа -СООR₅, с получением продукта формулы (IV_В)



(IV_B) который гидролизуют или превращают в соль для получения продукта формулы (I_A), и, в случае, когда V группа -SН, с получением продукта формулы (IV_C)



(IV_C) который окисляют и, по желанию, превращают в соль для получения продуктов общей формулы (I), отвечающей соответственно формуле (I_A2)



(I_A2) где Z₂ могущая быть превращенной в соль группа сульфо, а G, A и R₁ имеют указанное значение.

Новые продукты могут употреблятьcя для приготовления фармацевтических составов, содержащих в качестве действующего начала, по меньшей мере, один из данных продуктов. Эти продукты вводятся пищеварительным трактом, пaрентеральным путем или тоническим способом. Они могут выпускаться в виде таблеток, драже, желул, гранул, свечей, овул, препаратов для инъекции, помад, кремов, гелей, которые приготовляются обычными способами. Действующее начало или действующие начала могут быть смешаны с экспициентами, обычно употребляемыми в этих фармацевтических составах, например тальк, гуммиарабик, лактоза, крахмал, стеарат магния, масло какао, водные или неводные носители, животные или растительные жиры, парафиновые производные, гликоли, различные смачиватели, дисперганты. эмульгаторы, консерванты. Кроме того, продукты общей формулы (I), где Z превращенная в соль группа карбокси или превращенная в соль группа сульфо, и особенно продукты формулы(I), где Z"-COONa или -SO₃Na, очень растворимы в воде, среди этих продуктов можно привести, без ограничивающего характера, растворимость продукта примера 18, которая выше, чем 25 г на 100 мл воды, это позволяет их употребление в виде годных для питья, носа или уха растворов, глазных капель, аэрозолей, внутримышечных или внутривенных растворов для инъекции или капсул.

Примеры и фармакологическое исследование иллюстрируют изобретение, но не ограничивают его.

П р и м е р 1. Кислый сукцинат (Z)-3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-17-бета-гидрокси-3-оксо-эстра-4,9-дие н-17

В колбе, снабженной магнитной мешалкой, растворяют 900 мг 11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-бета-гидрокси-17-альфа-[(Z)-3-гидрокси- 1-пропенилэстра-4,9-диен-3-она в 9 мл хлороформа, а затем прибавляют 304 мг ангидрида янтарной кислоты и 1,45 мл триэтиламина.Таким образом, образованную смесь перемешивают 15 ч при комнатной температуре, а затем упаривают досуха, 1,443 г полученного остатка очищают хроматографически на колонке из двуокиси кремния (элюант этиловый эфир уксусной кислоты 90-циклогексан 10) уксусная кислота 3%). После перекристаллизации в смеси метанол-вода (60-40) получают 695 мг целевого продукта, в виде желтых кристаллов.

Т_пл. 145^оС.

Хроматография в тонком слое: R_f 0,60.

(Основа: КС 19 Ватман^R: элюант метанол-водный раствор ацетата аммония (0,05 М) (80-20)).

П р и м е р 2. Сукцинат натрия и (Z)-3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-бета-гид- рокси-3-оксо-эстра-4,9- диен-17-альфа-ил]-2-пропенила.

В колбе, снабженной магнитной мешалкой, растворяют 93 мг бикарбоната натрия в 20 мл воды, и раствор 639 мг полученного в примере 1 продукта в 20 мл этанола прибавляют затем капля по капле. Этанол удаляют азеотропно и таким образом полученный водный раствор фильтруют на миллипорной мембране ^R (0,45 мкм), а затем лиофилизуют. Собирают 654 мг целевого продукта в виде порошка цвета крем ()_D+101^о 2^о ( к 1% в воде).

Хроматография в тонком слое: R_f 0,62.

(Основа: КС 18 Ватман ^R: элюант метанол водный раствор ацетата аммония (0,05 М) (80-20)).

П р и м е р 3. Кислый сукцинат 3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-17-бета-гидро- кси-3-оксо-эстра-4,9- диент-17-альфа-ил]-2-пропенила.

В колбе, снабженной магнитной мешалкой, растворяют 900 мг 11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-бета-гидрокси-17-альфа-3-гидрокси-1- пропинилэстра-4,9-диен-3-она в 9 мл хлороформа, а затем прибавляют 303 мг ангидрида янтарной кислоты и 1,4 мл триэтиламина, и полученную смесь перемешивают 17 ч при комнатной температуре. После упаривания досуха 1,685 г сырого продукта очищают хроматографией на колонке Бондапак С18^R(элюируя смесью метанол водный раствор (0,05 М) ацетата аммония (60-40)). Получают 1,104 г целевого продукта, R_f 0,63 (хроматография в тонком слое, основа: КС 18 Ватман ^R, элюант метанол 0,05 молярный водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 4. Сукцинат натрия и 3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-17-бета-гидрокси-3-оксо-эстра-4,9-диент- 17-альфа--ил]-2-пропинила.

Действуют как в примере 2 с 141 мг бикарбоната натрия в 29 мл воды и 964 мг приготовленного в примере 3 продукта в 29 мл этанола, получают 935 мг целевого продукта. ()_D +55^о 1,5^о (к 1% в воде).

R_f 0,63 (хроматография в тонком слое, основание: КС 18 Ватман ^R, элюант: метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 5. Кислый сукцинат 11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-3-оксо-17-альфа-1-пропинилэстра-4,9-диент- 17-бета-ила.

Реакционную среду готовят введением 2,15 г ангидрида янтарной кислоты, 2,2 мл триэтиламина и 215 мг 4-(диметиламино) пиридина в раствор 2,15 г 11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-бета-гидрокси-17-альфа-1-пропинилэстра- 4,9-3-она в 22 мл хлороформа, а затем нагревают с рефлюксом 42 ч и прибавляют 430 мг 4-(диметиламино) пиридина и 4,4 мл триэтиламина. Нагревание с рефлюксом продолжается 26 ч и тогда раствор выливается в смесь вода-лед. После декантации органического слоя, этот последний промывают водой, а затем сушат и хлороформ отгоняют для получения сухого экстракта коричневого цвета. Водный слой подкисляют 0,5 н. водным раствором соляной кислоты, а затем нейтрализуют прибавкой ацетата натрия. Заново экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты и новый органический слой промывают водой, сушат и после отгонки растворителя получают остаток, который соединяют с предыдущим. Продукт очищают на колонке двуокиси кремния, элюируя смесью эфир этиловый эфир уксусной кислоты (9-1) c 3% уксусной кислоты и перекристаллизовывают два раза в смеси эфир-хлористый метилен. Получают 1,435 г целевого продукта.

Т_пл. 165^оС.

()_D +97^о (к 0,8% в СНСl₃).

R_f 0,40 (хроматография в тонком слое, основание: SiO₂, элюант:эфир 9 этиловый эфир уксусной кислоты 1 уксусная кислота 3%).

П р и м е р 6. Сукцинат натрия 11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-3-оксо-17-альфа-1-пропинилэстра-4,9- диент-17-бета-ила.

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, вводят 3 г приготовленного в примере 5 продукта и 94 мг этанола и наливают затем раствор 433 мг бикарбоната натрия в 94 мл воды. После 30 мин перемешивания при комнатной температуре этанол удаляется азеотропически и остающийся раствор фильтруется на миллипорной мембране^R (0,45 мкм) и лиофилизируется. Получают 2,88 г целевого продукта.

()_D +48,5^о 1,5^о (к 1% в воде).

R_f 0,54 (хроматография на тонком слое, основа: КС 18 Ватман ^R, элюант метанол водный раствор ацетата аммония (0,05 ммоль) (80-20)).

П р и м е р 7. Кислый сукцинат 11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-3-оксо-17-альфа- [(Z)-1-пропенил]эстра- 4,9-диент-17-бета-ила.

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, вводят 2,462 г полученного в примере 5 продукта и прибавляют 15 мл этилового эфира уксусной кислоты, содержащей 2% пиридина, 15 мл воды и 50 мг 10%-ного гидроксида палладия на сульфате бария. После гидрогенизации при перемешивании в течение 5 ч 30 мин реакционную среду фильтруют, пиридин отгоняют и остаточный раствор упаривают досуха. Таким образом полученный остаток очищают двумя последовательными хроматографиями на колонке Бондапак С 18, элюируя смесью метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (65-35), получают 576 мг целевого продукта, R_f 0,50 (хроматография на тонком слое: основа:КС 18 Ватман ^R, элюант метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 8. Сукцинат натрия 11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-3-оксо-17-альфа- [(Z)-1-пропенил]эстра- 4,9-диент-17-бета-ила.

Действуют как в примере 2 с раствором 100 мг бикарбоната натрия в 21 мл воды и 665 мг приготовленного в примере 7 продукта в 21 мл этанола, получают 583 мг целевого продукта.

()_D +56,5^о 1,5^о (к 1% в воде).

R_f 0,50 (хроматография на тонком слое, основа КС 19 Ватман ^R, элюант: метанол 0,05 молярный водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 9. Кислый сукцинат 21-хлор-11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -3-оксо-19-нор-17-альфа-прегна- 4,9-диент-20-ин-17-бета-ила.

В колбе, снабженной магнитной мешалкой, растворяют 1,854 г 21-хлор-11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-бета-гидро- кси-17-альфа-прегна- 4,9-диен-20-ин-3-она в 18,5 мл хлороформа, а затем прибавляют 2,497 г ангидрида янтарной кислоты, 7 мл триэтиламина и 0,936 г 4-(диметиламино)пиридина. Таким образом, образованную смесь нагревают с рефлюксом 42 ч. Затем выливают реакционную среду в 31 мл 2 н. раствора соляной кислоты, а затем доводят рН до 6-7 прибавлением ацетата натрия. Отделяют хлормуравьиный слой, а затем экстрагируют заново два раза хлороформом. Собранные экстракты соединяют, промывают водой, сушат на сульфате натрия, а затем концентрируют под уменьшенным давлением, и получают 3,85 г коричневого остатка, который очищают хроматографией на колонке Кизельгеля, элюируя сперва этиловым эфиром, а затем смесью этиловый эфир с 3% уксусной кислоты. Получают 1,8 г сырого продукта, которые перекристаллизуют в смеси хлористый метилен этиловый эфир, а затем в смеси хлористый метилен этиловый эфир. Получают 1,21 г целевого продукта.

Т _пл. 165^оС.

()_D +63^о 1,5^о (к 0,90 в СНСl₃).

Хроматография на тонком слое: R_f0,53.

(Основа: КС 18 Ватман ^R; элюант:метанол 0,05 молярный водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 10. Сукцинат натрия 21-хлор-11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -3-оксо-19-нор-17-альфа-прегна-4,9- диен-20-ин-17-бета-ила.

В колбе, снабженной магнитной мешалкой, смешивают 817 мг полученного в примере 9 продукта и 25 мл этанола, затем наливают капля по капле раствор 113 мг бикарбоната натрия в 25 мл воды и реакционную среду перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Этанол затем отгоняют азеотропически, остающийся раствор фильтруют на мембране миллипор ^R (0,45 мкм), а затем лиофилизируется. Получают 813 мг лиофилизата, которые отвечают целевому продукту.

()_D +16,5^о 1^о (к 1% в Н₂О).

R_f 0,54 (хроматография на тонком слое; основа: КС 18 Ватман ^R, элюант: метанол 0,05 молярный водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 11. Кислый сукцинат 11-бета-[4-(метилтио)фенил]-3-оксо-17-альфа-1-пропинилэстра-4.9-диен- 17-бета-или.

П р и м е р 11. Кислый сукцинат 11-бета-[4-(метилтио)фенил]-3-оксо-17-альфа-1-пропинилэстра-4.9-диен- 17-бета-ила.

В колбе, снабженной магнитной мешалкой и холодильником, 1,5 г 17-бета-гидрокси-11-бета-[4-(метилтио)фенил] -17-альфа-1-пропинилэстра- 4,9-диен-3-она, 15,3 мл хлороформа смешивают, а затем прибавляют 1,86 г ангидрида янтарной кислоты, 6 мл триэтиламина и 794 мг 4-(диметиламино)пиридина и все это нагревают с рефлюксом 94 ч, выливают в 1 н. водный раствор соляной кислоты и экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой промывают водой, сушат на сульфате натрия и растворитель удаляют под уменьшенным давлением при 40^оС. Получают 2,26 г сырого продукта, которые хроматографируют на колонке двуокиси кремния Кизельгель 60Н ^R элюант:хлористый метилен 97,5 метанол 2,5 уксусная кислота 1%). После перекристаллизации в смеси хлористый метилен изопропиловый эфир, образуются 826 мг кристаллов целевого продукта.

Т _пл. 158^оС.

R_f 0,61 (хроматография на тонком слое, основа КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь этанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (70-30)).

П р и м е р 12. Cукцинат натрия 11-бета-[4-(метилтио)фенил]-3-оксо-17-альфа-1-пропинилэстра-4.9-диен- 17-бета-ила.

Действуя как в примере 2 с 108 мг бикарбоната натрия в 21,5 мл воды и 719 мг полученного в примере 11 продукта в 21,5 мл этанола, получают 720 мг лиофилизата, соответствующего целевому продукту.

( )_D+74,5^o 1,5^о (к 1% в воде).

R_f 0,61 (хроматография на тонком слое, основа КС 18 Ватман ^R, элюант: этанол 0,05 молярный водный раствор ацетата аммония (70-30)).

П р и м е р 13. 3-[3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-17-бета-гидроокси-3-оксоэ- стра-4,9- диент-17-альфа-ил]-2-пропинилоксикарбонил]бензолсульфокислота.

Растворяют 1 г 11-бета-[4-(диметиламино)фенил] -17-альфа-3-гидрокси- 17-альфа-3-гидрокси-1-пропинилэстра-4,9-диен-3-она в 10 мл хлороформа, прибавляют 1,5 г комплекса пиридин-3-хлорсульфонил бензойная кислота, а затем 0,5 г предыдущего комплекса и продолжают нагревание с рефлюксом 30 мин. После охлаждения и выпаривания растворителя остаток растворяют в воде, затем перегоняют раствор в присутствии толуола. Сухой экстракт растворяют в хлороформе и фильтруют на колонке двуокиси кремния, элюируют хлороформом, содержащим 5% этанола, а затем хлороформом с 10% этанола. Получают кислую фpакцию, из которой выделяют 1,7 г целевого продукта в виде светло-желтой смолы.

П р и м е р 14. 3-[3-[11-бета-[4-(диметиламино)фенил]-11-бета-гидрокси-3-оксоэст- ра- 4,9-диен-17-альфа-ил]-2-пропинилоксикарбонил]бензолсульфонат натрия.

25 мл этанолового раствора ацетата натрия (0,24 ммоль) прибавляют к кислой фракции, полученный в предыдущем примере, и полученный раствор упаривают досуха. Сухой экстракт поглощают метанолом с 33% воды и хроматографируют на колонке ЛИХРОСОРБ КС 18^R (элюант метанол вода (3-6), метанол вода (1-1), а затем метанол вода (6-3)). Элюанты собирают, фильтруют, упаривают досуха и полученный порошок сушат с получением 1,35 г целевого продукта.

( )_D +107^о (к 0,2% в этаноле).

Микроанализ:

Вычислено, C 66,34; H 5,87; N 2,25; S 4,92.

Найдено, C 66,6; H 6,30; N 2,50; S 4,7.

П р и м е р 15. Кислый сукцинат 11-бета-4-(ацетилфенил)-3-оксо-17-альфа-1-пропи- нилэстра-4,9-диен-17-бета-ила.

1,8 г 11-бета-4-(ацетилфенил)-17-бета-гидрокси-17-альфа-(1-пропинил)эстра-4,9- диен-3-она растворяют в 18 мл хлороформа, а затем прибавляют 2,54 г ангидрида янтарной кислоты, 7 мл триэтиламина и 0,95 г 4-диметиламинопиридина, раствор нагревают с рефлюксом и оставляют при этой температуре 70 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную среду выливают в 2 н. раствор соляной кислоты, экстрагируют хлороформом, органический слой промывают водой, сушат на сульфате натрия и упаривают досуха под уменьшенным давлением; полученный сырой продукт хроматографируют на колонке двуокиси кремния Кизельгель 60^R, элюируя сперва с этиловым эфиром, а затем с этиловым эфиром с 3% уксусной кислоты. Получают 1,37 г сырого продукта, которые очищают кристаллизацией в смеси хлористый метилен этиловый эфир, а затем перекристаллизацией в такой же смеси. Получают 1,027 г целевого продукта.

Т_пл. 168^оС.

R_f 0,32 (хроматография на тонком слое; основа: SiO₂F₂₅₄ Мерк 60¹элюант смесь этиловый эфир этиловый эфир уксусной кислоты с 3% уксусной кислоты (90-10)).

П р и м е р 16. Сукцинат натрия 11-бета-(4-ацетилфенил)-3-оксо-17-альфа-(1-пропи- нил)эстра-4,9-диен- 17-бета-ила.

0,874 г полученного в примере 15 продукта растворяют в этаноле (30 мл), этот раствор капля по капле прибавляют к раствору 0,132 г бикарбоната натрия в 30 мл воды, этанол отгоняют азеотропически, полученный водный раствор фильтруют на мембране миллипор ^R (0,45 мкм), а затем лиофилизируют. Получают 0,908 г целевой соли натрия.

()_D + 67^о 1,5 (к 1% в воде).

R_f 0,73 (хроматография на тонком слое; основа: КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 17. Кислый сукцинат 11-бета-[4-(N-метилизопропиламино)фенил] -3-оксо- -17-альфа-1-пропинилэстра- 4,9-диен-17-бета-ила

Раствор, содержащий 2,159 г 11-бета-[4-(N-метилизопропиламино)фенил]-17-бета-гидрокси-17-альфа-1- пропинилэстра-4,9-диен-3-она, 22 мл триэтиламина, 2,52 г ангидрида янтарной кислоты, 8,1 мл триэтиламина и 1,07 г 4-диметиламинопиридина нагревают с рефлюксом и оставляют при этой температуре 24 ч. Прибавляют 0,339 г ангидрида янтарной кислоты и продолжают нагревание с рефлюком 74 ч. После охлаждения реакционную среду выливают в 36 мл 2н. раствора соляной кислоты и рН доводят до 6 прибавлением ацетата натрия, после декантации органического слоя водный слой заново экстрагируется хлороформом. Соединенные хлороформовые слои промывают водой, сушат на сульфате натрия и упаривают досуха в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на колонке в 300 г двуокиси кремния Кизельгель 60^R, элюируя сперва этиловым эфиром, а затем этиловым эфиром с 3% уксусной кислоты. Получают 1,493 г сырого продукта, которые перекристаллизуют в смеси хлористый метилен этиловый эфир. Таким образом получают 1,082 г кислого сукцината.

Т_пл. 155^оС.

R_f 0,47 (хроматография на тонком слое; основа:КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 18. Сукцинат натрия 11-бета-[4-(N-метилизопропиламино)фенил] -3-оксо- -17-альфа-1-пропилэстра- 4,9-диен-17-бета-ила.

Действуют как в примере 16 с 0,128 г бикарбоната натрия в 30 мл воды и 0,933 г полученного в примере 11 продукта в 30 мл этанола, получают 0,915 г целевой соли натрия.

()_D +40,5^о 1,5^о (к 1% в воде).

R_f 0,47 (хроматография на тонком слое, основа КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол 0,05 М водный раствор ацетата аммония (80-20)).

П р и м е р 19. Фармацевтический состав.

Были приготовлены таблетки, отвечающие следующей формуле: продукт примера 10 50 мг и эксципиент (тальк, крахмал, стеарат магния) в достаточном количестве для одной законченной таблетки 120 мг.

П р и м е р 20. Были приготовлены глазные капли, отвечающие слудующей формуле: продукт примера 10 2 г и эксципиент (дистиллированная вода, хлористый натрий, метилцеллюлоза, борат натрия) 100 мл.

Фармакологические исследования.

1). Измерение относительного аффинитета связи по отношению к рецепторам стероидных гормонов.

Гликокортикоидный рецептор зобной железы крысы.

У крыс самцов массой 160-200 г удаляют надпочечники. Через 4-8 дней после этого удаления животных умерщвляют, зобные железы изымают и гомогенизируют при 0^оС при помощи Поттера тефлон-стекло в буферном растворе (TSD) Трис 10 мМ. 0,25 М сахароза, 2 мМ дитиотретол, НСl рН 7,4 (1 г ткани на 10 мл TSD). Продукт гомогенизирования затем ультрацентрифугируют (105 000 g х 90 мн) при 0^оС. Аликвотные части таким образом полученного надосадочного слоя, "цитозол", инкубируют при 0^оС 4 ч и 24 ч с постоянной концентрацией (Т 2,5 нМ) насыщенного тритием дексаметазона в присутствии увеличивающихся концентраций (0 2,500 нМ) холодного дексаметазона или холодного изучаемого продукта. Концентрация связанного насыщенного тритием дексаметазона (B) измеряется затем в каждом продукте инкубации при помощи техники поглощения уголь-декстран.

Рецептор прогестерона матки кролика.

Не достигшим половой зрелости крольчихам массой около 1 кг вводят накожным путем 25 мкг эстрадиола. Через 5 дней после этой обработки животных умерщвляют, матки вынимают, взвешивают и гомогенизируют при 0^оС при помощи Поттер тефлон-стекло в буферном растворе (TS) Трис 10 мМ, сахароза 0,25 М, НСl, рН 7,4 (1 г ткани на 50 мл TS). Продукт гомогенизирования затем ультрацентрифугируют (105 000 g х 90 нм) при 0^оС. Аликвотные части таким образом полученного надосадочного слоя, "цитазол", инкубируют при 0^оС 2 ч и 24 ч при постоянной концентрации (Т 5 нМ) насыщенного тритием R 5020 (17,21-диметил-19-нор-4,9-прегнадиен-3,20-диона), сильного прогестомиметического продукта, с большим аффинитетом по отношению к прогестерону, в присутствии увеличивающихся концентраций (0-2500 нМ) холодного прогестерона, или исследуемого продукта.

Концентрация связанного, насыщенного тритием R 5020 (В), измеряется в каждом продукте инкубации при помощи техники поглощения уголь-декстран.

Андрогенный рецептор простаты крысы.

Самцов крыс массой 160-200 г кастрируют, через 24 ч после кастрации животных умерщвляют, простаты вынимают, взвешивают и гомогенизируют при 0^оС при помощи Поттер тефлон-стекло в буферном растворе (TSD РМ) Трис 10 мМ, сахароза 0,25 М, фенилметансульфонилфлуорид 0,1 нМ, молибдат 20 мМ, дитиотрейтол 2 мМ, НСl, рН 7,4 (1 г ткани на 5 мл TSD РМ), Продукт гомогенизирования затем ультрацентрифугируют (105 000 g х 60 нм) при 0^оС. Аликвотные части таким образом полученного надосадочного слоя "цитозол", инкубируют с постоянной концентрацией (0-1 000 нМ) холодного тестостерона или изучаемого продукта. После 1/2 ч и 24 ч инкубации концентрация связанного, насыщенного тритием тестостерона (В) измеряется в каждом продукте инкубации при помощи техники поглощения с уголь-декстран.

Вычисление относительного аффинитета связи.

Вычисление относительного аффинитета связи (ОАС) одинаково для всех рецепторов.

Чертят 2 следующие кривые: процентное отношение связанного насыщенного тритием гормона В/T по отношению к логарифму концентрации холодного гормона этанола и В/T по отношению к логарифму концентрации холодного изучаемого продукта.

Определяют прямую уравнения l₅₀= + 2.

процентное отношение связанного насыщенного тритием гормона для инкубации этого тритием насыщенного гормона при концентрации (Т). процентное отношение связанного насыщенного тритием гормона для инкубации этого тритием насыщенного гормона при концентрации (Т) в присутствии большого избытка холодного гормона (2500 10^-9 М). Пересечение прямой I₅₀ и кривых позволяет оценить концентрации холодного гормона этанола (СН) и холодного исследуемого продукта (СХ), которые ингибируют на 50% связь насыщенного тритием гормона на рецепторе.

Относительный аффинитет связи (ОАС) исследуемого продукта определяется уравнением OAC 100.

Полученные pезульаты приведены в табл.1.

Продукты примеров 12 и 10 проявляют хорошую антипрогестероновую активность.

2). Антиглюкокоритикоидная активность по отношению к дексаметазону.

Изучение "в пробирке".

Введение уридина в клетки зобной железы крысы.

Гликокортикоиды вызывают на уровне лимофидной ткани задержку введения нуклеоцидов. Измерение введения радиоактивного уридина в клетки зобной железы в присутствии изучаемого продукта позволяет оценить его гликокортикоидную активность. Этот метод основывается на известной технике. После удаления надпочечников зобную железу крысы (160-180 г) вынимают, разрезают тонкими ломтиками и медленно гомогенизируют при помощи гомогенизатора тефлон-стекло в растворе Ханкса. Полученную клеточную суспензию фильтруют на марле, а затем центрифугируют при 800 g х 10 мн. Затем проводят новое центрифугирование при 800 g х 10 мн. Таким образом полученный осадок снова суспендируют в питательной среде (М.Е.М.Жибко), и клеточную концентрацию доводят до около 20 10⁶ клеток на 1 мл. Аликвотные части в 250 мл инкубируют под карбогеном 3 ч при 37^оС с 5 10^-8 М дексаметазона в присутствии или в отсутствии увеличивающихся концентраций продукта (10^-8 М 10^-6 М). Прибавляют в каждый продукт инкубации 0,1 мкКи насыщенного тритием уридина и продолжают инкубацию 1 ч. Продукты инкубации затем охлаждают и к ним прибавляют 1 мл холодного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) в 5 мас. /объем. Осадки собирают на фильтрах Ватман GF/С и промывают 4 х 2 мл ледяного 5%-ного раствора ТХУ. Удержанная радиоактивность на фильтрах (представляющая насыщенный тритем уридин, введенный в клетки зобной железы) измеряется при помощи спектрометра жидкой сцинтилляции. Результаты приведены в табл. 2.

Продукты примеров 5 и 12 проявляют хорошую антиглюкокортикоидную активность.