амид -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность
Классы МПК: | C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома |
Автор(ы): | Балтина Л.А., Покровский А.Г., Плясунова О.А., Толстиков Г.А. |
Патентообладатель(и): | Институт органической химии УНЦ РАН |
Приоритеты: |
подача заявки:
1991-03-04 публикация патента:
15.12.1994 |
Использование: в качестве анти-СПИД средства. Сущность: продукт 3-0[2-0-( b -D-глюкопиранозилураноил)- b -D-глюкопиранозил-ураноил]-(3 b , 20 b )-11,30-диоксо-30-(N-L-гистидина метиловый эфир)-30-норолеан-12-ен, выход 43,9% БФ C49H67N3O17 . т.пл. 250 - 251°С [-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">]2D0 = +40°(С = 0,01, диоксанметанол).
Рисунок 1, Рисунок 2
Формула изобретения
Амид -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> - глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-гистидина общей формулы-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024543/2024543-2t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">
где
R = -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024543/2024543-3t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">
проявляющий анти-СПИД-активность.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к новому биологически активному соединению, конкретно, к амиду -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-гистидина: 3-0-[2-0-(-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -D-глюкопиранозилураноил)- -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-D-глюкопиранозилураноил]-(3 -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, 20 -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">)-11,30-диоксо-30-(N-L-гистидина метиловый эфир)-30-норолеан- -12-ен формулы I-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024543/2024543t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> проявляющему анти-СПИД активность. Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны. В настоящее время во всем мире интенсивно проводятся исследования по поиску средств лечения СПИДа. Известно уже более 50 препаратов, подавляющих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro [1]. Одним из таких препаратов является глицирризиновая кислота (ГК) [2-6]. Показано также, что введение ГК в высоких дозах (800-1600 мг/день) больным СПИДом вызывает у них увеличение содержания ТЧ лимфоцитов и снижение количества вирусного антигена [5] . Механизм антивирусного действия ГК до настоящего времени остается неустановленным. Однако, ГК малоэффективна как ингибитор репликации ВИЧ не хронически инфицированных клетках. Целью настоящего изобретения является поиск нового соединения в ряду производных -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты, обладающих анти-СПИД активностью. Поставленная цель достигается амидом -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-глицирризиновой кислоты формулы (I), проявляющим анти-СПИД активность. Фармакологические свойства описываемого соединения
Противовирусная активность описываемого соединения (I) изучалась на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор амида в диметилсульфоксиде (ДМСО) (25 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных опытах было установлено, что ДМСО в указанных концентрациях не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4 сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препаратов сравнения использовали очищенную -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновую кислоту (92-95%), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках in vitro, и один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обработкой транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК [7]. Основным недостатком этого препарата является его высокая токсичность [8]. Установлено, что амид (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,5 до 1,0 мг/мл (на 99,4-99,6%) (табл. 1). По уровню выявленной противовирусной активности соединение (I) аналогично АЗТ и -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК. Соединение (I) менее токсично, чем АЗТ. ЛД50 амида (I) > 7000 мг/кг. Соединение I относится к III классу малоопасных веществ. Синтез амида (I) проводят методом активированных (II-гидроксисукцинимидных) эфиров без предварительной защиты ОН-групп углеводной цепи молекулы гликозида. Выход амида (I) 43,9% . Аналитически чистый продукт получают путем перекристаллизации из диметилформамида - воды. Таким образом, новое малоопасное производное -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты - амид (I), эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 in vitro (в культуре клеток МТ-4), менее токсично, чем азидотимидин, обладающий анти-СПИД активностью, аналогичной активности АЗТ и -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК. П р и м е р 1. Изучение анти-СПИД активности. Противовирусная активность амида I была изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4 (in vitro). Растворы препаратов в ДМСО (20 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0% . В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4 сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препаратов сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ) и -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновую кислоту (-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), также эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках. Результаты опытов приведены в таблице. Как видно из данных таблицы, исследованное соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,5 до 1,0 мг/мл. По антивирусной (анти-ВИЧ) активности соединение (I) аналогично АЗТ и -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> - ГК. Таким образом, впервые установлена способность амида -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-гистидина (I) эффективно ингибировать репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток. П р и м е р 2. Получение амида (I). К раствору 1,64 г (2 ммоль) -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты (92-95%) чистоты в 50 мл сухого ДМФА при 0оС прибавляют 1,2 г (10,4 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 1,3 г (6 ммоль) N,N"-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают в ледяной бане 2-3 ч, при комнатной температуре 6 ч, оставляют на ночь в холодильнике, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, помещенному в ледяную баню, прибавляют 1,5 г (5,9 ммоль) метилового эфира L-гистидина (основания), 2 мл перегнанного триэтиламина и выдержали с периодическим перемешиванием 24 ч. Выливают смесь в холодную воду (300 мл), отфильтровывают осадок, промывают его водой и высушивают. Получают 0,96 г (49,2% ) амида (I), который переосаждают из ДМФА - Н2О. Выход аналитически чистого продукта 0,86 г (43,9%); аморфное вещество желтоватого цвета, Т разл. 250-251оС, [-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> ]D20 = +40о (с = 0,01; диоксан-метанол);
ИК, -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024165/957.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, см-1: 3600-3150 (ОН, NH); 1740 (СООМе); 1700 (СООН); 1660 (С=О); 1600 (имидазол); 1530 (NH). УФ, -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024007/955.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">max диоксан-метанол (lg -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром l - гистидина, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024543" SRC="/images/patents/449/2024095/949.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">): 220 нм (4,71); 265 нм (4,70). Найдено, %: С 59,23; Н 6,98; N 4,46. C49H67N3O17. Вычислено, %: С 60,42; Н 7,35; N 4,31.
Класс C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца
Класс C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома