амид -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность
Классы МПК:
C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома
Изобретение относится к новому биологически активному соединению, конкретно к амиду -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом: 3-0-[2-0-(-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -D-глюкопиранозилураноил)- -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -D-глюкопиранозилураноил] -(3 -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, 20 -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">)-11,30-диоксо-30-(N-6-амино-2-тио-урацил)-30-норолеан-12-ен фор- мулы I
-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024547/2024547t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> проявляющему анти-СПИД активность. Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны. В настоящее время во всем мире интенсивно проводятся исследования по поиску средств лечения СПИДа. Известно уже более 50 препаратов, подавляющих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro [1]. Часть из этих соединений уже проходит клинические испытания на больных. Одним из таких препаратов является глицирризиновая кислота (ГК). В 1987-88 гг. работами группы японских исследователей установлено, что ГК-соединение, присутствующее в водном экстракте корня солодки (Glycyrrhiza glabra) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ в культуре клеток [2, 3]. Показано также, что введение ГК в высоких дозах (800-1600 мг/день) больным СПИДом вызывает у них увеличение содержания Т4 лимфоцитов и снижение количества вирусного антигена [4]. Механизм антивирусного действия ГК до настоящего времени остается неустановленным. Предполагается, что одним из факторов может служить блокирование ГК протеинкиназы [5], фосфорилирование которой молекулы Т4 рецептора необходимо для связывания вируса с Т4 рецептором [6]. Установлено также, что ГК непосредственно препятствует связыванию ВИЧ с клеткой [5]. Однако, ГК малоэффективна как ингибитор репликации ВИЧ на хронически инфицированных клетках. Целью изобретения является поиск новых соединений в ряду производных -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты (-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), обладающих анти-СПИД активностью. Цель достигается амидом -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК формулы (I), проявляющим анти-СПИД активность. Фармакологические свойства соединения
Противовирусная активность соединения (I) была изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в диметилсульфоксиде (ДМСО) (20 - 50 мг/кг) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0% . В предварительных опытах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4 сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). Для сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ) [7], механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК, и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновую кислоту (-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках. Основным недостатком АЗТ является его высокая токсичность [8]. Установлено, что исследованное соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 в концентрациях от 0,5 до 1,0 мг/мл. По уровню противовирусной активности амид (I) не уступает АЗТ и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК в концентрации 1,0 мг/мл. В отличие от АЗТ амид (I) оказывает менее выраженное токсичное действие на культуру клеток, причем снижение концентрации препарата приводит к исчезновению токсического воздействия на культуру клеток. Количество живых клеток в случае производного -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-ГК -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> в 8 раз выше (при концентрации 500 мкг/мл), чем в случае АЗТ и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> в 2,7 раз выше, чем в случае -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК в том же разведении. Соединение (I) менее токсично, чем АЗТ. ЛД50 амида (I) -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024012/8805.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> 7 г/кг. Соединение относится к III классу малоопасных веществ. Синтез амида (I) проводили путем обработки смеси -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты и 6-амино-2-тио-урацила в ДМФА - пиридине (5 : 1, v/v) N,N"-дициклогексилкарбодиимидом при 50-60оС в течение 6 час. Продукт кристаллизовали из смеси ДМФА - Н2О. Выход 65,2%. Таким образом, предложено новое малоопасное производное -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты - амид с 6-амино-2-S-урацилом (I), эффективно ингибирующий репродукцию ВИЧ-1 in vitro (в культуре клеток МТ-4), менее токсичный, чем азидотимидин. П р и м е р 1. Изучение анти-СПИД активности. Противовирусная активность соединения I была изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в ДМСО (20 - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных опытах было установлено, что ДМСО в указанных концентрациях не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4-е сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препарата сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК, и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновую кислоту (-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках. В таблице приведены результаты проведенных экспериментов. Установлено, что исследованное соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,5 до 1,0 мг/кг. По уровню противовирусной активности соединение не уступает АЗТ и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК в концентрации 1,0 мг/мл. В отличие от АЗТ амид (I) оказывает менее выраженное токсическое действие на культуру клеток, причем снижение концентрации препарата приводит к исчезновению токсического воздействия на культуру клеток. Количество живых клеток в случае амида (I) -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> в 8 раз больше (в разведении 500 мкг/мл), чем в случае АЗТ и -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> в 2,7 раз выше, чем в случае -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК в том же разведении. Таким образом, впервые установлена способность производного -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК - амида с 6-амино-2-S-урацилом (I) эффективно ингибировать репродукцию ВИЧ в культуре клеток. П р и м е р 2. Получение амида (I). К раствору 0,82 г (1 ммоль) глицирризиновой кислоты в 25 мл сухого ДМФА прибавляют 0,57 г (4 ммоль) 6-амино-2-S-урацила и 5 мл сухого пиридина, затем 0,7 г (3,4 ммоль) N,N"-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают смесь при 50-60оС в течение 6 час. Оставляют смесь на ночь при комнатной температуре, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат выливают в 200 мл холодной воды, подкисляют лимонной кислотой до рН -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> 3 и отфильтровывают осадок амида (I), промывают его водой несколько раз, сушат на воздухе, затем при 110-120оС. Получают 0,95 г (100%) целевого продукта, который кристаллизуют из ДМФА - воды. Выход 0,62 г (65,2%) амида (I), гомогенного по ТСХ (белый порошок). Т. пл. 198-200оС, [ -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">]D20 = +20 - +25oC (с = 0,02; диоксан). Rf = 0,52 - 0,55 (хлороформ-метанол-вода = 45 : 10 : 1). ИК, -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024165/957.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, см-1 (вазелиновое масло): 3600-3200 (ОН); 3328 (NH); 1720, 1700 (СООН); 1660, 1650 (С = 0); 1630, 1580 (пиримидин); 1540 (СОNH, амид II). УФ, -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024007/955.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">maxдиоксан (lg -глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024547" SRC="/images/patents/449/2024095/949.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">): 247 нм (3,99). Найдено, %: С 57,47; Н 6,87; N 3,58; S 3,88. С46Н65N3O16S. Мол. м. 948,06. Вычислено, %: C 58,27; H 6,91; N 4,43; S 3,38.
-глицирризиновой кислоты с 6-амино-2-тио-урацилом, проявляющий анти-спид-активность
,17
