штамм бактерий plesiomonas shigelloides 017 серовара, используемый для получения гипериммунной сыворотки

Формула изобретения

Штам бактерий Plesiomonas Shigelloides 017 серовара КМ N 55 (79), используемый для получения гипериммунной сыворотки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в вакцинно-сывороточном производстве для приготовления диагностических препаратов.

Известны штаммы шигелл Зонне NN 190, 3783, 19527, используемые при получении нативной сыворотки к бактериям S.sonnei I фазы. Однако они характеризуются высокой частотой естественной S-R диссоциации, которая составляет 10^-2-10^-3. Титры сывороток, получаемых при использовании указанных штаммов, невысоки - 1:400-1:600.

Целью изобретения является получение штамма, обладающего выраженными антигенными свойствами, обуславливающего получение сыворотки с высоким содержанием антител к антигенам I фазы шигелл Зонне и удобного в применении.

Цель достигается использованием для получения видоспецифических сывороток к шигеллам Зонне I фазы штамма P.shigelloides N 79, соматический антиген которого идентичен 0 антигену I фазы шигеллы Зонне. Он характеризуется стабильной антигенной структурой, так как не подвержен S-R диссоциации и индуцирует более высокие титры антител к шигеллам Зонне I фазы при иммунизации кроликов.

Предлагаемый штамм P.shigelloides N 79 выделен в Ленинграде в естественных условиях при поиске возбудителя в фекалиях при профилактическом обследовании. Депонирован в музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" под N КМ 55(79) от 12.03.91.

Характеристика штамма. Морфологически это грамотрицательные палочковидные клетки длиной 2,0-3,0 мк, толщиной 0,8-1,0 мк. Подвижные, не образующие спор. Штамм хорошо растет на обычных питательных средах, факультативный анаэроб. При росте на мясо-пептонном агаре штамм формирует колонии гладкого типа: круглые, слегка выпуклые, блестящие, с ровными краями, мелкозернистой структурой, прозрачные. Популяция бактерий не диссоциирует. При росте в жидких питательных средах растет в виде гомогенной суспензии, вызывая равномерное помутнение питательной среды.

Физиолого-биохимические признаки. Штамм растет в диапазоне температур от +5^о до +41^оС. В качестве источника углерода использует глюкозу.

Патогенные свойства. Не вызывает кератоконъюнктивита при конъюнктивальном заражении морских свинок, непатогенен для белых мышей при интраназальном их заражении.

Антигенность. Антигенная активность штамма выражена: в ответ на однократное внутривенное введение кролику массой 2,0-2,5кг 1,0 мл бактериальной суспензии концентрацией 500 млн микробных тел/мл уже на 6-й день после иммунизации с помощью реакции агглютинации определяли антитела к антигену 1 фазы шигелл Зонне в титрах 1:80-1:100. Максимальная концентрация антител наблюдается на 21-23-й день после 4-кратной внутривенной иммунизации: в этот период титр антител к антигену I фазы шигелл Зонне достигает 1:6400 и выше.

Использование штамма для приготовления гипериммунной сыворотки иллюстрируется следующим примером.

П р и м е р. Для получения гипериммунных сывороток агаровую культуру P. shigelloides N 79 в объеме 1 мл вводили кроликам внутривенно с интервалом в 4 дня в постепенно возрастающей концентрации - 500 млн м.кл. в 1 мл, 1 млрд, 2,3 млрд. Через 7-10 дней после последней иммунизации получали гипериммунную сыворотку. Титры антител к шигеллам Зонне I фазы у животных, зараженных P. shigelloides N 79, составили 1:6400-1:12800. Сыворотка не реагировала с другими антигенами шигелл (шигелла Флекснера, шигелла Бойда). Сыворотка, хранившаяся в замороженном состоянии при -20^оС не теряла своей активности в течение 4 лет (срок наблюдения). Для сравнения антигенных свойств заявляемого штамма с отечественными производственными, аналогичным способом получали сыворотку от кроликов, зараженных штаммом P.sonnei 3783 и 190. Титр сывороток у этих животных к антигену I фазы шигелл Зонне составил 1: 400-1: 1600, т.е. был значительно ниже, чем у животных, иммунизированных P.shigelloides N 79.