штамм бактерий brucella ovis, используемый для получения r- бруцеллезных диагностикумов

Формула изобретения

Штамп бактерий Brucella Ovis НИИИЭМ N 792, используемый для получения R-бруцеллезных диагностикумов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии и может использоваться как штамм-продуцент специфических бруцеллезных R-антигенов, необходимых для получения кроличьей диагностической сыворотки к бруцеллам в R-форме, а также как антиген для конструирования R-эритроцитарного диагностикума. Известен референтный штамм B. ovis 63/290, обладающий характерными для данного рода культурально-морфологическими и биохимическими свойствами [1]

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм B.ovis И-61, используемый как антиген для конструирования R-эритроцитарного диагностикума [2, 3]

Недостатком вышеназванных штаммов является содержание в них клеток в S-форме, что не позволяет использовать их для получения R-специфического антигена.

Целью изобретения является изыскание штамма, находящегося в стойкой R-форме и продуцирующего специфический R-бруцеллезный антиген.

Штамм Brucella ovis И-107 выделен из семенников барана, депонирован в коллекции живых культур Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН под N 792 и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Мелкие полиморфные коккобациллы размером 0,4 х 0,8-0,4-2,2 мкм с выраженным полиморфизмом. Спор и капсул не образуют. Неподвижные. Грамотрицательные. На бульоне Мартена рН 6,8 при 37^оС через 48 ч образуется плотный сероватый осадок с просветлением самой жидкости. На агаре Мартена (рН 6,8) с добавлением 1% глюкозы и 1,5% глицерина и 10-15% бычьей или лошадиной сыворотки образуют выпуклые колонии правильной округлой формы с ровными краями, гладкой поверхностью, влажные, маслянистые, белесоваты при падающем и янтарно-желтые в проходящем свете диаметром 2-3 мм.

Физиолого-биохимические признаки. Анаэроб растет в присутствии повышенного содержания СО₂. Температурный диапазон роста 20-40^оС. Оптимальная температура роста 37^оС. Оптимум Ph 6,6-7,4.

Штамм не выделяет сероводород, не лизируется бактериофагом Тб, растет на средах с тионином в разведениях краски 1 50.000, 1 100.000. На питательных средах с добавлением основного фуксина, сафранина, метилвиолета рост бруцелл отсутствует. Уреазной и бактериоциногенной активностью не обладает. Штамм инагглютинабельный и инагглютиногенный, так как реакции агглютинации с поливалентной бруцеллезной и моноспецифическими сыворотками (антиабортус, антимелитензис) отрицательные, а заражение этим штаммом подопытных лабораторных животных не вызывает у них образование бруцеллезных S-антител.

Вирулентность штамма низкая: введение морским свинкам штамма в дозе 32 х 10⁹ микробов не вызывает генерализованной формы инфекции, т.е. установить МИД невозможно. ИИ равен 30,1% а ИД₅₀ соответствует 3,1 х 10⁹ микробам. Хранение штамма осуществляют в лиофильном состоянии в ампулах. После лиофилизации все свойства штамма сохраняются.

Антигенные свойства. При иммунизации кроликов вызывает образование специфических R-антител.

Штамм Brucella ovis И-107 отличается от штамма прототипа B. ovis 63/290 отсутствием в популяции клеток в S-форме, а также устойчивыми биологическими свойствами.

Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использования штамма B. ovis И-107.

П р и м е р. Бактерии смывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия и однократно отмывают этим же раствором. Микробную массу инактивируют трехкратным объемом охлажденного до 4^оС ацетона в течение 6 сут. со сменой ацетона через 48 ч и контролируют специфическую стерильность.

При изучении отдельных антигенных комплексов наиболее перспективным для конструирования диагностических препаратов оказались водно-солевые фракции целых клеток штамма B. ovis И-107 [3]

Получение водно-солевых экстрактов. Водно-солевые АГ получают экстрагированием инактивированных клеток штамма B. ovis И-107 теплым 10%-ным раствором хлорида натрия в течение 4 ч при 37^оС, непрерывно встряхивая. Суспензию центрифугируют (610³ q, 30 мин). Супернатант диализуют против дистиллированной воды, лиофилизируют и хранят при 4^оС.

Таким образом, штамм может быть использован для получения растворимых антигенов методом водно-солевой экстракции, которые используются для получения кроличьих высокотитражных R-сывороток. Средний титр которых в ИФА 1 1638400126300, в РИД 1 168,3. Также водно-солевой R-антиген применяется для создания R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума, диагностические титры которого колеблются от 1 800 до 1 3200.