штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба

Формула изобретения

ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS - ПРОДУЦЕНТ ФРАКЦИИ I ЧУМНОГО МИКРОБА.

Штамм бактерий Yersinia pestis КМ 949 (А 1435-30) - продуцент фракции 1 чумного микроба.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба.

Аналогов и прототипов изобретения, относящегося к штаммам обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба и продуцирующего повышенное количество фракции 1, в литературе не имеется.

Целью изобретения является селекция из лизинзависимого штамма чумного микроба А-1435-30 lys^- обратного лизиннезависимого мутанта, продуцирующего повышенное количество фракции I.

Сущностью изобретения является выявление штамма мутанта чумного микроба, обладающего повышенной продукцией фракции 1. Такой мутант выявлен у обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба А-1435-30 lys^-, который ранее был ауксотрофен по лизину.

Штамм А-1435-30 имеет типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства. Он растет в форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина). Оптимальная температура роста 27-28^oC, минимальная (еле заметный рост на 3 сутки) +2^oC, максимальная +40^oC. Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингера на 2-3 cутки - 2-3 мм, на пятые - 4-8 мм (при 28^oC выращивания). В мазках грамотрицательные, биполярные палочки. Высокочувствителен к диагностическому чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л/413. Штамм ферментирует с образованием кислоты без газа, глицерин, глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, рамнозу, дульцит, эритрит, мелибиозу, целлобинозу. Дает отрицательную реакцию нитрификации и положительную денитрификации. Имеет -налактозидазу, реакция Фогес-Проскауэра положительная, не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина. Желатин не разжижает, не расщепляет малоната и тартрата натрия. На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% непигментированных (pgm^-) колоний. Состоит из 0,5% кальций-независимых клеток. Имеет обычные для возбудителя чумы три плазмиды: р(Саd(pVir), pPst, pFra/Тoх). Каких-либо дополнительных плазмид не имеет. Растет при 28^oC на среде следующего химического состава, г: глюкоза 3, двузамещенный фосфорнокислый калий 7, однозамещенный фосфорнокислый калий 2, цитрат натрия 0,5, сернокислая магнезия 0,1, сульфит натрия 0,5, цистеин 0,05, фенилаланин 0,05, метионин 0,05, треонин 0,05, триптофан 0,05 (аминокислоты в ДЛ и Л-форме), дистиллированная вода - 1 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-агара). Штамм А-1435-30 авирулентен для лабораторных животных - морские свинки не погибают от 10⁸, а белые мыши - от 10⁵ микробных клеток при подкожном методе заражения.

Экспериментальную проверку повышенной продукции фракции I у штамма А-1435-30 проводили в сравнительном аспекте с эталонным вакцинным штаммом ЕV. Штаммы выращивали при 37^oC на агаре Хоттингера на протяжении трех дней. Затем готовили взвесь бактерий на физрастворе, содержащих 10⁹ микробных клеток для постановки реакции прямой гемагглютинации (РПГА) с антителами к фракции I. Опыты повторяли трижды с пятью сериями чумного эритроцитарного диагностикума, изготовляемого САНИПЧИ. Во всех опытах штамм А-1435-30 продуцировал фракции в 2-5 раза более, чем штамм EV, т.е. наличие фракции I выявлялось у первого штамма при наличии 2-3 тыс. в 0,1 мл, а у второго - 7-15 тыс. и более м.к.

Наличие повышенной продукции фракции I у штамма А-1435-30 приводит к экономии питательных сред и реактивов при получении фракции I для приготовления чумных диагностикумов, а именно питательные среды и реактивы используются в 2-5 раза менее, чем при получении фракции I у штамма ЕV.