способ диагностики малигнизации аденомы толстой кишки

Формула изобретения

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МАЛИГНИЗАЦИИ АДЕНОМЫ ТОЛСТОЙ КИШКИ путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что исследуют выделенные и отмытые лимфоциты периферической крови больного, при этом их разделяют на две пробы, в первую из которых добавляют эритроциты барана, инкубируют смесь при 37^oС в течение 15 мин, а во вторую пробу - бессывороточную физиологическую среду и инкубируют при 4 2^oС в течение 12 6 ч, причем в первой пробе проводят реакцию розеткообразования и определяют процент прозеткообразующих клеток в первый день, а во второй пробе клетки повторно отмывают после холодовой преинкубации, проводят реакцию розеткообразования, определяют процент розеткообразующих клеток, после чего рассчитывают отношение их числа второй пробы к первой и при его значении более 1,0 диагностируют малигнизацию аденомы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и иммунологии.

Известно, что ранняя диагностика рака в аденомах толстой кишки возможна при эндоскопическом обследовании больного, биопсии подозрительного участка аденомы или полном ее удалении с последующим морфологическим исследованием препарата.

Однако диагностика затруднена при групповых, множественных аденомах или диффузном аденоматозе толстой кишки, когда практически невозможно осуществить морфологическое исследование всех аденоматозных образований.

Целью изобретения является усовершенствование диагностики начальных форм рака толстой кишки в аденомах и своевременное ориентирование клиницистов и морфологов в отношении возможной малигнизации аденом.

Цель достигается сочетанным использованием известных способов:

реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (А.Н.Чередеев "Количественная и функциональная оценка Е- и В-систем организма у человека". В кн. "Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники". М. 1976), которая используется для количественного определения розеткообразующих клеток и не предназначена для диагностики опухолей;

способа определения сенсибилизации лейкоцитов к антигенам (Д.К.Новиков, В. И. Новикова, А. П. Шмаков. Авт. св. N 862919), в котором для повышения чувствительности клеток к антигенам применяетcя преинкубация выделенных и отмытых лейкоцитов в бессывороточной физиологической среде при 4 2^оС в течение 12 6 ч. Способ применяется для функциональной характеристики клеток.

Предлагаемый способ ранней диагностики рака в аденомах толстой кишки заключается в проведении реакции спонтанного розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана и подсчета розеткообразующих клеток в двух параллельных пробах: по общепринятой методике (РОК₁) и после холодовой преинкубации лимфоцитов в бессывороточной физиологической среде (РОК₂), при этом полученные результаты сравнивают и вычисляют индекс превышения, равный отношению РОК₂ к РОК₁. При индексе выше 1,0 делается заключение о наличии малигнизации аденомы толстой кишки.

Применение предлагаемого способа позволяет получить эффект, превышающий таковой от раздельного использования двух известных способов, и создает новые возможности при обследовании больных с предраковым процессом в толстой кишке, каким являются аденомы.

П р и м е р 1. Больной Б. Клинический диагноз: аденома средне-ампулярного отдела прямой кишки.

Выделенные в градиенте плотности урографина и отмытые лимфоциты переферической крови разделяют на две пробы с конечной концентрацией клеток 2х10⁶ в мл. К 0,2 мл взвеси лимфоцитов первой пробы добавляют 0,2 мл 0,5% взвеси отмытых эритроцитов барана, инкубируют 15 мин в термостате при 37^оС, осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, помещают в холодильник при 4^оС на 1 ч, затем осадок осторожно ресуспендируют и в камере Горяева подсчитывают процент розеткообразующих клеток; РОК₁ 26,0.

К лимфоцитам параллельной пробы добавляют 3 мл среды 199, клетки инкубируют при 4^оС в течение 18 ч, затем отмывают дважды средой 199, ресуспендируют в 1 мл среды, к 0,2 мл взвеси добавляют 0,2 мл 0,5% взвеси эритроцитов барана, инкубируют 15 мин при 37^оС, осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, помещают в холодильник при 4^оС на 1 ч, осторожно ресуспендируют, в камере Горяева подсчитывают процент розеткообразующих клеток. РОК₂ 44,0, вычисляют индекс превышения РОК₂/РОК₁ 44,0/26,0 1,7, дают заключение о малигнизации аденомы. При гистологическом исследовании удаленной аденомы выявлена focal carinoma на фоне тубулярно-ворсинчатой аденомы.

П р и м е р 2. Больная Б. Клинический диагноз: семейный диффузный аденоматоз толстой кишки. Гистологическое исследование биоптатов из нескольких аденом показало наличие тубулярных и тубулярно-ворсинчатых аденом с умеренно выраженной атипией эпителия.

Проведено иммунологическое исследование по методике, изложенной в примере 1. Индекс превышения равен 52/26 2,0, дано заключение о наличии малигнизации аденом. Больная подвернута оперативному вмешательству, произведена субтотальная колонэктомия с наложением илеоректального анастомоза. Макроскопически в удаленном препарате обнаружено множество аденом. При гистологическом исследовании рака толстой кишки не выявлено.

При контрольном исследовании через 6 мес после операции диагностирован рак нижне-ампулярного отдела прямой кишки на фоне тубулярно-ворсинчатой аденомы.

Предлагаемый способ может быть также использован для динамического контроля за больными после перенесенного лечения.

П р и м е р 3. Больной К. Клинический диагноз: аденома сигмовидной кишки.

Проведено иммунологическое обследование по предлагаемой методике, индекс превышения равен 50/30 1,6, дано заключение о малигнизации аденомы. Произведена эндоскопическая электроэксцизия аденомы. При гистологическом исследовании выявлена резко выраженная атипия эпителия (focal carcinoma).

При контрольном обследовании через 1 мес. индекс превышения равен 25/45 0,55. Эндоскопически патологии на месте удаленной аденомы не выявлено.

В ряде случаев полученные результаты свидетельствуют о возможности более широкого применения способа, в частности в онкологии, что требует, однако, дополнительного изучения.

П р и м е р 4. Больной К. Клинический диагноз: аденома верхне-ампулярного отдела прямой кишки. Анемия.

Проведенное иммунологическое обследование по предлагаемой методике установило индекс превышения 50/22 2,3. Дано заключение о наличии малигнизации аденомы. Произведено эндоскопическое удаление аденомы. Гистологическое исследование удаленного препарата, в том числе и серийных срезов, атипии эпителия в тубулярной аденоме не выявило.

Больной подвергнут углубленному клиническому обследованию атипии эпителия. Больной подвернут углубленному клиническому обследованию, при котором установлен диагноз миеломной болезни.

При обследовании предлагаемым способом 25 здоровых лиц во всех случаях индекс превышения был ниже 1,0.

Таким образом, предлагаемый способ ранней диагностики рака в аденомах толстой кишки обладает достаточной чувствительностью и может быть применен как при первичном обследовании больных с аденомами толстой кишки, так и при мониторинге после их удаления.