набор для диагностики энтеровирусной пневмонии свиней

Формула изобретения

НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ, включающий емкости с антигеном и специфической сывороткой, для постановки реакции нейтрализации, отличающийся тем, что из антигенов используют антигены И 47, Ж 53, В 173, Р 190, И 54, Ж 75, В 161, Ч 72, Р 221, П 142, В 151, из сывороток используют сыворотки к штаммам Enterovirus suis-2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22 и дополнительно для постановки реакции прямой иммунофлюоресценции содержит емкости с флуоресцирующими иммуноглобулинами, к штаммам Enterovirus suis 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к проблеме диагностики вирусных болезней животных и применяется для качественного и количественного иммунологического анализа энтеровирусных антигенов и антител в образцах органов и крови свиней с целью дифференциальной диагностики энтеровирусной пневмонии свиней.

Энтеровирусная пневмония свиней представляет собой болезнь, часто встречающуюся в свиноводческих хозяйствах, проявляющуюся в повышении температуры тела, чихании, кашле, потере аппетита, отставании в росте. В 4% случаев болезнь приводит к летальному исходу.

Энтеровирусную пневмонию вызывают вирусы, принадлежащие к семейству Picornaviridae, роду Enterovirus, виду Enterovirus suis, 2, 3, 4, 5, 8 серотипов, согласно Дюну с соавт. и Дербиширу.

Диагностика энтеровирусной пневмонии свиней осуществляется на основании результатов комплекса исследований: клинических, патологоанатомических, вирусологических и иммунологических. Поскольку клинические и патологоанатомические признаки болезни сходны с таковыми при пневмониях, вызываемых другими микроорганизмами, решающее значение в постановке диагноза энтеровирусной пневмонии свиней приобретают вирусологические и иммунологические исследования.

В качестве диагностических методов используют: выделение энтеровирусов в культуре клеток, обнаружение антигенов в легочной ткани и обнаружение антител в сыворотках крови больных и переболевших животных.

Выявление антител к энтеровирусам имеет этиологическое значение только при наличии комплекса симптомов, патологических изменений в организме животных и циркуляции в стаде энтеровирусов, идентичных с антителами серотипов.

Целью изобретения является получение средства для комплексной диагностики энтеровирусной пневмонии свиней иммунологическими методами, позволяющего увеличить достоверность и точность постановки диагноза и сократить время проведения анализа.

Цель достигается тем, что в набор для диагностики энтеровирусной пневмонии свиней включены антигены, специфические сыворотки и иммуноглобулины к новым серотипам Enterovirus suis 21, 22, дополнительно к ранее известным серотипам Enterovirus suis 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17; компоненты набора приготовлены с применением селекционированных штаммов И47, Ж53, В173, Р190, И54, Ж75, В161, Ч72, Р221, П142, В151, обладающих повышенной активностью и специфичностью, а также тем, что, с целью сокращения времени постановки диагноза проводят комплекс исследований: экспресс-диагностику методом прямой иммунофлуоресценции, идентификацию вирусов специфическими сыворотками в культуре клеток и ретроспективный анализ сывороток крови с помощью антигенов И47, Ж53, В173, Р190, И54, Ж75, В161, Ч72, Р221, П142, В151, соответственно 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22 серотипов Enterovirus suis.

Штаммы Enterovieus suis 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22 серотипов для получения компонентов набора диагностикумов энтеровирусной пневмонии свиней:

- Штамм И-47 Enterovirus suis-2 выделен от поросенка 2-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего колхозу "Червоний партизан" Ичнянского района, Черниговской области, в 1982 г; депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N И47-ДЕЛ.

- Штамм Ж-53 Enterovirus suis-3 выделен от поросенка 2,5-месячного возраста, принадлежавшего колхозу "Дружба", Андрушевского р-на, Житомирской обл, в 1983 г; депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N Ж-53 ДЕП.

- Штамм В 173, Enterovirus suis-4 выделен от поросенка 3-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего с-зу "Журавский", Варвинского р-на, Черниговской обл. , в 1988 г; депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N В-173-ДЕП.

- Штамм Р-190 Enterosirus suis-5 выделен от поросенка 2,5-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего свинокомплексу "Искра", Рязанского р-на, Рязанской обл. в 1989 г; депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N Р-190-ДЕП.

- Штамм И-54 Enmterovirus suis-8 выделен от поросенка 2-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего к-зу "Червоний партизан", Ичнянского р-на, Черниговской области, в 1984 г. , депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N И-54-ДЕП.

- Штамм Ж-75 Enterovirus suis-14, выделен от поросенка 3-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего свинокомплексу к-за "Комсомолец Украины", Чудновского р-на, Житомирской области, в 1986 г. , депонирован в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов под N Ж-75-ДЕП.

- Штамм В-161 Enterosirus suis-16 выделен от поросенка 2,5-месячного возраста, больного пневмонией, принадлежавшего с-зу "Перемога" Луцкого р-на Волынской обл. , в 1988, депонирован в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов под N Ж-57, ДЕП.

- Штамм Ч-72 Enterovirus suis-15 выделен от больного пневмонией поросенка, принадлежавшего к-зу "Шлях Ленина", Черниговского р-на, Черниговской обл. , в 1986 г. , депонирован в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов под N Ч-72 ДЕП.

- Штамм Р-221 Enterovirus suis-17 выделен от больного пневмонией поросенка, принадлежавшего свинокомплексу "Искра", Рязанского р-на, Рязанской обл. , в 1989, депонирован в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов под N Р-221-ДЕП.

- Штамм П-142 Enterovirus suis-21 выделен на свиноферме колхоза им. Энгельса, Полтавского района, Полтавской области от 5-месячного поросенка, больного пневмонией в 1988 году. Присвоен регистрационный N 14 в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов.

- Штамм В-151 Enterovirus suis-22 выделен на свиноферме к-за им. Шевченко, Луцкого района, Волынской обл. , от больного пневмонией 3,5-месячного поросенка в 1988 году. Присвоен регистрационный N 15 в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов.

Штаммы являются РНК-содержащими, размер вирусных частиц 26-28 нм; липидсодержащая оболочка отсутствует - (устойчивы к эфиру и хлороформу); резистентны к трипсину, средам со значениями рН 2,0-12,0, относительно термостабильны; обладают репродуктивными и блашкообразующими свойствами; в культуре прерываемой линии клеток СПЕВ размножаются с активностью 10^7,0-10^8,0 ТЦД50/мл; вызывают сероконверсию у кроликов: в гипериммунных кроличьих сыворотках вирусонейтрализующие антитела обнаруживают в титре 1: 256-1: 2048; в реакции нейтрализации родственны референтным штаммам энтеровирусов свиней соответственно 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22 серотипов.

На основе прототипных штаммов энтеровирусов свиней были приготовлены специфические антигены, антисыворотки и флуоресцирующие иммуноглобулины.

Антигены представляют собой лиофилизованные вируссодерожащие культуральные суспензии энтеровирусов свиней, 2, 3, 4, 5, 8, 14, 15, 16, 17, 21, 22 серотипов с наполнителем при следующем соотношении компонентов, мас. % :

- Вируссодержащая суспензия с содержанием в 1 мл 10^6,0-10^0,8 ТЦД50/мл вируса в поддерживающей среде, состоящей: среда 199 30,0-33,0

0,5% гидролизат лактальбумина 30,0-33,0

- Наполнитель, состоящий:

желатоза 4,5% концен-

трации на дистилли- рованной воде 11,0-13,0

пептон 15% концен-

трации на дистилли- рованной воде 12,0-14,0

- сахароза 15% концен-

трации на дистилли- рованной воде 11,0-13,0

Входящие в состав антигенов среда 199 и 0,5% гидролизат лактальбумина состоит:

1. Среда 199 (мг в 1000 мл раствора эрла):

л - Аргинина - хлор- гидрата 70,0

л - Гистидина - хлор- гидрата 20,0

л - Лизина - хлор- гидрата 70,0 л - Тирозина 40,0 дл - Триптофана 20,0 дл - Фенилаланимина 50,0 л - цистина 20,0 дл - Метионина 30,0 дл - Серина 50,0 дл -% Треонина 60,0 дл - Лейцина 120,0 дл - Изолейцина 40,0 дл - Валина 50,0 дл - Глютаминовой кислоты 150,0 дл - Аспарагиновой кислоты 60,0

Никотиновой кислоты

(витамина РР₁, ниа- цина) 0,025 дл - Аланина (альфа) 50,0 л - Пролина 40,0 л - Гидроксипролина 10,0 Гликоколла (глицина) 50,0 л - Цитеина 0,1 Аденина - cульфата 10,0

Гуанина-хлорги- драта (HCl) 0,3 Кcантина 0,3 Гипоксантина 0,3 Урацила 0,3 Метилурацила 0,3

Тианина (витамина В₁) - хлоргидрата 0,01

Пиридоксаля (альде-

гида витамина В₆, пи- ридоксаля-хлоргидрата) 0,025 Рибофлавина (вита- мина В₂) 0,01

Витамина С (аскор- биновой кислоты) 0,05

Никотинамида (ниаци- намида) 0,025 Пантотената кальция 0,01