способ повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ, основанный на воздействии препарата бактериального происхождения, отличающийся тем, что в качестве активного вещества, оказывающего одновременно бактерицидное, противовоспалительное и иммуностимулирующее действие, используют водный раствор пиластина.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что in vitro используют пиластин в конечной концентрации 0,1 - 0,4%, при этом осуществляют инкубацию микроорганизмов с пиластином в течение трех дней.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют пиластин местно в течение трех дней в концентрации 0,01 - 0,04%.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, к микробиологии.

Известны способы повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем воздействия различных химических препаратов, протеолитических бактериальных ферментов, ферментов животного происхождения. Наиболее широко распространен из них димексид. Димексид обладает противовоспалительным и антимикробным действием, одновременно повышает чувствительность микробов к антибиотикам. Димексид для лечения гнойных ран, ожогов, флегмон различной локализации и т.п. применяют в 30-50%-ной концентрации. При сочетанном применении с антибиотиками с целью повышения чувствительности флоры гнойных ран к антибиотикам предложено использовать димексид в суббактериоцидных и 1/4 бактериоцидных дозах (10% и 15%). Однако суббактериоцидные дозы оказывают слабое противовоспалительное и антимикробное действие. Кроме этого, при применении димексида возможно побочное действие, проявляющееся в местной реакции в виде легкого жжения, иногда небольшого высыпания или зуда кожи. Некоторые больные ощущают запах чеснока во вдыхаемом воздухе (Инструкция по применению, утверждена 16.06.72 г).

Наиболее близкими по техническому решению являются протеолитические бактериальные ферменты, которые при совместной антибиотико- и ферментотерапии существенно повышают чувствительность микрофлоры к антибиотикам, обеспечивающим противовоспалительное и антимикробное действие.

Недостатком бактериальных протеинов является то, что терапевтическое действие проявлялось лишь при их совместном применении с антибиотиками, сами они не оказывали бактерицидного и бактериоста- тического действия.

Нами обнаружено у пиластина новое свойство способность повышать чувствительность микробов к антибиотикам in vivo и in vitro.

В отличие от аналогов пиластин не обладает побочным действием, а в отличие от прототипа обладает активным противовоспалительным действием, в том числе в малых концентрациях, кроме того, активным иммуностимулирующим действием.

In vitro способ осуществляется следующим образом.

Устойчивую или недостаточно чувствительную к антибиотикам культуру микроорганизмов вносят в 0,1-0,4%-ный водный раствор пиластина, инкубируют при температуре (371)^оС в течение трех суток, ежедневно проверяя чувствительность культуры к антибиотикам.

In vivo способ осуществляется следующим образом.

На раневую или другую поверхность кожи или слизистой, откуда выделена устойчивая или недостаточно чувствительная к антибиотикам культура микроорганизмов, ежедневно однократно в течение трех дней наносят 0,01-0,04%-ного водного раствора пиластина. Ежедневно проводят бактериологическое исследование гнойного отделяемого, определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам.

П р и м е р 1. In vitro. От больного С. выделена из отделяемого при хроническом гнойном отите культура стафилококка, определена чувствительность ее к 9 антибиотикам. 0,8 мл этой культуры, содержащей в 1 мл 10 м.к. было внесено в 4,5 мл 0,2%-ного раствора пиластина, взвесь инкубировали при температуре (371)^оС в течение трех суток. Ежедневно делали высевы культуры и определение чувствительности ее к антибиотикам. В результате установлено, что испытуемая культура была устойчива к двум антибиотикам из 9 (левомицетину и бензилпенициллину), а к 7 (канамицин, стрептомицин, эритромицин, рифампицин, доксициклин, олеандомицин и мономицин) чувствительна в разной степени. Средний размер зоны лизиса по 9 антибиотикам составил в диаметре 4,5 мм. Через 24, 47 и 72 ч инкубирования культуры с пиластином она стала чувствительной ко всем антибиотикам. При этом по диаметру лизиса чувствительность повысилась для 7 из 9 антибиотиков. Средний диаметр зоны лизиса для 9 антибиотиков через 24, 48 и 72 ч соответственно составил 6,1 мм, 6,7 мм и 6,8 мм (табл. 1).

П р и м е р 2. In vitro. От больного Х. из ЛОР-7 клиники из лакун при хроническом тонзиллите выделена культура стафилококка, изучена ее чувствительность к антибиотикам. Средний диаметр зоны лизиса для 9 антибиотиков составил 5,9 мм. 0,5 мл культуры концентрацией 10⁹ м.к./мл было перенесено в 4,5 мл 0,4% -ного раствора пиластина. Смесь инкубировали при температуре (271)^оС в течение трех суток, ежедневно из смесей делали высев на питательные среды, выделенные культуры изучали на чувствительность к антибиотикам. Установлено, что после инкубации с пиластином чувствительность культуры повысилась в 6 из 9 испытанных антибиотиков.

В табл. 1 приведены результаты изучения стафилококков, выделенных от 4 больных из ЛОР-клиники. Во всех четырех случаях имело место повышение чувствительности культур к антибиотикам после воздействия на микробы пиластина. Оптимальный период воздействия пиластина для повышения чувствительности микробов к антибиотикам 48-72 ч.

П р и м е р 3. In vivo. Больная Н. 5 лет, ист. N 5035. Д-з: ожог пламенем II-III А-Б ст. кистей, нижних конечностей. S30% ТБ-8% Ожоговая болезнь. После операции 31.03.89 г образовались мокнущие раны (ДНОР) на обеих бедрах. Раны с серозно-гнойным отделяемым 3 х 4 см. Грануляции вялые с серым налетом. Посев из раны 7.04.89 г. St. aureus, устойчив ко всем антибиотикам, слабо чувствителен только к ристомицину.

21.04.89 г назначено лечение пиластином 0,01% с концентрацией 600 ЕС в 1 мл. На рану левого бедра нанесена марлевая салфетка, смоченная 10 мл раствора пиластина. Суточная доза 6000 ЕС. Традиционное лечение на рану правого бедра (нитрат серебра и аппликация ликомициновой мази). Слева после 3 перевязок с пиластином 24.04.89 г рана очистилась, сухая с бурной эпитализацией. Посев из раны St. aureus, чувствительный к тетрациклину и доксициклину. Рана справа с вялой эпитализацией. На 7 день лечения пиластином полная эпитализация раны слева, справа 1,5 х 2 см.

П р и м е р 4. In vivo. Больной Р. 10 лет. Ист. N 8870. Д-з: ожог пламенем II-III A, IV ст. туловища, нижних и верхних конечностей S45% ШБ-IV ст. 30% Ожоговая болезнь, сепсис. Раны вялотекущие с серым налетом. Сделан посев содержимого ран. Выделены две культуры St. aureus и Ps. aeruginosa, устойчивые к ампициллину, эритромицину, гентамицину, канамицину, стрептомицину, карбепицеллину, оксициллину, левомицетину, тетрациклину, ристомицину, доксициклину.

15.05.89 г начато лечение пиластином с концентрацией (1200 ЕС) в 1 мл. Суточная доза 20 мл (24000 ЕС). На фоне сепсиса после 5 ежедневных аппликаций на рану салфеток, смоченных 20 мл пиластина, раны очистились, грануляции стали розовыми, мелкозернистыми, готовыми к аутодермопластике. Взят посев содержимого из раны 19.05.89 г. Выделили St. aureus, чувствительный к левомицетину и доксициклину. Ps. aeruginosa не выделена. Раны закрыты тронеклантатом, приживление полное.

В эксперименте проверено действие пиластина на 3 штаммах стафилококка, два из которых были устойчивы к 8 из 10 изученных антибиотиков и 1 штамм к 5 из 10, а также на 2 штамма E. coli, устойчивых к 6 и 7 из 10 антибиотиков. Микроорганизмы (10⁷ м. к./мл) инкубировали в 0,2%-ном растворе пиластина в течение 3 сут, ежедневно определяли их чувствительность к антибиотикам. Из табл.2 видно, что у всех штаммов повысилась чувствительность к антибиотикам. При статистическом анализе (табл.3) установлено статистически значимое повышение чувствительности испытуемых культур к антибиотикам. Процент культур, чувствительных к антибиотикам, по пяти изученным микроорганизмам увеличился под воздействием пиластина в 1,9-2 раза (р0,002-0,001).

Бактерицидное и бактеристатическое действие пиластина подтверждено нами также в опытах in vitro с чумным и бруцеллезным микробами. Для этого в бульон Хоттингера в пробирках вносили пиластин с таким расчетом, чтобы в 1 мл среды содержалось по 600, 1200, 2400, 4800, 9600 и 192000 ЕС (по 2 пробирки с каждой дозой). Одна человеко-доза для подкожного введения составляет 2400 ЕС, для наружного 12000 ЕС. В каждую из 6 пробирок с 6-ю дозами пиластина засевали по 1000 м.к. на 1 мл среды чумного или бруцеллезного микроба, делали высев из каждой пробирки по 1 мл на агаровые пластинки (исходные показатели). Пробирки с чумным микробом инкубировали при температуре (281)^оС, с бруцеллезным (37 1)^оС. Через 4,24 и 48 ч из всех пробирок делали высевы. Каждый высев из каждой пробирки делали на 5 агаровых пластинок, вычисляли М м, определяли достоверность различий в концентрации микробов в зависимости от доз пиластина и сроков исследования.

Установлено бактериостатическое действие 4800, 9600 и 19200 ЕС на чумной микроб уже через 4 ч инкубации с пиластином, а через 24-48 ч выделяли при этих дозах лишь единичные колонии. Максимальные из испытанных доз пиластина (600 и 1200 ЕС) не ингибировали рост возбудителя чумы, количество колоний по сравнению с исходными показателями увеличилось в 2 раза (табл.5).

Аналогичные данные получены и в отношении бруцеллезного микроба (табл. 4). Пиластин в дозах 600, 1200, 2400 ЕС не ингибирует рост бруцелл, через 24 и 48 ч наблюдается достоверное увеличение их концентрации; в дозах 4800 и 19200 ЕС оказывает бактериоцидное и бактериостатическое действие, при этих дозах через 24-48 ч культура практически при высеве на агар не вырастает.

Бактерицидное действие пиластина подтверждено и в отношении стафилококков, выделенных от больных гнойным отитом и тонзиллитом (табл.6 и 7). Данные культуры под воздействием пиластина повысили чувствительность к антибиотикам (см. примеры 1 и 2).

Способ прост в исполнении, занимает короткий период времени, экономичен, требует мало материалов. Способ может использоваться для повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в клинике при лечении больных и в лабораторных экспериментальных исследованиях. Побочное действие in vivo не отмечено.