средство для криоконсервирования костного мозга

Формула изобретения

СРЕДСТВО ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА, содержащее динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, отличающееся тем, что, с целью снижения токсичности, оно дополнительно содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и бидистиллированную воду при следующих соотношениях ингредиентов, мас.

Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 30,0 50,0

Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,08 0,18

Бидистиллированная вода остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию и трансплантации биологических тканей.

Известны растворы, предложенные для криоконсервирования костного мозга и содержащие криопротекторы низкомолекулярный поливинилпирролидон и/или глицерин. Эти растворы при замораживании костного мозга позволяют сохранить репродуктивную, колониеобразующую способность столовых клеток в среднем в 37% (при колебаниях от 20 25% до 40 63%), т.е. они не обладают достаточно высоким хладоограждающим действием на костномозговые клетки. Применение глицерина в оптимальной для замораживания кроветворных клеток 15% концентрации ввиду ее токсичности для макроорганизма требует отмывания этого криофилактика от костного мозга перед трансплантацией и ведет к дополнительной потере гемопоэтических клеток.

Цель изобретения заключается в том, чтобы раствор для криоконсервирования костного мозга создать из максимально нетоксичных составных частей и повысить его хладоограждающее действие на стволовые костномозговые клетки.

Цель достигается тем, что хладоограждающий раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующих соотношениях компонентов, мас. Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 30,0-50,0 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,08-0,18 Бидистиллированная вода Остальное

Раствор готовят следующим образом.

Взвешивают требуемые навески динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины. Отдельно в бидистиллированной воде растворяют навески указанных веществ. Полученные растворы смешивают и, добавляя бидистиллированную воду, доводят до окончательного объема.

Приготовленный хладоограждающий раствор пропускают через ватно-марлевый фильтр, разливают в требуемые флаконы, закрывают их резиновыми пробками и завальцовывают. Перед стерилизацией завертывают в двойной слой пергаментной бумаги.

Стерилизацию флаконов с раствором для криоконсервирования костного мозга производят в автоклаве в течение 30 мин при 1,2 атм. Готовый раствор хранят в сухом прохладном темном месте во флаконах, завернутых еще до стерилизации в пергаментную бумагу, не более 6 мес. Коррегируют рН раствора до 7,0-7,2 с помощью 2 н. раствора химически чистой соляной кислоты.

Готовый хладограждающий раствор бесцветен, прозрачен, не имеет запаха. Он хорошо смешивается с нативной костномозговой взвесью, а также стабилизированной цитратом натрия и содержащей среду 199 и аутологичную сыворотку, предупреждает агрегацию клеток костного мозга и обеспечивает их высокую жизнеспособность при положительных температурах.

Раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием: при замораживании до -196^оС по двухэтапной программе (со скоростью охлаждения 1^о в мин до -9 и 10^о в мин до -196^оС) и размораживании в течение 50 с при 39^оС в водяной ванне сохраняется весьма высокий процент стволовых кроветворных клеток от 75,4 до 94,1 в среднем 83,32,7.

Эти данные получены в исследованиях, проведенных на 905 мышах имбредной линии (СВА + С₅₇ВI_б) с клонированием гемопоэтических стволовых клеток в селезенках смертельно облученных мышей по принятому в отечественных и зарубежных работах методу Till T.E. Mc Culloch E.A. A direct meаsurement of the radiation sensivity of normal mouse bone marrav cells. "Red"at.Ros v 14, р. 213.

Предлагаемый раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием, апирогенен, нетоксичен. Последнее обстоятельство позволяет трансплантировать размороженный костный мозг без отмывания от криофилактика, что делает удобным использование данного хладограждающего раствора в практической работе.