способ получения днк, обогащенного минеральными добавками

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДНК, ОБОГАЩЕННОГО МИНЕРАЛЬНЫМИ ДОБАВКАМИ, включающий измельчение гонад рыб, обработку их солевым раствором, фильтрацию с последующим отделением осадка, содержащего целевой продукт, его промывкой и сушкой, отличающийся тем, что сырье после измельчения нагревают при 100 - 105^oС в 7 10% -ном водном растворе NaCl, фильтрат инкубируют с 96%-ным этиловым спиртом, надосадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют 60%-ный этиловый спирт и двухвалентные металлы в эквимолярном соотношении с ДНК, целевой продукт промывают 96%-ным этиловым спиртом и сушат на воздухе.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биохимии, а именно к созданию новых биологически активных пищевых добавок из ранее неиспользуемых отходов переработки морских гидробионтов.

Нуклеопротеины, содержащие микроэлементы в органически связанной форме, неизвестны. Аналогов их получения не найдено. Известны железосодержащие медпрепараты, например комплекс соединения железа с сорбентом фербитол, утвержденный Фармакологическим комитетом МЗ СССР 9 апреля 1971 г. Недостатком их, в том числе и фербитола, является низкая усвояемость ионов железа. Согласно этой инструкции для курса лечения анемии фербитолом необходимо вводить внутримышечно по 2 мл раствора в день, содержащего 0,1 г железа в течение 15-20 инъекций, т.е. всего 3-4 г железа.

Препарат ДНК значительно более эффективный. Даже при введении per os, а не внутримышечно, он содержит всего 5 мг Fe⁺⁺, который согласно заключению института питания АМН СССР, усваивается полностью, что соответствует суточной норме в этом катионе, необходимом согласно нормам МЗ СССР (Нормы физиологичеких потребностей в пищевых веществах и энергии для различных групп населения СССР, М; МЗ СССР, 1991). Таким образом, усвоение железа из препарата ДНК, связанного Fe⁺⁺, происходит на 100% в то время как с фербитолом усваивается на 5%

Наиболее близким по технической сущности является способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из гонад, используемый в биохимических иссследованиях, включающий измельчение сырья, добавление воды, установление рН среды равное 6,6, нагревание до 100^оС в течение 1 ч, добавление раствора NaOH до рН 9,8, экстракцию в течение 2 ч при 100^оС, снижение рН раствора до величины 5,8 путем добавления раствора HCl и отделение фильтрата, а затем осаждение из него ДНК путем добавления подкисленного этилового спирта. После этого осадок ДНК промывают сначала 60%-ным этиловым спиртом, а затем 96%-ным этиловым спиртом и высушивают. Недостаток этого способа получения препарата ДНК заключается в том, что препарат можно использовать только как химреактив.

Цель изобретения получение кормовой и пищевой биологически активной добавки нуклеопротеинового комплекса с органически связанными микроэлементами, из ранее неиспользуемых отходов рыбообрабатывающей промышленности.

Фосфатная группа и гетероциклическое основание ДНК, входящего в нуклеопротеин, образуют с микроэлементами, достаточно прочный, но легкоусвояемый организмом комплекс. Эти свойства ДНК и позволили ввести в состав нуклеопротеина необходимый организму физиологический состав и количество микроэлементов. Белок нуклеопротеина лосося содержит весь комплекс незаменимых аминокислот. Состав нуклеопротеина с микроэлементами таким образом обеспечивает сочетание в одном препарате ряда ценных питательных и лечебных свойств.

Сущность способа заключается в следующем. Текучие молоки лососевых рыб нагревают до 100-105^о в 7-10%-ном водном растворе поваренной соли, отработанные молоки отделяются фильтрованием, а к экстракту добавляют 1:1 этилового спирта 96% Полученный осадок смешивают с раствором микроэлементов в эквимолярных с ДНК количествах, обрабатывают спиртом 60% фильтруют и сушат. Получают светло-кремовый аморфный порошок, содержащий нуклеопротеиновый комплекс и органически связанные микроэлементы. ДНК усиливает иммунологические свойства организма, снижает содержание холестерина в крови, а ионы цинка усиливают ее действие, так как известно, что ионы цинка принимают участие в формировании иммунного статуса человеческого организма. Комплексная связь Fe⁺⁺ с ДНК позволяет организму легко усваивать катионы железа и использовать его для синтеза гемоглобина. Таким образом, препарат ДНК с Fe⁺⁺ действует положительно на гемопоэз и может употребляться для лечения заболеваний крови, связанных с низким содержанием количества эритроцитов.

Согласно отзыву Института питания АМН СССР препарат НП с микроэлементами обладает целым комплексом лечебных свойств: иммуностимулирующими, холестеринемическими, противоанемическими свойствами, а также хорошей питательной ценностью. Все это позволяет рекомендовать его в качестве новой высокоценной биологически активной пищевой кормовой добавки с широкими лечебно-профилактическими свойствами.

П р и м е р 1. В круглодоную колбу с обратным холодильником наливают 300 мг воды, при перемешивании добавляют 21 г поваренной соли и 100 г свежемороженных гонад. Масс нагревают до 100^оС и продолжают кипячение в течение 3 ч, после чего горячий раствор фильтруют через капроновое сито. К охлажденному до 40-50^оС фильтрату (300 мл) добавляют 300 мл 96%-ного этилового спирта, оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре. Сифонируют верхний слой, к осадку при перемешивании добавляют равное количество 60%-ного этилового спирта, в котором растворено 224 мг катиона двухвалентного железа и 26 мг двухвалентного катиона цинка. Смесь оставляют на несколько часов для реакции при перемешивании. По истечении этого времени надосадочную жидкость сифонируют, осадок промывают дважды 96%-ным этиловым спиртом (1:1), фильтруют и сушат на воздухе.

Выход нуклеопротеина, содержащего 55% ДНК, 5,5 г. Содержание Fe⁺⁺ 1,65% Zn⁺⁺ 0,27%

П р и м е р 2. В круглодонную колбу с обратным холодильником наливают 370 мл воды, при перемешивании добавляют 30 г поваренной соли и 25 г сублимированных гонад. Массу нагревают до 100^оС и продолжают кипячение в течение 3 ч, после чего фильтруют через капроновое сито (размер N 60). К охлажденному до 60^оС фильтрату добавляют 300 мл 96%-ного этилового спирта (охлажденного до 0^оС), оставляют на несколько часов при комнатной температуре для осаждения НП. Декантируют верхний слой, к осадку при перемешивании добавляют равное количество 60%-ного этилового спирта, в котором растворено 224 мг двухвалентного катиона железа и 26 мг двухвалентного катиона цинка. Смесь оставляют на несколько часов для реакции при перемешивании.

По истечению этого времени надосадочную жидкость сифонируют, осадок промывают 96% -ным этиловым спиртом, фильтруют от остатков спирта и сушат на воздухе в тонком слое.

Выход НП, содержащего 60% ДНК, 6 г.

П р и м е р 3. В реактор, емкостью 600 л, загружают 300 л воды, 120 кг соленых молок (ТУ 15-01 857-81) при постоянном перемешивании. Массу нагревают до 105^оС и продолжают кипячение в течение нескольких часов, после чего горячий раствор фильтруют через капроновое сито. К охлажденному до 55^оС фильтрату (300 л) добавляют 300 л 96% -ного охлажденного до 5^оС этилового спирта, оставляют на 3 ч при комнатной температуре для осаждения НП. Декантируют верхний слой к осадку при перемешивании добавляют равное количество 60%-ного этилового спирта, в котором растворено 224 г двухвалентного катиона железа и 26 г двухвалентного катиона цинка. Смесь оставляют на несколько часов для реакции при перемешивании. По истечении этого времени надосадочную жидкость сифонируют, осадок промывают 96%-ным этиловым спиртом, фильтруют от остатков спирта и сушат на воздухе в тонком слое.

Выход НП с микроэлементами, содержащего 65% ДНК, 1,65% Fe⁺⁺, 0,27% Zn⁺⁺ 6 кг.