вещество, обладающее антиагрегантной активностью

Формула изобретения

Применение динатриевой соли 2-(2,6- диметил- 3,5 -диэтоксикарбонил-1, 4-дигидропиридин -4- карбоксиамидо)глутаровой кислоты в качестве вещества, обладающего антиагрегантной активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным препаратам, и может быть использовано в качестве средства специфической профилактики тромбозов при различных патологических состояниях.

В связи с тем, что тромбоциты играют фундаментальную роль не только в образовании гемостатического тромба у места повреждения стенки сосудов, но и в патогенезе тромбозов, особенно артериальных, и атеросклероза, для профилактики тромбозов в артериальной системе, должны быть включены мероприятия, направленные на снижение адгезивности и агрегации тромбоцитов.

Из большого количества антиагрегатов, влияющих на различные фазы процесса агрегации тромбоцитов, в клинической практике используется ограниченное количество. Наибольшее распространение в профилактике тромбозов, инфаркта миокарда нашли антиагреганты, ингибирующие циклоксигеназу (аспирин), фосфодиэстеразу (дипиридамол), кальций-блокаторы (верапамил).

Впервые установлено, что препарат динатриевой соли 2-(2,6-диметил-3,5-диэтоксикарбонил-1,4-дигидропиридин-4- карбоксамидо)глутаровой кислоты, являющийся по химической структуре производным дигидропиридинового ряда, проявляет выраженные антиагрегантные свойства. Препарат был впервые синтезирован в Институте органического синтеза АН Латвии и защищен как антиаритмическое средство. По физическим свойствам представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, мол.м. 426,4.

Эксперименты были проведены на белых нелинейных крысах-самцах массой 220-250 г. По истечении послеоперационного периода после катетеризации брюшной аорты (2,50,3 сут) кровь забиралась у бодрствующих крыс силиконированным шприцем через катетер и стабилизировалась 130 мМ раствором цитрата натрия. Богатую тромбоцитами плазму получали центрифугированием крови при 100g в течение 100 мин. После удаления супернатанта кровь подвергали дальнейшему центрифугированию в течение 20 мин при 300g для получения плазмы, бедной тромбоцитами. Агрегацию тромбоцитов определяли методом при помощи лазерного анализатора агрегации, сопряженного с IBM-совместимым компьютером. Метод основан на статистическом анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов и использовалась для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации, агрегации под влиянием низких концентраций индукторов агрегации, что является наиболее оптимальным для клинического и лабораторного исследования. В качестве индукторов агрегации использовали АДФ в концентрациях 0,1, 0,5 и 1 мкМ, арахидоновую кислоту в концентрациях 6,5, 12,5 и 25 мМ и фактор активации тромбоцитов (ФАТ) в конечных концентрациях 10, 20 и 30 нМ. В качестве растворителя АДФ использовали изотонический раствор натрия хлорида, ФАТ и арахидоновую кислоту готовили на этаноле.

Для оценки процесса агрегации определяли следующие показатели: степень агрегации, максимальную и начальную скорости агрегации, глубину дезагрегации и вторую волну при их наличии. Эксперименты включали несколько серий: 1. серия опытов in vitro: влияние препаратов на процесс индуцированной агрегации при различных временных интервалах инкубации с ними (1,3 и 5 мин), влияние препаратов на процесс индуцированной развившейся агрегации при различных временных интервалах (10, 30, 60 и 120 с от начала агрегации), влияние препаратов на процесс спонтанной агрегации при различных временных интервалах инкубации с ними (1,3 и 5 мин), влияние растворителя на исследуемые процессы спонтанной и индуцированной агрегации тромбоцитов; 2. серия опытов ex vivo: влияние препаратов на процесс индуцированной агрегации после применения их в суточной дозе 0,3 мг/кг; влияние препаратов на процесс спонтанной агрегации после применения их в/в в суточной дозе 0,3 мг/кг, влияние растворителя на исследуемые процессы спонтанной и индуцированной агрегации тромбоцитов. Исследуемые препараты применялись в экспериментах in vitro в концентрациях 10^-5-10^-7 М в соответствии с рекомендациями Института органического синтеза АН Латвии. Расчет эффективности проводился с использованием четырехпольной таблицы и точного критерия Фишера. Расчет ЭД-50 проводили методом пробит-анализа по Ч. Блиесу. Статистический анализ был модифицирован при помощи IBM-совместимого компьютера. Каждая группа включала 10 наблюдений. Были проведены сравнительные аналогичные по протоколу исследования с применением ингибитора циклоксигеназы аспирина фирмы Bayer (Германия) и ингибитора фосфодиэстеразы дипиридамола фирмы Germed (Германия).

В результате проведенных экспериментов отмечен статистически достоверный выраженный эффект всех исследуемых лекарственных препаратов. Однако аспирин ингибировал агрегацию тромбоцитов, вызванную всеми применяемыми индукторами в среднем на 491,2% в то время как препарат динатриевой соли дигидропиридина глутаровой кислоты в аналогичных эффективных концентрациях 10^-5-10^-7 М ингибировал агрегационное действие АДФ на 360,9% а ФАТ на 41 1,5% Антиагреационное действие дипиридамола проявлялось только, начиная с концентрации 10^-5 М. Дипиридамол тормозил эффект АДФ на 201,6% а арахидоновой кислоты на 231,2% Другими словами, проведя анализ только влияния на величину степени агрегации при различных условиях эксперимента in vitro приходят к заключению о ряде антиагрегантной активности исследуемых препаратов: аспирин, динатриевая соль дигидропиридина глутаровой кислоты, дипиридамол.

В табл.1 представлены результаты исследования влияния лекарственных препаратов на показатели процесса агрегации в сериях опыта in vitro. Эксперименты в условиях ex vivo подтвердили заключение о ряде активности препаратов. Аспирин в суточной дозе 0,3 мг/кг тормозил спонтанную агрегацию тромбоцитов на 421,3% в то время как препарат динатриевой соли дигидропиридина глутаровой кислоты в аналогичных условиях ингибировал агрегацию на 321,1% а дипиридамол лишь на 163,7%

В табл. 2 представлены результаты влияния лекарственных препаратов на процесс агрегации тромбоцитов в условиях ex vivo при ЭД-50 0,3 мг/кг.

П р и м е р 1. Белая крыса-самец массой 240 г. Продолжительность послеоперационного периода после катетеризации брюшной аорты 2,5 сут, нормальное его течение. Показатели процесса агрегации тромбоцитов при действии лекарственных препаратов даны в табл.3.

П р и м е р 2. Белая крыса-самец массой 230 г. Продолжительность послеоперационного периода после катетеризации брюшной аорты 2,8 сут, нормальное его течение. Показатели процесса агрегации тромбоцитов при действии лекарственных препаратов даны в табл.4.

Следующая серия экспериментов проводилась в условиях in vitro на богатой тромбоцитами плазме, полученной от относительно здоровых доноров (контроль) и от больных ишемической болезнью сердца (ИБС) со стабильной стенокардией напряжения II-IV функциональных классов с нарушением ритма согласно классификации Канадской Ассоциации кардиологов. Контрольная группа относительно здоровые доноры и больные отбирались из одной возрастной группы от 30 до 44 лет. Исследования проведены на 12 больных. Перед началом исследования препаратов больных наблюдали в течение 3-10 дней (измеряли артериальное давление, проводили ЭКГ и ФКГ исследования, оценивали тяжесть состояния) при индифферентной терапии в амбулаторных условиях. Длительность заболевания колебалась от 1 года до 10 лет. Кровь забиралась из кубитальной вены натощак исследованию процесса агрегации тромбоцитов аналогичным способом, согласно рекомендациям КНЦ АН РФ (1980 г.). Сравнительный анализ влияния исследуемых препаратов на процесс агрегации тромбоцитов проводился согласно предыдущему протоколу. В табл.5 представлены результаты влияния лекарственных препаратов на процесс агрегации тромбоцитов у больных ИБС с нарушением ритма в условиях опыта in vitro.

П р и м е р 3. Больной Г. 33 года, болен ИБС. Стенокардия напряжения II ф. класса. Нарушение ритма сердца в течение 2 лет. В настоящее время предъявляет жалобы на приступы загрудинных болей, ощущение перебоев в работе сердца. Объективно: сердечные тоны приглушены, систолическое АД 140 мм рт. ст. диастолическое 110 мм рт.ст. ЧСС 84 в 1 мин. Показатели процесса агрегации тромбоцитов при действии лекарственных препаратов in vitro даны в табл.6.

П р и м е р 4. Больной М. 42 года, диагноз: ИБС. Стенокардия напряжения IV ф. класса. Мерцательная аритмия. Болен в течение 4 лет. В настоящее время предъявляет жалобы на загрудинные боли, чувство нехватки воздуха, ощущение перебоев в работе сердца. Объективно: сердечные тоны приглушены, систолическое АД 150 мм рт.ст. диастолическое 115 мм рт.ст. ЧСС 80 в 1 мин. Показатели процесса агрегации тромбоцитов при действии препаратов in vitro даны в табл.7.

Резюмируя полученные данные, необходимо отметить, что динатриевая соль дигидропиридина глутаровой кислоты оказывает выраженный антиагрегантный эффект даже в присутствии малых концентраций индукторов агрегации и при действии на спонтанную агрегацию тромбоцитов в низких милимолярных концентрациях препарата, что существенно подчеркивает его превосходство в сравнении с применяемым ингибитором фосфодиэстеразы-дипиридамолом. Наиболее эффективной концентрацией по влиянию на ингибирование процесса агрегации тромбоцитов была 10^-5 М. В сравнительном анализе исследуемых препаратов необходимо отметить, что при применении аспирина в качестве антитромботического (антиагрегантного) средства следует учитывать, что одновременно с торможением биосинтеза тромбоксана (протромботического фактора) ингибируется биосинтез другого производного арахидоновой кислоты простациклина, являющегося одним из наиболее мощных эндогенных антитромботических факторов. Данный эффект не отмечается при действии динатриевой соли дигидропиридина глутаровой кислоты, что подтверждается его выраженным антиагрегантным влиянием, индуцированным ФАТ. Необходимо учитывать и то, что обладая более выраженным влиянием на процессы агрегации тромбоцитов, аспирин в сравнении с исследуемыми препаратами, как противовоспалительное средство, обладает ульцерогенным действием, при применении аспирина также как и при приеме дипиридамола могут наблюдаться аллергические реакции: бронхоспазм, ангиневротический отек, кожные реакции и др. что вызывает применение их с большой осторожностью.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что динатриевая соль 2-(2,6-диметил-3,5-диэтоксикарбонил-1,4-дигидропиридин-4- карбоксамидо)глутаровой кислоты проявляет выраженный антиагрегантный эффект в отношении тромбоцитов.