планшет для иммунодиффузионного анализа

Формула изобретения

ПЛАНШЕТ ДЛЯ ИММУНОДИФФУЗИОННОГО АНАЛИЗА, состоящий из крышки и основания в виде емкости с плоским дном и боковыми стенками, выполненной с возможностью размещения слоя нативного геля и фильтровальной бумаги, отличающийся тем, что на крышке с наружной стороны дополнительно выполнен выступ с плоской поверхностью и размерами, обеспечивающими перекрытие рабочей части геля для осуществления его отжима.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицинского иммунологического анализа, а именно к конструкции планшетов для иммунодиффузионного метода исследования.

Известны планшеты для проведения иммунодиффузионного анализа, выпускаемые серийно фирмой "Behringwerke" ФРГ, Марбург [1] Они рассчитаны на учет результатов реакции в нативном геле без предварительного окрашивания преципитатов. В ряде случаев, связанных с образованием преципитата низкой плотности, это затрудняет учет реакции либо даже заставляет сделать ложный вывод об отсутствии преципитата. Такими особенностями обладают, например, преципитаты, образующиеся за счет минорных антигенных детерминант, или в случае структурной неполноценности исследуемых молекул, связанной с дефектом синтеза либо протеолитической фрагментацией, или при низкой концентрации исследуемого белка в образце. В указанных случаях для правильного учета результатов реакции необходимо окрашивание преципитата.

Для эффективной окраски преципитата красителями, связывающимися с белками, а именно они применяются в иммунохимических исследованиях, необходимо удалить из геля все белки, не вошедшие в состав преципитата, иначе их присутствие резко усилит фон и снизит эффективность окраски. Для удаления несвязавшихся белков используют отмывку в гипертоническом или физиологическом растворе хлорида натрия (солевой раствор). При этом гель толщиной 1 мм (стандартная толщина для РИД) отмывают в течение 1,5-2 сут. периодически меняя солевой раствор. Если же перед отмывкой гель отжать под прессом, состоящим из нескольких слоев фильтровальной бумаги, это позволит, во-первых, удалить значительную часть несвязавшегося белка вместе с буфером, впитывающимся в фильтровальную бумагу, во-вторых, значительно уменьшить толщину геля и сократить тем самым время отмывки в солевом растворе до 15-20 мин. Кроме того, перед окрашиванием гель необходимо высушить, чтобы уменьшить неспецифическую диффузию в него свободного красителя. Предварительный отжим геля под прессом сокращает процедуру высушивания с нескольких часов до 10-15 мин.

Наиболее близким к изобретению является средство для проведения иммунодиффузионного анализа, предлагаемое в методическом руководстве по иммунохимии и биохимии [2] Для проведения иммунодиффузионного анализа используются чашки Петри, в которых присутствует слой геля. Постановка реакции преципитации и ее оценка предполагает проведение операции окрашивания преципитатов. При этом осуществляется этап элюирования из нативного геля несвязавшихся белков физиологическим раствором с последующим высушиванием геля, покрытого листком фильтровальной бумаги, в термостате.

Таким образом, указанное техническое решение позволяет проводить оценку результатов в случае образования преципитатов низкой плотности, однако этапы отмывки и высушивания длительны (порядка 1,5-2 сут.).

Целью изобретения является повышение оперативности анализа, его упрощение.

На фиг. 1 изображен планшет для иммунодиффузионного анализа в исходном положении; на фиг. 2 то же, в момент обработки (отжима) геля после завершения иммунодиффузионной реакции.

Предлагаемый планшет для иммунодиффузионного анализа имеет крышку 1 и основание 2, представляющее собой емкость с плоским дном и боковыми стенками такой высоты, которая обеспечивает размещение в нем слоя нативного геля 3, а также нескольких слоев фильтровальной бумаги 4 во время отжима геля под прессом, функцию которого выполняет крышка, на внешней стороне которой выполнен выступ 5 с плоской поверхностью 6 контуром, подобным контуру основания, и размерами, достаточными для обработки рабочей части геля.

Работают с планшетом следующим образом. В исходном положении (при хранении и проведении иммунодиффузии) крышка 1 закрывает основание 2, предохраняя гель 3 от высыхания и повреждения.

После завершения реакции и перед отмывкой геля отжимают жидкость (рабочий буфер) из геля 3 с помощью крышки 1 на основании 2. Для этого оператор помещает в основание 2 на слой геля 3 несколько слоев фильтровальной бумаги 4, переворачивает крышку 1 и помещает ее в емкость так, что выступ 5 на крышке 1 входит во внутреннюю полость и оказывает давление на рабочую часть геля 3 через фильтровальную бумагу 4 (см. фиг. 2). Процедура отжима занимает не более 10-15 мин. После этого гель высушивают, отмывают в солевом растворе 15-20 мин и окрашивают.