способ отбора лиц для лечения иммуностимуляторами

Формула изобретения

СПОСОБ ОТБОРА ЛИЦ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРАМИ, включающий исследование иммунологического статуса больного с последующим сопоставлением полученного показателя с контролем, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, иммунологический статус определяют по уровню антимикробной активности капиллярной крови в присутствии биологически активного вещества в реакции торможения пассивной гемагглютинации, при этом кровь обрабатывают микробным антигеном и биологически активным веществом, взятым в концентрации, подобранной предварительно при исследовании зависимости доза - эффект, а отбор пациентов для лечения иммуностимуляторами проводят в случае увеличения антимикробной активности крови в сравнении с пробой, в которую биологически активное вещество не добавляли.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для отбора лиц для лечения иммуностимуляторами.

Прототипом исследований является методика исследования фагоцитарной активности лейкоцитов.

Цель изобретения - упрощение способа.

Указанная цель достигается путем определения иммунологического статуса по уровню антимикробной активности капиллярной крови в присутствии биологически активного вещества в реакции торможения пассивной гемаглютинации (РТ ПГА), при этом кровь обрабатывают микробным антигеном и биологически активным веществом, взятом в концентрации, подобранной предварительно при исследовании "доза-эффект", а отбор пациентов для лечения иммуностимуляторами проводят в случае увеличения антимикробной активности крови в сравнении с пробой, в которую биологически активное вещество не добавляли.

Способ осуществляется следующим образом.

В центрифужную пробирку к 0,1 мл крови, взятой из пальца обследуемого лица и стабилизированной гепарином из расчета 50 АЕ, добавляют 0,1 мл раствора, содержащего биологически активное вещество. Концентрацию этого вещества подбирают в предварительных исследованиях "доза - эффект". Установлено, что дибазол повышает антимикробную активность крови в дозе 0,1-0,01 мг/мл, глюкоза - 10-20 ммоль/л, левамизол - 0,2-0,02 мг/мл. В контрольную пробирку с кровью приливают 0,1 мл физраствора. Пробы смешивают и выдерживают при температуре 36,5-37^оС в течение 20-30 мин. Затем для оценки агнтимикробной активности крови к пробам добавляют по 0,1 мл раствора антигена Мигелл Зонне, Ньюкестл, Флекнера и другие с высокой активностью, составляющей 8,0 и более АЕ/0,1 мл в РТПГА. Эта доза антигена полностью блокирует активность гуморальных и клеточных факторов крови и частично сохраняет свою активность в отношении индикаторной дозы иммунной сыворотки. Пробы смешивают и обрабатывают при температуре 36,5-37,0^оС в течение 10-15 мин, затем охлаждают при температуре 3-5^оС в течение 25-30 мин и приливают к пробам иммунную сыворотку, специфичную к антигену, титром 8,0 и более в РПГА.

Раствор иммунной сыворотки готовят из 0,1 мл неадсорбированной иммунной сыворотки, приложенной к антигенному эритроцитарному диагностикуму для контрольных исследований. С этой целью сыворотку разводят в 5-6 мл физического раствора и для осаждения ее конгломератов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочный раствор иммунной сыворотки разводят в 100 мл физраствора. Определяют титр антител по инструкции с использованием макроварианта постановки РПГА. При необходимости в день исследования сыворотку дополнительно разводят физраствором.

Одновременно ставят контрольные исследования. Для этой цели к 0,1 мл раствора антигена, использованного для определения антимикробной активности крови, добавляют 0,2 мл физраствора. Контролем является проба с содержанием 0,3 мл физраствора.

После добавления иммунной сыворотки к смеси и контрольным пробам их обрабатывают при температуре 3-5^оС в течение 20-30 мин, затем центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Надосадочный раствор с остаточной активности сыворотки переносят в лунку первого ряда планшета для макроварианта постановки РПГА и определяют антимикробную активность крови по остаточной активности антигена в АЕ РТПГА.

П р и м е р 1. Отбор лиц для лечения экстрактом элеутерококка и поливитаминами.

Исследования проводили с кровью 13 детей, длительно и часто болеющих. К 0,1 мл крови добавляли 0,1 мл раствора с содержанием дибазола в дозе 0,1 мг/мл. К контрольной пробе крови приливали 0,1 мл физраствора. Пробы обрабатывали при температуре 37^оС в течение 30 мин. Для определения антимикробной активности крови добавляли по 0,1 мл раствора антигена Мигелл Зонне активностью 8 АЕ/0,1 мл в РТПГА. Смесь выдерживали при температуре 37^оС в течение 10 мин, охлаждали 15 мин при температуре 5^оС. Добавляли к смеси по 0,5 мл иммунной сыворотки к Мигеллам Зонне титром 12 в 0,5 мл РПГА. Пробы обрабатывали при температуре 5^оС в течение 15 мин. После центрифугирования смеси определяли антимикробную активность крови в АЕ РТПГА.

В результате исследований установили, что средняя исходная величина антимикробной активности крови составляет 4,0 АЕ, индивидуальные колебания - от 1,5 до 6,5 АЕ.

После взаимодействия крови ин витро с дибазолом отличается статистически достоверное повышение антимикробной активности крови. Однако отличаются существенные различия в уровнях изменения антимикробной активности крови. С учетом направленности изменения антимикробной активности крови всех детей делили на две группы: к 1-й отнесли с повышением, к 2-й со снижением ее уровня.

Детей лечили в течение 4 недель экстрактом элеутерококка и поливитаминами.

После лечения, как и прогнозировалось, у всех 10 детей 1-й группы отмечается повышение антимикробной активности крови, а у 2-й группы, наоборот, определяется снижение или ее величина не меняется. Коэффициент корреляции между уровнями повышения антимикробной активности крови ин витро под влиянием дибазола и после лечения иммуностимуляторами (адаптогенами) составляет +0,95 0,03, р < 0,001.

Таким образом точность отбора лиц для лечения адаптогенами в данной серии исследований повышается с 77% до 100% .

П р и м е р 2. Отбор детей с соматическими заболеваниями для лечения адаптогенами.

Исследования проведены с кровью 22 детей 5-7-летнего возраста. До начала лечения к 0,1 мл крови, взятой из пальца, добавляли 0,1 мл раствора с содержанием глюкозы в дозе 15 ммоль/л, к контрольным пробам приливали 0,1 мл физраствора. Смесь обрабатывали при температуре 36,5^оС в течение 30 мин. Для определения антимикробной активности крови к смеси добавляли по 0,1 мл антигена мигелл Ньюкестл активностью 15 АЕ в РТПГА. Пробы выдерживали 13 мин при температуре 36,5^оС, охлаждали при температуре 5^оС в течение 25 мин. К смеси добавляли по 0,5 мл иммунной сыворотки к мигеллам Ньюкестл титром 16 в 0,5 мл РПГА. Пробы обрабатывали при температуре 5^оС в течение 25 мин, центрифугировали и определяли антимикробную активность крови в АЕ.

Установили, что средняя исходная величина антимикробной активности крови составляет 4,6 АЕ. Индивидуальные вариации 2,0-9,0 АЕ.

После взаимодействия крови ин витро с глюкозой отличается статистически достоверное повышение антимикробной активности крови. С учетом характера изменений и величины детей делили на 2 группы: к 1-й группе отнесли лиц с повышением, к 2-й со снижением или без изменений антимикробной активности крови.

Детей в течение 4 недель лечили в условиях санатория "Светлана" г. Перми. Кроме базисной терапии в условиях санатория детям лечение проводили адаптогенами: витаминами группы В₁, В₆, В₁₂, В₁₅, А, Е и С в возрастных дозах, экстрактом элеутерококка.

В результате исследований установлено, что после лечения, как и предсказывалось у всех 12 детей 14-й группы, отмечается повышение антимикробной активности крови, а из 10 детей 2-й группы у 3 наблюдается снижение, у 5 - без изменений и только у 2 детей определяется несущественная склонность к повышению ее величины.

Таким образом материалы исследований, изложенные в этом примере, подтверждают возможность использования заявляемого способа для индивидуализированного подхода при лечении больных адаптогенами - точность отбора для лечения повышается в этой серии исследований с 77% до 91% .

П р и м е р 3. Отбор часто и длительно болеющих детей для лечения дибазолом.

Исследования проведены с кровью 13 детей 5-6-летнего возраста. К 0,1 мл крови, взятой из пальца, добавляли 0,1 мл раствора глюкозы в дозе 20 ммоль/л, к контрольным пробам - 0,1 мл физраствора. Смесь обрабатывали при температуре 37^оС - в течение 20 мин. Для оценки антимикробной активности крови в каждую ее пробу добавляли по 0,1 мл антигена из мигелл Ньюкестл активностью 13,5 АЕ. Пробы выдерживали при температуре 3^оС в течение 20 мин. К смеси приливали по 0,5 мл иммунной сыворотки к мигеллам Ньюкестл титром 16 в 0,5 мл РПГА. Смесь обрабатывали при температуре 5^оС в течение 20 мин, центрифугировали и определяли антимикробную активность крови.

Выявили, что средняя исходная величина антимикробной активности крови составляет 3,5 АЕ, индивидуальные вариации - 1,0-7,0 АЕ.

После взаимодействия крови ин витро с глюкозой отмечается статистически достоверное повышение антимикробной активности крови. По уровню изменения ее величины всех детей делили на две группы - к 1-й группе отнесли с повышением, к 2-й - со снижением или без изменения антимикробной активности крови.

Детей лечили дибазолом в возрастных дозировках.

Установлено, что у всех 8 лиц 1-й группы как и прогнозировалось, отмечается после лечения дибазолом повышение антимикробной активности крови, а у 2-й группы ее величина не меняется или отмечается снижение ее уровня. Коэффициент корреляции между уровнями изменения антимикробной крови ин витро под влиянием глюкозы и после лечения дибазолом составляет r + 0,90 0,05, p < 0,001.

Результаты этой серии исследований подтверждают возможность индивидуализированного подхода при лечении больных - точность отбора лиц для назначения дибазола повышается с 92% до 100% .

Таким образом приведенные в примерах материалы исследований убедительно подтверждают существенные преимущества заявляемого способа в сравнении с прототипом. Заявляемый способ отличается высокой объективностью - точность отбора лиц для лечения адаптогенами (иммуностимуляторами) повышается по средним данным, с 84% до 97% .

Заявляемый способ отличается малой трудоемкостью: при серийных исследованиях для определения одного показателя антимикробной активности крови требуется не более 10 мин, экспрессностью - результаты исследований известны через несколько часов после опытов; экономичностью - для определения антимикробной активности крови не требуются дорогостоящие реактивы, аппаратура и т. д.

В то же время способ определения фагоцитоза в стадии подсчета результатов исследований, особенно микроскопическим методом, отличается субъективностью, большой трудоемкостью. При изучении фагоцитоза требуются растворы для фиксации и покраски мазков.

Важным преимуществом заявляемого способа является то, что авторами впервые в медицине обосновывается универсальный характер неспецифического изменения антимикробной активности крови при ее взаимодействии ин витро с биологически активными веществами (иммуностимуляторами, адаптогенами) и при лечении больных этими препаратами. Эта универсальность проявляется прежде всего тем, что независимо от адаптогена и нозологической единицы заболевания отмечается высокая обратная корреляция уровня повышения антимикробной активности крови от ее исходной величины ин витро и при лечении больных этим препаратом. В тоже время наблюдается прямая зависимость между уровнями повышения антимикробной активности крови ин витро и после лечения больных адаптогенами.

Выявленный унвиверсальный характер повышения антимикробной активности крови под влиянием адаптогенов позволяет значительно повысить точность, упростить отбор лиц для лечения адаптогенами и иммуностимуляторами.

Дополнительным преимуществом заявляемого способа является то, что при отборе лиц для лечения адаптогенами используется оригинальная методика определения антимикробной активности крови. Эта методика в сравнении с известными в иммунологии способами отражает интегральный результат взаимодействия крови с микробным антигеном - позволяет одномоментно оценить способность гуморальных и клеточных факторов крови, блокировать активность антигена. Показатель антимикробной активности крови на 80% состоит из активности блокированного антигена гуморальными факторами крови и около 20% приходится на ее клеточные элементы - эритроциты, фагоциты и др. Указанное преимущество заявляемого способа с учетом ее высокой точности, экономичности и малой трудоемкости позволяет его использовать для отбора лиц с целью лечения иммуностимуляторами и адаптогенами. (56) Иммунология. Практикум. Киев. 1989, с. 265-275.