способ диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации у детей раннего возраста

Формула изобретения

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИУТРОБНОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА путем их обследования, отличающийся тем, что в крови определяют количество НСТ-положительных нейтрофилов одновременно при спонтанной и стимулированной этанолом редукции нитросинего тетразолия, по наличию грубодисперсных отложений формазона вычисляют показатель этаноловой чувствительности нейтрофилов и при его значении более 0,08 диагностируют внутриутробную алкогольную интоксикацию.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к клинической биохимии и иммунологии и может быть использовано для диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи по своевременной коррекции этиопатогенетических нарушений у детей раннего возраста.

Известны способы диагностики алкогольной интоксикации с помощью оценки клинических данных и специальных анкет на выявление пристрастия к алкоголю. К сожалению, их недостатком является известный субъективизм и низкая информативность, высокая частота ложно отрицательных ответов на анкеты, что затрудняет диагностику алкогольной интоксикации. При этом отрицательное воздействие метаболитов этилового спирта на плод диагностируется у новорожденного только в случае явных клинических проявлений алкогольной эмбриофетопатии. Лабораторные способы диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации в изученной нами литературе не описаны.

Известен лабораторный способ диагностики туберкулеза тестом восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), где в качестве стимулятора использован туберкулин. Данный способ позволил дифференцировать инфекционную аллергию на туберкулин от поствакциальной с одновременной оценкой метаболической (фагоцитарной) активности нейтрофилов крови. НСТ-тест проводят для оценки продукции Н₂О₂. Этот окислительно-восстановительный краситель желтого тона при участии функционально-активных фагоцитов в фаголизосомах восстанавливается из синего формазана. По результатам этого теста можно оценивать эффективность функционирования одной из главных ферментативных систем клетки, ответственных за бактерицидный потенциал. Однако, этот способ не может быть использован для диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации у детей.

Цель разработать информативный лабораторный способ диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации.

Поставленная цель достигается тем, что у детей для достоверного определения внутриутробной алкогольной интоксикации определяют повышенную чувствительность нейтрофилов крови к этиловому спирту, выявляют количество НСТ-положительных нейтрофилов, реагирующих на нитросиний тетразолий, в контроле и опыте с этанолом одновременно по наличию грубодисперсных отложений формазана вычисляют показатель этаноловой чувствительности и при повышении его более 0,08 диагностирует внутриутробную алкогольную интоксикацию.

Нейтрофилы крови детей, подвергшихся внутриутробной алкогольной интоксикации, отвечают на стимуляцию этанолом увеличением числа НСТ-положительных клеток, в то время как нейтрофилы крови детей, не подвергающихся внутриутробному воздействию алкоголя, не реагируют на стимуляцию этанолом. Высокий показатель этаноловой чувствительности и большой процент НСТ-положительных нейтрофилов свидетельствует о нарушении процессов пероксидации во внутриутробном периоде ребенка и снижении резистентности организма. Одновременно представляется возможность оценить метаболическую (фагоцитарную) активность нейтрофилов крови.

Способ осуществляется следующим образом.

В двух агглютационных пробирках смешивают 0,01 мл раствора гепарина (50 ЕД на 1 мл), 0,1 мл крови, взятой из пальца и 0,05 мл 0,2% раствора НСТ (нитросинего тетразолия) фирма "ЛАХЕМА" (ЧССР). В одну из них вносят 0,05 мл 0,15 М-фосфатного изотонического буфера (рН-7,2) и 0,01 мл физиологического раствора контроль, а в другую (опыт) такое же количество фосфатного буфера и 0,01 мл раствора этилового спирта (0,2 мл 96-градусного этилового спирта растворяется в 100 мл физиологического раствора). После инкубации в термостате в течение 30 минут готовят мазки, фиксируют их в абсолютном метаноле 5 минут и окрашивают 7 минут в растворе метилового зеленого. Нейтрофилы считают положительными по тесту восстановления НСТ (на 100 клеток), если они содержат грубодисперсные отложения формазана.

Сравнивая количество НСТ-позитивных нейтрофилов при спонтанной (контроль) и стимулированной этанолом (опыт) редукции нитросинего тетразолия, определяют показатель этаноловой чувствительности нейтрофилов (ПЭЧН) по формуле: Н_э-Н_к/100, где Н_к показатель спонтанного НСТ-теста, Н_э показатель этанолстимулированного НСТ-теста.

Данные подтверждены клиниколабораторным обследованием 30 детей раннего возраста с внутриутробной алкогольной интоксикацией, которая диагностировалась с помощью известных клинических методов и анкетирования родителей. Контрольную группу составили дети раннего возpаста (20 человек) без внутриутробной алкогольной интоксикации.

Установлено, что у детей с внутриутробной алкогольной интоксикацией показатель редукции нитросинего тетразолия, стимулированной этанолом, достоверно превышал показатель спонтанного НСТ-теста в отличие от контрольной группы. Определение показателя этаноловой чувствительности нейтрофилов (ПЭЧН) у детей с внутриутробной алкогольной интоксикацией позволило выявить его колебание от 0,09 до 0,16. В контрольной группе этот показатель не превышал 0,08 (таблица).

П р и м е р 1. Мальчик Г. 6 мес. Путем анкетирования установлено, что во время беременности мать ребенка употребляла алкоголь в дозе 50 г абсолютного этанола в сутки. Ответы на значимые вопросы в анкете, а также приведение скрининга на алкоголизм, позволили выявить у нее преклиническую стадию алкоголизма, а у ребенка диагностировать внутриутробную алкогольную интоксикацию. Показатель этаноловой чувствительности нейтрофилов (ПЭЧН) крови составил 0,1, что подтверждает наличие внутриутробной алкогольной интоксикации.

П р и м е р 2. Девочка Н. 1 год. Путем анкетирования установлено, что во время беременности мать девочки употребляла алкоголь в дозе 30 г абсолютного этанола в сутки. Ответы на значимые вопросы в анкете, а также проведение скрининга на алкоголизм позволили выявить у нее преклиническую стадию алкоголизма, а у ребенка диагностировать алкогольную интоксикацию. Показатель этаноловой чувствительности нейтрофилов (ПЭЧН) составил 0,16, что подтверждает наличие внутриутробной алкогольной интоксикации.

П р и м е р 3. Девочка К. 1 год 9 мес. Путем анкетирования установлено, что во время беременности мать девочки употребляла алкоголь в дозе 40 г абсолютного этанола в сутки. Ответы на значимые вопросы анкеты, а также проведение скрикинга на алкоголизм позволили выявить у нее преклиническую стадию алкоголизма, а у ребенка диагностировать внутриутробную алкогольную интоксикацию. Показатель этаноловой чувствительности нейтрофилов (ПЭЧН) крови составил 0,09, что подтверждает наличие внутриутробной алкогольной интоксикации.

П р и м е р 4. Мальчик П. 1 год 6 мес. Ответы на значимые вопросы анкеты, а также скрининговый тест не выявили у матери ребенка признаков алкоголизма. Показатель этаноловой чувствительности нефтрофилов (ПЭЧН) составил 0,02, что исключает у ребенка внутриутробную алкогольную интоксикацию.

Таким образом, определение показателя этаноловой чувствительности нейтрофилов крови дает возможность с высокой степенью достоверности диагностировать внутриутробную алкогольную интоксикацию. Разработанный нами лабораторный способ диагностики внутриутробной алкогольной интоксикации не имеет аналогов, прост в исполнении и высоко информативен.