средство для борьбы против стресса у рыб и способ борьбы со стрессом у рыб

Формула изобретения

1. Применение триеновых стероидов формулы



где R - алкил с 1-4 атомами углерода, X - ацилпроизводное карбоновой кислоты с 1 - 18 атомами углерода (ацетат тренболон), в качестве средства для борьбы против стресса у рыб.

2. Способ борьбы со стрессом у рыб путем введения антистрессового препарата в среду обитания, отличающийся тем, что в качестве антистрессового препарата используют триеновый стероид формулы



где R - алкил с 1-4 атомами углерода, X - ацилпроизводное карбоновой кислоты с 1-18 атомами углерода (ацетат тренболон), а введение препарата осуществляют путем смешивания его с кормом в количестве 1 - 20 ч/млн. частей корма.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что обработке антистрессовым препаратом подвергают рыб пород Salmonides Cypranides циклоида, тиляпия, дорада, морской окунь.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что обработке подвергают форель или лосося.

5. Способ по п.3, отличающийся тем, что обработке подвергают карпа.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новому применению 4,9,11-триеновых стероидов в качестве средства для увеличения сопротивления рыб стрессу во время разведения.

Более конкретно, изобретение касается средства против стресса рыб, представляющего собой соединения формулы (I)

, (1) где R - радикал алкил с 1-4 атомами углерода и

X - радикал ацил, производный карбоновой кислоты, содержащей 1-18 атомов углерода.

Согласно изобретению предпочтительно используют соединения формулы (I)

, (1) в которой R - радикал метил;

OX - радикал ацетокси-, амилокси- или гексабензилоксикарбонил.

Рыба - это животное, разведение которой очень трудное; состояние здоровья ее прямо связано со средой, в которой она живет. Следовательно, всякое изменение среды может быть фактором стресса рыбы.

Среди этих факторов можно привести

физические факторы, такие как изменения температуры воды, изменения растворенного в воде газа;

механические факторы, такие как перевозка, перенаселение рыб в данном месте;

химические или биологические факторы, зависящие от микробов, вирусов и паразитов.

Рыба - это животное, очень чувствительное стрессу. Каждый раз, когда рыбу перемещают из бака в бак, из бака в пруд или во время калибровки при помощи сетей, возникает реакция стресса.

Реакция стресса приводит к значительным изменениям.

Внутренние изменения: выделение катехоламинов и кортикостероидов, которые значительно изменяют параметры крови, метаболизм и выделение.

Наружные изменения: кожица рыб более тонкая, чем надкожица высших позвоночных, и не содержит кератина, причем кожица покрывает чешую и, следовательно, она очень легко повреждается и оцарапывается во время манипуляций.

Часто во время манипуляций появляются болезни и смерти с различной интенсивностью, в зависимости от породы и возраста рыб и познаний специалиста по рыбоводству.

Уменьшение этой смертности, являющейся последствием манипуляций, представляло бы шаг вперед в области водной культуры.

Это достигается, в частности, применением ацетата тренболона (ТБА) (соединение формулы (I), где R = CH₃ и OX = OCOCH₃) в пище, предназначенной рыбам.

Соединение ТБА описано в Maurice Index, 10-е изд., рубрика 9402, как обладающее анаболическими свойствами.

Теперь открыли, что возможно получить прекрасные результаты у рыб пресной воды, рыб морской воды и рыб солоноватой воды в случае использования указанных выше соединений для устранения стрессовых состояний и их последствий.

Отличные результаты были получены при помощи средств изобретения на Salmonides, таких как форель или лосось, на Anouillides, таких как угорь, на Cypranides, таких как карп, на рыбе-циклоида, такой как тиляпия, и на морской рыбе, такой как дорада или морской окунь.

Следующие гистологические результаты были получены, исходя из данных ниже опытов.

Поджелудочная железа: меньше жирового перерождения в группе, обработанной ТБА, чем в контрольной группе.

Лучшая ирригация органа:

лучшее выделение инсулина из островков Лангернагса,

лучшее производство пищеварительных энзимов, что улучшает усвоение пищи.

Печень: меньше жировых отложений в группе, которая обработана согласно изобретению, что привело к улучшению ирригации и, следовательно, к улучшению печеночных функций,

очищение,

синтез.

Кожа: утолщение эпидермиса.

Уменьшение жирового перерождения подкожного мускула.

По предпочтительному методу выполнения введение средства осуществляют через рот, причем продукт может быть введен в еду для рыб.

В качестве еды для рыб можно употреблять коммерческие смеси, содержащие рыбную муку, протеины, дрожжи, муку сои и витамины, которые находятся в виде порошка или гранул.

В частности, согласно изобретению лекарство применимо к лососю, форели или угрям.

В частности, продукт формулы (I) вводится в пищу для рыб в дозе 1-20 ч. на миллион (т.е. вес действующего начала) на вес пищи рыб, например в дозе 5-15 ч. на миллион.

Особенно продукт формулы (I) употребляется во время разведения рыб для увеличения сопротивления рыб стрессу.

Кроме того, изобретение увеличивает сопротивление грибкам, вирусам, бактериям и другим патогенным факторам.

Особенно ценно, что изобретение эффективно, когда патогенным фактором является SAPROLEGNIE, так как этот патогенный фактор трудно поддается лечению.

Очень хорошие результаты были получены при введении лекарства изобретения в целях терапии за 20-30 дней до фактора, вызывающего стресс, например до перемены бака.

Позология в день может изменяться от 0,1 до 0,5 мг/кг от веса рыбы в день.

П р и м е р ы:

а) Готовят порошок, предназначенный для рыб, содержащий продукт ТБА, соответственно 10 мг продукта ТБА на 1000 г смеси.

б) Готовят пищу для рыбы, содержащую 1000 г муки, 700 г воды, 70 г арахисового масла, 17,7 мг ТБА.

Смесь гомогенизируют механическим перемешиванием.

Приготовленная пища содержит 10 мг действующего начала ТБА на 1 кг.

Биологический протокол.

Метод опыта.

Рыбы, Oncorhynchus kisutch (Лосось Кохо), разведенные в пруде аквакультуры, были выпущены в баки разведения в день 0 таким образом, что каждая группа состоит из 70 рыб. Все рыбы были внешне нормальны и одинаковы между собой в смысле телесного размера (очень большие и маленькие рыбы были исключены), причем средний телесный вес был 22,2-22,4 г в каждом баке.

Рыбы были запущены во время акклиматизации. Кормление рыб осуществляли таким образом, чтобы они потребляли корм в количестве, соответствующем в общем 1,8 мас. % от общего телесного веса рыб в каждом баке. Потребление пищи рыбами было полностью стабилизировано в день 6, и, следовательно, введение ТБА началось в тот же день. Введение кончилось в день 25. В течение этих 25 дней корм давали в течение 21 дня (кроме воскресений). Корм был дан в количестве, соответствующем 1,8% от телесного веса рыбы. Это количество было одинаково для обработанной группы и для контрольной группы.

Корм был приготовлен следующим cпособом:

Воду, соответствующую половине пищевого порошка (по объему), и определенное количество жидкого столового масла прибавляют к корму для форели (порошок). Смесь вводят в мешок из полиэтилена, а затем измельчают с образованием однородной смеси. Затем смесь прессуют и формуют, а затем сушат на воздухе.

Во время приготовления корма для группы, которая предназначена для обработки ТБА, ТБА был сначала растворен в жидком столовом масле при точном процентном соотношении так, чтобы окончательное содержание ТБА было 10 мг/1000 г пищи (10 ч. на миллион). Оно изменяется от 0,2 до 0,5 мг ТБА на 1000 г телесного веса.

Условия разведения.

Рыбы были выпущены в баки каждый объемом в 30 см 70 см 20 см (глубина воды: 25 см), по 70 рыб на бак. Температура воды была выдержана при 8,8-10,2^оС и расход воды - при 3-5 л/мин.

Описание опыта с Saprolegniase.

Согласно методу "АМИМОМИ" доктора Хошиаи (опыт механического стресса или встряхивания сетки) рыбы подвергают стрессу, в результате которого они понесли эпителиальный ущерб. Чтобы увеличить надежность исследования, оно было выполнено в различных условиях: число рыб в тесте "АМИМОМИ" было 5 или 10, и время "АМИМОМИ" - 30 с, 1 мин или 2 мин. Чтобы подвергнуть рыб заражению зооспорами Saprolegnie, рыбы были выпущены в воду, содержащую 2 х 10 зооспор на 1 л воды. Во время опыта вся вода баков 60 см х30 см х 45 см (глубина воды: 40 см) менялась каждые 3 дня. Поражение зооспорами и наблюдение за рыбами продолжались 14 дней, от 22 сентября до 6 октября. В это время снабжение водой было остановлено; аэрация продолжалась; температура воды выдерживалась при 12-13^оС. В течение разведения снабжение водой обеспечивалось 2 трубами с учетом возможного случайного повреждения одной трубы, например, в результате сильного дождя и т.п.

Результаты и обсуждение теста заражения.

Результаты опытов показаны на фиг.1-6 следующим образом.

Каждая фигура показывает число зараженных рыб в группе контроля и в группе, обработанной ТБА, и число мертвых рыб (только среди контрольных рыб, так как никакая смертность не была отмечена в группе, обработанной ТБА).

День 0 - день для опыта стресса.

Фиг.1 - опыт стресса : 30 с на 5 рыбах.

Фиг.2. - опыт стресса : 30 с на 10 рыбах.

Фиг.3 - опыт стресса : 60 с на 5 рыбах.

Фиг.4 - опыт стресса : 60 с на 10 рыбах.

Фиг.5 - опыт стресса : 120 с на 5 рыбах.

Фиг.6 - опыт стресса : 120 с на 10 рыбах.

а) Тенденция, отмеченная в контрольной группе.

Для того же числа рыб, чем длиннее время "АМИМОМИ", тем выше процент заражения, тем раньше проявляются симптомы, тем выше смертность и тем быстрее рыбы умирают. Это значит что, чем длиннее время "АМИМОМИ", тем сильнее стресс и тем серьезнее травма. Для того же времени "АМИМОМИ", чем меньше число рыб в тесте "АМИМОМИ", тем скорее развиваются симптомы и тем выше возможность заражения.

Та же тенденция наблюдается в отношении следующих параметров: условия среды, такие как размер баков, число зооспор на бак, температура воды разведения, и т.п.; чем меньше число рыб на "АМИМОМИ", тем выше число поражающих зооспор на рыбу.

б) Тенденция, наблюдаемая в группе, обработанной ТБА.

В общем тенденция одинакова с той, которая наблюдалась в группе контроля. Однако группы, обработанные ТБА, показывали большую разницу результатов по отношению к группам контроля по следующим пунктам.

У рыб, которые были подвергнуты тесту "АМИМОМИ" в группе 5, заражение появилось на 3-й день и потом оно исчезло на 6-й день, независимо от времени "АМИМОМИ". Однако чем продолжительнее тест "АМИМОМИ", тем выше был процент заражения. В случае, когда рыбы были подвергнуты "АМИМОМИ" в группе 10 и где "АМИМОМИ" продолжалось до 30 с, заражение появилось на 4-й день и исчезало на 9-й день. Для рыб, которые были подвергнуты "1 мин АМИМОМИ" в группе 10, заражение появилось на 1 день раньше, т.е. на 3-й день, но они стали нормальными на 9-й день. В этой последней группе процент заражения был выше, чем процент группы "30 с АМИМОМИ". Группа "2 мин АМИМОМИ" показала практически ту же тенденцию, что и группа "1 мин АМИМОМИ", причем все рыбы излечиваются от Saprolegniase, за исключением рыбы, у которой болезнь еще была подтверждена в последний день. Кроме того, процент заражения был ниже, чем в группе "1 мин АМИМОМИ".

При анализе, сравнивающем условия заражения рыб одной и той же группы по времени "АМИМОМИ", получены следующие результаты.

В "группе 2 мин АМИМОМИ" процент заражения был намного выше, чем в группе "АМИМОМИ с 5 рыбами".

В группе "30 с и 1 мин АМИМОМИ" не было никакой разницы, за исключением того, что выздоровление на 100% было осуществлено позже, чем в группе в 2 мин.

Основываясь на сказанном выше, можно сделать заключение о том, что, если рыбы поражены зооспорами, то рыбы, обработанные ТБА, сразу заражаются, но быстро освобождаются от гифа, а затем выздоравливают. Значит, профилактика против Saprolegniase достигается обработкой ТБА.

в) Разница между группами.

В группе "АМИМОМИ с 5 рыбами" и в группе "АМИМОМИ с 10 рыбами" заражение было замечено на 1-2 дня позже, и степень заражения была много слабее в сравнении с группами контроля независимо от времени "АМИМОМИ". Если сравнивают две группы в одинаковых условиях, то оказывается, что процент заражения слабее, выздоровление появляется раньше, и не наблюдается никакой смерти в группе, обработанной ТБА. В группе ТБА (10 рыб) в "2 мин АМИМОМИ" только одна рыба не поправилась.