способ лечения гнойных ран

Формула изобретения

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН путем нанесения на нее протеолитического фермента трипсина, отличающийся тем, что используют трипсин, иммобилизованный на высокопористой пенополиуретановой композиции, путем аппликации его на рану в дозе 1 мг на 0,2 мл композиции ежедневно до очищения раны.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для лечения гнойных ран.

Известен способ лечения гнойных ран путем нанесения на рану протеолитического фермента трипсина. Однако в этом способе нативный фермент недостаточно стабилен по отношению к температурным факторам, денатурирующим агентам экстремальных значений рН, быстро выводится из ран, дорогостоящий, что ограничивает его широкое применение в клинике.

В качестве прототипа изобретения принят способ лечения гнойных ран путем нанесения на рану кристаллического трипсина.

Целью изобретения является сокращение сроков лечения гнойных ран. Для достижения указанной цели используется аппликация на гнойную рану трипсина, иммобилизованного на высокопористой полиуретановой композиции.

Способ осуществляется следующим образом. На 60 белых беспородных крысах-самцах массой 150-200 г моделировали гнойную рану. Условия содержания и кормления животных были одинаковыми. Для проведения эксперимента было выделено II группы животных.

I. Инфицированные раны, леченные путем аппликаций кристаллического трипсина в дозе 1 мг на рану.

II. Инфицированные раны, леченные с помощью аппликаций иммобилизованного трипсина на высокопористой пенополиуретановой композиции в дозе 1 мг на рану.

Получение иммобилизованного трипсина на высокопористой пенополиуретановой композиции.

Приготовление полиэфирного (А) и изоцианатного (Б) форпродуктов. Компонент А содержит 94,5 мас.% лапрола 5003,2; 2,8% лапрола 402 и 2,7% активатора; активатор - 10% триэтилендиамин в воде (средняя мол.м. 5000). Компонент Б (суризон АММ) - предполимер на основе триэтиленгликоля, толуилендиизоцианата 80/20 полиизоцианата, соотношение по массе (1,8-2,2):(1,3-1,0). Готовый компонент: раствор продукта конденсации 32-36% в толуилендиизоцианате 80/2064-68% . Содержание NCO-групп 27,5%. Полученная полиуретановая композиция отличалась биосовместимостью, биодеградируемостью, высокопористостью; в отличие от ранее используемых различных матриц для иммобилизации протеолитических ферментов.

Иммобилизация трипсина.

К 0,2 мл компонента B добавляют 1 мг сухого трипсина (Spofa) и тщательно вручную перемешивают в течение 20-40 с. Перед нанесением на рану к полученной системе добавляют 0,6 мл компонента А и вновь тщательно вручную перемешивают в течение 10-15 с. После этого иммобилизованный трипсин на полиуретановой композиции наносят на рану. Через 2 мин пена перестает расти, через 8 мин - затвердевает. Соотношение компонент A:Б:фермент составляет 900: 300: 1. Полученные образцы препарата обладают высокой эластичностью и гигроскопичностью, сорбционными свойствами.

Модель инфицированной раны у крыс создавалась следующим образом: после иссечения кожного лоскута в лопаточной области 2 х 2 см (400 мм²) до мышечного слоя, проводилось раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера.

Затем в каждую рану вводилось по 2 мл 1 млрд. взвеси смешанной суточной культуры E. coli штамм 0111 К58 Н11 С 130-53 и Bacteroides frogilis штамм 373, полученных из государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича. Операция проводилась под баночным наркозом в нестерильных условиях. Лечение раны начинали через 48 ч, когда рана имела признаки острого гнойного воспаления. Перевязки производили один раз в 1-2 сут. Курс лечения длился в зависимости от скорости очищения раны.

Гистологическому исследованию подвергались ткани регенерата. С этой целью животных декапитировали через 1,3,6, 10, 15 и 25 сут после нанесения раны. Расплавленный струп вместе с гноем удаляли, оставшиеся ткани регенерата вместе с окружающей интактной кожей иссекали секторально, фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-1 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. Определение степени обсемененности ткани раны микроорганизмами осуществлялось с помощью метода стандартной платиновой петли.

Критериями заживления раны являлись: сроки очищения раны от гнойно-некротических тканей, сроки появления грануляций, сроки эпителизации раны и площадь раны. Измерение площади раны производилось по методу Л.И. Поповой (1942) один раз в 10 сут. Процент уменьшения площади раны находили по формуле:

где S - площадь предыдущего измерения (в мм²); S_n - площадь данного измерения (в мм²); S_t - число дней между измерениями.

Статистическую обработку проводили с помощью программ на микрокалькуляторе "Электроника-61" с вычислением критерия Стьюдента.

П р и м е р 1. В первой группе животных, леченных путем аппликаций кристаллического трипсина в дозе 1 мг на рану, через 1 сут после травмы во всех случаях отмечалась классическая картина гнойного воспаления, проявляющаяся отеком и гиперемией окружающих тканей. К 3-м сут в ране отмечался менее выраженный отек и гиперемия. К 6-м сут воспалительные явления шли на убыль, исчезала гиперемия вокруг раны. Рана очищалась от некротических тканей. Края раны были подрыты, имелось гнойное отделяемое в значительном количестве. Дно раны покрыто некротическими тканями. На 10-й день отмечалась небольшая отечность тканей, под краями раны имелось небольшое количество гнойного содержимого. Наблюдалась краевая эпителизация, уменьшение площади ран. Площадь ран составляла в среднем 45-50% от первоначальной. Полное очищение раны от гнойного содержимого наступало к 15 сут после начала лечения, что подтверждалось при бактериологических исследованиях. На 20-22 сут наступала полная эпителизация ран. При гистологическом исследовании у животных, леченных аппликациями кристаллического трипсина, в 1-е сут отмечено формирование отчетливого лейкоцитарного вала. Через 3-е сут после лечения наблюдался постепенный распад лейкоцитарного вала макрофагами и начиналась формирование грануляционной ткани, в которой преобладали молодые формы клеток фибробластического ряда.

Через 6 и 10 сут наблюдались дальнейшие процессы разрушения лейкоцитарного вала. Грануляционная ткань подвергалась дальнейшему созреванию. Среди клеток грануляционной ткани преобладали высокоактивные фибробласты: в несколько меньшем количестве встречались мононуклеары с преобладанием лимфоцитов. Через 15 сут. после начала лечения лейкоцитарный вал был в значительной степени разрушен. Отмечались признаки организации грануляционной ткани в рубцовую: уменьшение количества клеток, в первую очередь активных фибробластов, появление пучков коллагеновых волокон. На 15 сут лечение прекращалось. Расход кристаллического трипсина составлял в среднем 15 мг на курс лечения одного животного.

П р и м е р 2. Во второй группе животных на гнойную рану наносили высокопористую пенополиуретановую композицию с иммобилизованным трипсином в дозе 1 мг на рану. Через одни сутки после лечения отмечались умеренно выраженные явления нагноения. К 3-м сут воспалительные явления шли на убыль. Удаленная высокопористая полиуретановая композиция значительно была пропитана гноем, клеточными элементами лейкоцитарного вала. Отмечалась небольшая отечность тканей, признаки нагноения незначительные. Полное очищение раны от гнойного содержимого наступало на 5-6 сут после начала лечения, что подтверждалось при бактериологическом исследовании. Лечение прекращалось. Расход трипсина составлял 3 мг на курс лечения одного животного. Площадь ран на 10-е сут составляла в среднем 30-35% от первоначальной. К 15 сут практически завершалась эпителизация раневой поверхности.

Иммобилизованный трипсин на высокопористой пенополиуретановой композиции не вызывал побочных, аллергических реакций у животных при многократных аппликациях.

При гистологическом исследовании в 1-е сут после лечения в тканях регенерата наряду с нейтрофилами в значительном количестве встречались моноциты, лимфоциты и макрофаги. В межмушечной соединительной ткани воспалительная реакция была значительно менее выраженной, чем в I группе. Через 3 сут формировалась грануляционная ткань, в которой преобладали функционально активные фибробласты и лимфоциты. Через 6-10 сут происходило дальнейшее созревание грануляционной ткани. Признаки нагноения отсутствовали. К 15 сут отмечалась выраженная трансформация грануляционной ткани в фиброзную. Мощные эпителиальные пласты почти полностью перекрывали дефект. Через 25 сут после травмы на месте повреждения выявлялась окончательно сформированная рубцовая ткань.

Таким образом, проведенные экспериментальные исследования показали, что использование трипсина, иммобилизованного на высокопористой пенополиуретановой композиции, более эффективно, чем одного нативного трипсина (сокращаются сроки лечения и заживления ран, уменьшается расход препарата).

Преимуществом предлагаемого способа является:

впервые использован для лечения гнойных ран трипсин, иммобилизованный на высокопористой пенополиуретановой композиции;

применение иммобилизованного трипсина позволяет в 5 раз уменьшить расход препарата при лечении гнойных ран;

полное очищение ран при лечении иммобилизованным трипсином на высокопористой пенополиуретановой композиции происходит на 5-6 сут, т.е. на 9-10 сут раньше, чем при лечении нативным трипсином;

полное заживление ран под действием иммобилизованного трипсина на высокопористой пенополиуретановой композиции наступает на 15 сут, т.е. на 5-7 сут быстрее, чем при лечении нативным трипсином;

пенополиуретановая композиция с иммобилизованным трипсином обладает не только выраженной протеолитической активностью, но и адгезивными свойствами, что ускоряет очищение и заживление ран.