амиды ламбертиановой кислоты, обладающие анальгетической активностью и стимулирующим действием

Формула изобретения

Амиды ламбертиановой кислоты, формулы (Iа, б)

,

где ;

обладающие анальгетической активностью и стимулирующим действием.

Описание изобретения к патенту

зобретение относится к органической химии, конкретно - к новым амидам ламбертиановой кислоты, формулы (Ia, б)

где ;

обладающим анальгетической активностью и стимулирующим действием.

Указанные свойства позволяют предполагать возможность использования соединений в медицине в качестве фармацевтического препарата.

В последние годы при создании обезболивающих препаратов внимание уделяется поиску центральных анальгетиков не пептидной структуры. Эти соединения взаимодействуют с различными типами опиоидных рецепторов ЦНС, что приводит к изменению болевого сигнала. Сам болевой сигнал при этом не устраняется и продолжает передаваться через местные болевые рецепторы в ЦНС, но у пациента возникает ощущение отчужденности от боли. Опиоидные агонисты используются в клинике для снижения болевой реакции при опухолевых заболеваниях, хронической боли и простуде [Aldrich J.V., Vigil-Cruz S.C., in Burger s Medicinal Chemistry and Drug Discovery. 6-th ed.; Abraham D.A., Ed., John Wiley: New York, 2003. Vol.6. P.329-415]. Доклиническими исследованиями установлено, что опиоидные агонисты могут найти применение при лечении зависимости от стимуляторов ЦНС [Prisinzano Т.Е., Tidgewell K., Harding W.W. AAPS J. 2005, V.7. E592]. Опиоидные агонисты имеют разнообразную химическую структуру и их анальгетический потенциал зависит от различных факторов, включая аффинитет к специфическим сайтам рецепторов.

Селективные агонисты каппа-опиодных рецепторов обнаружены в ряду растительных дитерпеноидов. Это сальвинорины A и B (IIa, б) - метаболиты психоактивного растения Salvia divinorum [Ortega A., Blount J.F., Manchand P.S., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 1982. P.2505-2515]. Сальвинорин A (IIa) является аналогом по свойствам синтезированных производных лабданоидов (Ia, б). Соединение (IIa) реализует анальгетический эффект на мышах, который блокируется антагонистами каппа-опиоидных рецепторов [John T.F., French L.G., Erlichman J.S. Eur. J. Pharmacol; 2006, 545, p.129]. Исследования на животных выявили, что соединение (IIa) является агонистом каппа-опиоидных рецепторов in vivo [Carlezon W.A.Jr., Beguin С., Dinieri J.A., Baumann M.H., Richards M.R., Todtenkopf M.S., Rothman R.B., Ma Z., Lee D.Y., Cohen B.M. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006. V.316. P.440-448]. Соединение (IIa) обладает другими эффектами, характерными для каппа-опиоитдных агонистов, в частности, стимулирует двигательную активность животных [Zhang Y., Butelman E.R., Schlussman S.D., Но A., Kreek M.J. Psychopharmacology (Berlin). 2005. V.179. P.551-560]. Синтезирован большой ряд производных сальвинорина (IIa), модифицированных по положениям C(2), C(4), C(17) и по фурановому фрагменту. Найдено, что введение амидной функции в положение C(2) приводит к увеличению анальгетической активности и селективности связывания с каппа-опиоидными рецепторами [Prisinzano Т.Е., Rothman R.B. Chem. Rev. 2008. V.108. P.1732-1743].

Перспективными анальгетиками являются лабданоиды - маррубиин (IIIa) и маррубииновая кислота (IIIб), выделенные из растения рода шандра Marrubiin vulgare, используемого в народной медицине Ливана и Китая как средство для снятия боли и спазма гладкой мускулатуры. Соединения (IIIa, б) обладают значительной анальгетической активностью в тесте уксусные корчи in vivo [S.E. Bardai, N. Morel, M. Wibo, N. Fabre, G. Llabres, B. Lyoussi, J. Quetin-Leclercq. Phytomedicine. 2000. V.7. No 1. P.111-115].

Перечисленные растения - Salvia divinorum и Marrubiin vulgare на территории РФ не произрастают, соответственно, соединения (IIa, б, IIIa, б) являются малодоступными метаболитами, однако в связи с селективностью фармакологического эффекта (анальгетической активностью) получение их структурных аналогов представляет значительный интерес для создания фармакологически ценных агентов.

Доступным растительным метаболитом является фуранодитерпеноид ламбертиановая кислота (IV). Соединение (IV) легко выделяется из хвои, живицы и побегов длинохвойной сибирской сосны Pinus sibirica R. Mayr. [Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Долгих М.П., Харитонов Ю.В., Чернов С.В., Шульц Э.Э., Толстиков Г.А. Химико-фармацевтический журнал. 2004. Т.38. № 10. С.13-15; Патент РФ № 2436781. Попов С.А., Козлова Л.П., Шпатов А.В., Шульц Э.Э., Толстиков Г.А.]. Известна нейротропная активность [Толстикова Т.Г., Долгих М.П., Толстиков Г.А. Доклады академии наук, 2000. Т.374 С.268-270; Толстикова Т.Г., Воевода Т.В., Долгих М.П., Сорокина И.В. Эксперим. клинич. фармакол. 2002. Т.65. С.86-88], антиплазмодиевое действие [Chinou I. Current Med. Chem. 2005. Т.12. 1295-1297)], а также антиаллергенная активность ламбериановой кислоты (IV) [Chae H.-S., Chin Y.-W. Immunopharmacol. & Immunotoxicol. 2012. V.34. No 2. P.250-255]. Установлено, что соединение (IV) ингибирует продукцию интерлейкина-6 (IL-6), простагландина D ₂ (PGD₂), лейкотриена C₄ (LTC ₄), экспрессию COX-2 и дегрануляцию -гексозаминидазы в PMA.

Выявлена анальгетическая активность некоторых фуранодитерпеноидов лабданового ряда и их производных. Производное ламбертиановой кислоты - фломизоиковая кислота (V) обладает анальгетической активностью в тесте "уксусные корчи" (химическое раздражение брюшины) [Морозова Е.А., Толстикова Т.Г., Шульц Э.Э., Чернов С.В., Харитонов Ю.В., Миронов М.Е., Толстиков Г.А. Химия в интересах устойчивого развития. 2010. Т.18. № 4. С.489-494].

Соединения (IIIa, б, V) являются аналогами по структуре и свойствам заявляемых соединений.

Задачей изобретения является создание новых агентов, обладающих анальгетической активностью и оказывающих стимулирующее действие на поведение животных.

Поставленная задача решается новыми химическими соединениями - амидами ламбертиановой кислоты, формулы (Ia, б), обладающими анальгетической активностью и стимулирующим действием в тестах двигательной и исследовательской активности животных.

где ;

Способ получения соединений (Ia, б) из ламбертиановой кислоты (IV) реализуется по схеме 1. Обработка раствора ламбертиановой кислоты (IV) в хлороформе действием хлористого тионила в присутствии пиридина (0-5°C) дает хлорангидрид ламбертиановой кислоты, при реакции которого (без выделения) с водным аммиаком образуется соответствующий амид ламбертиановой кислоты (Ia) (выход 91%). При взаимодейсивии ламбертиановой кислоты (IV) с N-метилпиперазином в хлороформе в присутствии хлористого тионила образуется пиперазиниламид ламбертиановой кислоты (Iб) (выход 88%).

Техническим результатом изобретения является создание новых производных лабданоидов (Ia, б), обладающих анальгетической активностью и стимулирующим действием на поведение животных. Новые соединения получают путем химической модификации доступного растительного метаболита Pinus sibirica R. Mayr. - ламбертиановой кислоты (IV), которая легко выделяется из лесопромышленного продукта - живицы или хвои длинохвойной сибирской сосны Pinus sibirica (кедра сибирского) [Патент № 2436781 РФ. Приоритет от 10.06.2010 г. По заявке № 2010123753/04(033823). Способ получения ламбертиановой кислоты из экстрактивных веществ древесной зелени кедра сибирского. Попов С.А., Козлова Л.П., Шпатов А.В., Шульц Э.Э., Толстиков Г.А. Решение о выдаче патента РФ от 09 июня 2011 г.; Т.Г. Толстикова, И.В. Сорокина, М.П. Долгих., Ю.В. Харитонов, С.В. Чернов, Э.Э. Шульц, Г.А. Толстиков. Нейротропная активность аддуктов ламбертиановой кислоты с N-замещенными малеинимидами. Химико-фармацевтический журнал. 2004. Т.38 (10). С.13-15], являющейся многотоннажным отходом лесосеки. Физико-химические константы новых, впервые полученных соединений, приведены в примерах 1, 2.

Биологическая активность соединений (Ia, б) изучалась путем определения острой токсичности, анальгетической активности, влияния на поведенческие реакции животных и снотворное действие хлоралгидрата.

Острую токсичность (LD₅₀) определяли при однократном внутрижелудочном введении мышам. Параметры токсичности определяли по методу Кербера [Саноцкий И.В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1970, 342 с.]. Полученные данные (таблица 1) позволяют отнести исследуемые соединения к 3-му классу умеренно токсических веществ. Наименьшей токсичностью обладает амид ламбертиановой кислоты (Ia). Его токсичность более чем в 2 раза ниже, чем у препарата сравнения фломизоиковой кислоты (V). Токсичность пиперазиниламида (Iб) сравнима с токсичностью фломизоиковой кислоты (V).

Таблица 1.
Острая токсичность амидов ламбертиановой кислоты и агента сравнения
Соединение	Ia	Iб	V
LD50 (мг/кг)	>1500	750	633

Известно, что исходное соединение ламбертиановая кислота (IV) не обладает анальгетической активностью ни в тесте на висцеральную боль ("уксусные корчи"), ни в тесте на термическую боль ("горячая пластина") [Морозова Е.А., Толстикова Т.Г., Шульц Э.Э., Чернов С.В., Харитонов Ю.В., Миронов М.Е., Толстиков Г.А. Химия в интересах устойчивого развития. 2010. Т.18. № 4. С.489-494]. Для анализа анальгетической активности синтетических производных ламбертиановой кислоты (Ia, б) использовали указанные тесты химического и термического болевых раздражений согласно рекомендациям [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Хабриева Р.У. Москва: Медицина. 2005. 832 с.]. "Уксусные корчи" воспроизводили путем внутрибрюшинного введения животным 0.75%-ного раствора уксусной кислоты. Анальгетическая активность представляется в виде среднего количества корчей в группе в течение 3 мин, а также в виде процента угнетения болевой реакции (УБР). Термическое болевое раздражение вызывали помещением животного на подогреваемую металлическую пластину. Активность оценивали по времени нахождения животных на горячей пластине.

Результаты исследования анальгетической активности по обоим тестам приведены в таблице 2. Как видно, агент (Ia) проявляет выраженную анальгетическую активность в тесте "уксусные корчи". Это соединение оказалось более эффективным ингибитором болевой реакции, чем используемый в медицине анальгетик анальгин и аналог по структуре фломизоиковая кислота (V). Соединение (Iб) обладает слабой анальгетической активностью в тесте "уксусные корчи".

Введение животным агента (Ia), а также препарата сравнения анальгина, не оказывает влияния на время нахождения животных на горячей пластине. При введении пиперазиниламида ламбертиановой кислоты (Iб) достоверно увеличивается время нахождения животных на горячей пластине (в два раза по сравнению с контролем). Аналог по строению фломизоиковая кислота (V) также не обладает анальгетической активностью в тесте "горячая пластина".

Таким образом, амид ламбертиановой кислоты (Ia) обладает селективной анальгетической активностью в тесте "уксусные корчи", а N-метипиперазиниламид ламбертиановой кислоты (Iб) обладает селективной анальгетической активностью в тесте «горячая пластина».

Таблица 2.
Влияние производных лабданоидов на болевую реакцию, вызванную термическим и химическим раздражением.
Модель Агент	«Уксусные корчи»		«Горячая пластина»
	Кол-во корчей	% УБР	Латентное время болевой реакции, с
Контроль	8.6±1.1	-	20.6±2.2
(Ia)	4.2±0.7	51.5	24.8±3.4
(Iб)	7.1±0.6	17.6	40.0±2.9
(V)	5.5±0.7	35.9	25.5±2.5
Анальгин	5.7±0.4	33.6	20.2±2.3
p<0,05; p<0,001 относительно контроля

Стимулирующую активность агентов (Ia, б) устанавливали путем исследования поведения животных в тесте "открытое поле" [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Хабриева Р.У. Москва: Медицина. 2005. 832 с.]. Регистрацию показателей вертикальной и горизонтальной активности производили автоматически в установке «TRUSCAN» (COULBOURN INSTRUMENTS, США). Двигательную активность оценивали по параметрам «дистанция» и «скорость». Исследовательскую активность - по параметрам «количество вертикальных стоек», «время в вертикальных стойках» «количество заглядываний» и «время заглядываний в отверстия». Результаты приведены в таблице 3.

Из данных таблицы 3 следует, что заявляемые соединения (Ia, б) оказывают существенное влияние на поведение животных в тесте «открытое поле». При введении в дозе 5.0 мг/кг эти соединения проявили выраженное стимулирующее действие, увеличивая двигательную и исследовательскую активность животных. При этом оба агента достоверно увеличивали скорость движения животных и пройденное ими расстояние (двигательная активность), а также время нахождения животных в вертикальных стойках и количество вертикальных стоек (в последнем показателе в два раза по сравнению с контрольной группой и с препаратом сравнения) (исследовательская активность). Кроме того, агент (Iб) также достоверно увеличил и количество прыжков (в два раза по сравнению с контролем).

Таблица 3.
Влияние амидов ламбертиановой кислоты (Ia, б) на поведение животных в тесте «открытое поле» (доза 5.0 мг/кг)
Агенты Параметры	Контроль	(Ia)	(Iб)	(V)
Дистанция (см)	267.99±18.42	328.31±21,63	338.69±16.97	270.50±8.48
Скорость (см/с)	2.19±0.15	2.70±0.18	2.80±0.14	2.28±0.12
Кол-во вертик. стоек	7.00±1.89	12.00±2.06	12.88±1.68	9.62±1.02
Время вертик. стоек (с)	10.13±3.02	18.50±3.11( )	22.00±2.73	11.46±2.04
Кол-во заглядыв.	4.13±1.09	6.00±0.98	3.63±0.96	5.66±0.96
Время заглядыв. (с)	5.5±1.62	7.38±1.31	4.88±1.27	7.13±1.20
Кол-во прыжков	0.63±0.37	0.75±0.61	1.37±0.50( )	1.07±0.58( )
Исследоват. активность.	11.13±2.63	18.00±1.85( )	19.52±1.65	15.28±1.32( )
( ) p<0,1; p<0,05 относительно контроля

Установлено, что влияние агентов (Ia, б) на поведение животных носит дозозависимый характер. В таблице 4 приведены данные по двигательной активности животных в тесте "открытое поле" в дозах 2.5 мг/кг и 10.0 мг/кг. Как видно, при введении соединений (Ia, б) в дозе 2.5 мг/кг поведенческие реакции животных по параметрам двигательной и исследовательской активности практически не изменяются и незначительно отличаются от контроля. При введении агентов в дозе 10.0 мг/кг стимулирующее действие по параметрам двигательной активности («дистанция» и «скорость») становится более выраженным, чем в дозе 5.0 мг/кг (двигательная активность возрастает в 1.2-1.3 раза). Исследовательская активность животных, получавших соединения (Ia, б), в параметрах «количество вертикальных стоек» и «время в вертикальных стойках», а также по «количеству прыжков» в 1.7-2.0 раза превышает активность животных контрольной группы, как в дозе 5.0, так и в дозе 10.0 мг/кг. Общая исследовательская активность животных при введении соединений (Ia, б) в дозе 10.0 мг/кг достоверно возрастает в два раза по сравнению с контролем.

Таблица 4.
Влияние агентов (Ia, б) на поведение животных в тесте «открытое поле» (доза 2.5 и 10.0 мг/кг)
Агенты Параметры	Контроль	(Ia), доза		(Iб), доза
		2.5 мг/кг	10.0 мг/кг	2.5 мг/кг	10.0 мг/кг
Дистанция (см)	289.13±14.59	264.60±19.33	379.30±23.10	280.96±20,88	358.30±15.10
Скорость (см/с)	2.38±0.12	2.20±0.16	3.10±0.19	2.34±0.17	2.99±0.15
Кол-во вертик. стоек	7.43±0.98	6.38±1.44	14.30±0.70	8.25±2.02	13.40±0.50
Время вертик. стоек (с)	10.93±1.48	9.50±2.10	21.10±2.80	13.13±3.48	18.10±2.80
Кол-во заглядываний	3.31±0.49	4.50±1.05	6.10±0.40	4.63±1.02	7.10±0.70
Время заглядывания (с)	3.71±0.52	5.75±1.01( )	5.80±0.60	5.00±1.15( )	5.50±0.90
Кол-во прыжков	0.7±0.22	0.78±0.81	1.26±0.40( )	0.86±0.40( )	1.55±0.50( )
Исследоват. активность	10.75±1.17	10.87±1.48	21.38±1.86	12.87±2.18	20.50±1.45( )
( ) p<0,1; p<0,05; p<0,01 относительно контроля

В таблице 5 приведены данные по противотревожной активности животных в тесте «темная и светлая камеры». Этот тест позволяет оценивать состояние тревожности у животных, поскольку животные с повышенным уровнем тревожности предпочитают находиться в темной камере, в то время как низкий уровень тревожности позволяет животным больше времени проводить в светлом отсеке камеры [Bourin M., Hascoët М. European Journal of Pharmacology. 2003. V.463. No 1. P.55-65]. В качестве препарата сравнения был использован диазепам в дозе 2.5 мг/кг, введение которого приводило к достоверному увеличению обоих показателей. Из полученных данных следует, что агенты (Ia, б) не оказывают значительного влияния на поведение животных в тесте "темная и светлая камеры". Заявляемые соединения, в отличие от диазепама, не влияют ни на латентное время первого захода животного в темную камеру, ни на время его нахождения в темной камере. По результатам проведенного теста можно сделать вывод о том, что у амидов ламбертиановой кислоты (Ia, б) отсутствует повышенный уровень тревожности и, следовательно, выявленная способность к увеличению исследовательской активности животных в тесте «открытое поле», вероятно, связана с их способностью оказывать общее стимулирующее действие.

Таблица 5.
Влияние амидов ламбертиановой кислоты (Ia, б) на поведение животных в в тесте "темная и светлая камеры"
Параметры Агенты	Латентное время захода в темный отсек камеры, с	Время в нахождения в темной камере, с
Контроль	58.28±9.18	93.21±6.64
(Ia)	48.72±6.12( )	85.50±7.35( )
(Iб)	51.00±9.72( )	90.50±4.08( )
Диазепам	132.00±22.70	159.87±11.48
( ) p<0.5; p<0.05; p<0.001 относительно контроля

Известно, что стимулирующее действие агентов реализуется через различные нейромедиаторные системы [Wezenberg E., Sabbe B.G., Hulstijn W., Ruigt G.S., & Verkes R.J. Journal of psychopharmacology (Oxford, England). 2007. V.21. P.579-587]. Для исследования влияния соединений на глутаматную и ГАМК-эргическую систему используется тест «хлоралгидратовый сон» [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Хабриева Р.У. Москва: Медицина. 2005. 832 с.].

Взаимодействие агентов (Ia, б) со снотворными препаратами изучали по влиянию на снотворный эффект хлоралгидрата. Хлоралгидрат в количестве 350 мг/кг вводили внутрибрюшинно через 1 ч после введения агента. Оценивали латентное время засыпания и продолжительность сна животных. Результаты приведены в таблице 6.

Таблица 6.
Влияние агентов на длительность хлоралгидратового сна.
Параметры Агенты	Латентное время засыпания, с	Длительность сна, мин
Контроль	240.62±13.57	86.77±8.74
(Ia)	266.25±17.84( )	105.76±10.38
(Iб)	233.12±19.93	91.37±12.78( )
Диазепам	192.50±18.02	207.79±6.19
( ) p<0,1; p<0,01; p<0,001 относительно контроля

Исследование показало, что агенты (Ia, б) в дозе 5 мг/кг не изменяют латентное время засыпания животных, в то время как диазепам достоверно уменьшает его. Агенты (Ia, б) практически не влияют продолжительность хлоралгидратового сна. Диазепам достоверно увеличивает продолжительность хлоралгидратового сна ( в 2 раза).

Таким образом, на основе исследования поведенческих реакций животных в тестах «открытое поле», «темная и светлая камеры», а также по влиянию на снотворный эффект хлоралгидрата, установлено, что амиды ламбертиановой кислоты (Ia, б) обладают общим выраженным стимулирующим действием.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение (1S,4aR,5S,8aR)-5-[2-(фуран-3-ил)этил]-1,4a-диметил-6-метилендекагидронафталин-1-карбоксамида (амид ламбертиановой кислоты) (Ia).

К раствору 3.1 г (10 ммоль) ламбертиановой кислоты (IV) и 1 мл пиридина в 20 мл хлороформа при хорошем перемешивании и охлаждении до 0-5°C добавляют по каплям 0.8 мл хлористого тионила. Смесь перемешивают в течение 1 ч при +5°C и добавляют при перемешивании к 10 мл конц. раствора аммиака, охлажденного до +5°C. Реакционную массу перемешивают 1 ч, затем добавляют 20 мл хлороформа, органический слой отделяют, промывают водой сушат сульфатом магния. Растворитель упаривают в вакууме, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (элюент-этилацетат). Выделяют 2.8 г (91%) соединения (Ia) в виде масла, (c 0.64, CHCl₃). ИК-спектр, , см^-1: 3410, 3360, 3141, 2952, 1690, 1680, 1660, 1612, 1515, 1500, 1480, 1440, 1380, 1360, 1235, 1220, 1190, 1160, 1145, 1090, 1045, 972, 890, 820, 795, 750. Спектр ЯМР ¹H CDCl₃, , м.д. (J, Гц): 0.64 с (3H, C²⁰H₃ ), 1.01 д.д.д (1H, H³, J13.5, 4.6, 1.8). 1.12 д.д.д (1H, H¹, J 13.8, 4.5, 2.2), 1.18 с (3H, C¹⁹ H₃), 1.28 д.д (1H, H⁵, J 12.6, 2.0), 1.51-1.62 м (3H, H^{2, 9, 11}), 1.71 м (1H, H⁶), 1.79-1.91 м (4H, H^1,2,6,7), 2.19-2.25 м (2H, H^{3, 6} ), 2.23 м (1H, H¹²), 2.42 м (1H, H⁷), 2.53 м (1H, H¹²), 4.56 с (1H, H¹⁷), 4.87 с (1H, H¹⁷), 5.53 уш.с (1H, NH, J_{полушираны} 4.1), 5.88 уш.с (1H, NH, J_{полушираны} 4.1), 6.23 д.д (1H, H¹⁴, J 2.5 и 1.8), 7.16 д (1H, H¹⁵, J 1.8), 7.31 д (1H, H¹⁶, J 2.5). Спектр ЯМР ¹³C, , м.д.: 12.75 (C²⁰), 20.03 (C²), 23.43 (C¹²), 24.13 (C¹¹), 26.56 (C ⁶), 30.01 (C¹⁹), 38.44 (C³), 38.71 (C⁷), 39.23 (C¹), 40.22 (C¹⁰ ), 44.01 (C⁴), 55.10 (C⁹), 56.29 (C ⁵), 106.58 (C¹⁷), 110.81 (C¹⁴), 125.28 (C¹³), 138.57 (C¹⁵), 142.52 (C¹⁶ ), 147.47 (C⁸), 179.71 (C¹⁸). Масс-спектр, m/z. (I_отн., %): 398 (0.6), 358 (0.3), 339 (0.9), 283 (0.6), 265 (0.8), 249 (7), 189 (26), 150 (100), 133 (13), 108 (30), 83 (24), 59 (24). Найдено: m/z 315.2444 [M]⁺ . C₂₀H₂₉NO₂. Вычислено: M 315.2452.

Пример 2. Получение {(1S,4aR,5S,8aR)-5-[2-(фуран-3-ил)этил]-1,4a-диметил-6-метилендекагидронафталин-1-ил}(4-метилпиперазин-1-ил)метанона [(4-метилпиперазинил)амид ламбертиановой кислоты] (Iб). К раствору 3.1 г (10 ммоль) ламбертиановой кислоты (IV) и 1 мл пиридина в 20 мл хлороформа при хорошем перемешивании и охлаждении до 0-5°C добавляют по каплям 0.8 мл хлористого тионила. Смесь перемешивают в течение 1 ч при +5°C, затем добавляют по каплям 3.0 мл N-метилпиперазина. Реакционную массу перемешивают 1 ч, затем добавляют 20 мл хлороформа, органический слой отделяют, промывают водой сушат сульфатом магния. Растворитель упаривают в вакууме, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (элюент - петролейный эфир - этилацетат). Фракцию, содержащую продукт, осаждают в виде оксалата из раствора в растворе петролейный эфир - этилацетат, 2:1 при добавлении насыщенного раствора щавелевой кислоты в этилацетате. Выделяют 3.0 г (88%) соединения (Iб). Тпл. 162-164°С. (с 0.27, CHCl₃). ИК-спектр, см^-1 : 3420, 2957, 2928, 2874, 1690, 1660, 1625, 1590, 1570, 1500, 1460, 1375, 1330, 1254, 1240, 1210,1170, 1150, 1140, 1090, 960, 945, 890, 870, 750, 680. Спектр ЯМР ¹H CDCl₃ +CD₃OD, , м.д. (J, Гц): 0.68 с (3H, C²⁰H₃ ), 0.96 д.д.д (1H, H³, J 13.6, 4.6, 1.8), 1.18 д.д.д (1H, H¹, J 13.8, 4.8, 2.0), 1.22 д.д (1H, H⁵ , J 12.8, 2.0), 1.29 с (3H, C¹⁹H₃). 1.53-1.72 м (4H, H^{2, 6, 9, 11}), 1.78-1.98 м (4H, H^{1, 2, 6, 7}), 2.12-2.32 м (3H, H^{3, 6, 12}), 2.40-2.68 м (10H, 2H-H^{7, 12} и 8H, H^{2 , 3 , 5 , 6} ), 2.89 с (3H, NCH₃ при C⁴ ), 4.61 с (1H, H¹⁷), 4.91 с (1H, H¹⁷ ). 6.31 д.д (1H, H¹⁴, J 2.6 и 1.8), 7.20 д (1H, H ¹⁵, J 2.6), 7.41 д (1H, H¹⁶, J 1.8). Спектр ЯМР ¹³C, , м.д.: 15.40 (C²⁰), 20.69 (C²), 23.46 (C¹²), 24.23 (C¹¹), 26.01 (C ⁶), 27.31 (C¹⁹), 38.89 (C³), 39.08 (C⁷), 39.25 (C¹), 40.74 (C¹⁰ ), 42.38 (NCH₃ при C⁴ ), 42.89 (C⁴), 46.05 (C^{3 , 5} ), 52.76 (C^{2 , 6} ), 55.16 (C⁹), 58.07 (C⁵), 106.28 (C¹⁷), 111.39 (C¹⁴), 125.38 (C¹³ ), 139.05 (C¹⁵), 143.21 (C¹⁶), 148.27 (C ⁸), 175.68 (C¹⁸). Масс-спектр, m/z (I_отн ., %): 516.3 (14.58), 57.0 (100), 42.9 (80.84), 55.0 (70.68), 71.0 (66.62). Найдено: m/z 399.2505 [M]⁺. C₂₅ H₃₈N₂O₂. Вычислено: M 399.2506.

Пример 3. Исследование анальгетической активности соединений (Ia, б) в тесте "уксусные корчи". Эксперимент проводят на беспородных мышах-самцах массой 22-25 г. Экспериментальные группы формируют по 8 животных в каждой. "УК" воспроизводят путем внутрибрюшинного введения 0.75% уксусной кислоты по 0.1 мл на одно животное. Исследуемые агенты (Ia, б, V) и препарат сравнения анальгин в дозе 10 мг/кг вводят однократно внутрижелудочно за час до воспроизведения модели. Контролем являются животные, которым введена уксусная кислота. Оценка активности осуществляется через 5 мин после введения уксусной кислоты. Регистрируется количество корчей в течение 3 мин. Анальгетическая активность представляется в виде среднего количества корчей в группе, а также в виде процента угнетения болевой реакции (УБР), который рассчитывается по формуле

%УБР=100% (T_{контроль}-T_опыт)/T_{контроль} , где T - среднее количество корчей в группе.

Результаты представлены в таблице 2. Установлено, что соединение (Ia) проявляет анальгетический эффект на модели "УК", достоверно снижая количество корчей в 2 раза, по сравнению с контролем. Эффект агента (Ia) на 18% превосходит эффект анальгетика анальгина и на 15% - активность фломизоиковой кислоты (V). Таким образом, амид ламбертиановой кислоты (Ia) достоверно блокирует развитие болевого эффекта, вызванного введением уксусной кислоты, проявляет высокую и селективную анальгетическую активность в тесте "уксусные корчи". Амид (Iб) обладает слабой анальгетической активностью в тесте на висцеральную боль ("УК").

Пример 4. Исследование анальгетической активности на модели термического болевого раздражения. Эксперимент проводили на беспородных мышах-самцах массой 22-25 г. Экспериментальные группы были сформированы по 8 животных в каждой. Исследуемые агенты вводят в дозе 5 мг/кг однократно внутрижелудочно за 1 ч до воспроизведения модели. Для воспроизведения модели «горячая пластина» животных помещают на металлическую пластину, нагретую до 54±0,5°, ограниченную цилиндром из орг. стекла (15×15 см). Регистрируют латентное время болевой реакции, то есть время до подпрыгивания или облизывания задней лапы. Анальгетическая активность представляется в виде среднего латентного времени болевой реакции. Результаты представлены в таблице 2. Соединение (Ia) обладает слабой анальгетической активностью в тесте "горячая пластинка". Соединение (Iб) проявляет выраженный анальгетический эффект на модели термической боли, достоверно увеличивая время нахождения на горячей пластике до 40 с, что вдвое превосходит эффект анальгетика анальгина и агента сравнения фломизоиковой кислоты (V). Таким образом, N-метилпиперазиниламид ламбертиановой кислоты (16) блокирует развитие болевого эффекта и проявляет высокую селективную анальгетическую активность в тесте термического болевого раздражения.

Пример 5. Исследование влияния агентов на двигательно-эмоциональную активность животных в тесте «открытое поле». Исследования проводят на белых беспородных мышах, весом 20-25 г. Регистрация двигательных актов производиться автоматически в установке «TRUSCAN» (COULBOURN INSTRUMENTS, США). Соединения (Ia, б, V) смешивают с твином-80, растворяют в воде и вводят однократно внутрижелудочно, в дозе 2.5, 5.0 и 10.0 мг/кг (по 0.1, 0.2 или 0.4 мл на 10 г массы животного). Животные контрольной группы получают эквивалентные объемы растворителя. Тестирование двигательной активности проводят через 1 час после введения агентов. Животных помещают в центр установки TruScan и в течение 2 мин для каждого животного регистрируют показатели вертикальной и горизонтальной активности. Результаты исследования приведены в таблицах 3 и 4.

Введение соединений (Ia, б) в дозах 5.0 и 10.0 мг/кг приводит к достоверному увеличению стимулирующего действия агентов на двигательную активность по параметрам «дистанция» и «скорость». При введении в дозе 5 и 10 мг/кг дистанции, пройденные животными,составляют 328 и 379 см (для Ia) и 338 и 358 см (для Iб), что в 1.2-1.3 раза превышает расстояние, пройденное животными контрольной группы. Соответственно возрастает скорость движения [от 2.2-2.4 см/с (контр, группа) до 2.7-2.8 (доза 5.0) и 3.1-3.0 см/с (доза 10 мг/кг)].

Введение соединений (Ia, б) в дозах 5.0 и 10.0 мг/кг приводит к достоверному увеличению стимулирующего действия агентов на исследовательскую активность животных. По параметрам «количество вертикальных стоек» [12.0 (для Ia), 12.9 (для Iб) - 5.0 мг/кг и 14.3 (для Ia), 13.4 (для Iб) - 10.0 мг/кг], «время в вертикальных стойках» [18.5 (для Ia), 22.0 с (для Iб) - 5.0 мг/кг и 21.1 (для Ia), 18.1 с (для Iб) - 10.0 мг/кг], а также по «количеству прыжков» [0.8 (для Ia), 1.4 (для Iб) - 5.0 мг/кг и 1.3 (для Ia), 1.6 (для Iб) - 10.0 мг/кг], двигательная активность животных увеличивается в 1.7-2.0 раза по сравнению с контрольной группой. Общая исследовательская активность животных при введении соединений (Ia, б) достоверно возрастает в два раза: от 11 до 18 (5.0 мг/кг) и 21 (10.0 мг/кг) или от 11 до 20 (5.0 мг/кг) и 21 (10.0 мг/кг).

Пример 6. Исследование влияния агентов на двигательно-эмоциональную активность животных в тесте «темная и светлая камеры». Животных помещают в камеру, состоявшую из двух отсеков - темного и светлого, проход между которыми всегда открыт. Мышь помещают в светлый отсек, хвостом к входу в темную часть камеры и регистрируют латентное время захода в темный отсек, а также общее время нахождение животного в темном и светлом отсеках. Введение соединений в дозе 5 мг/кг не влияет ни на латентное время первого захода животного в темный отсек камеры [48 с для агента (Ia) и 51 с для (Iб)] ни на время его нахождения в темной камере [86 с для агента (Ia) и 90 с - для (Iб)], в отличие от препарата сравнения диазепама, который достоверно увеличивает как время захода в темный отсек камеры (132 с), так и время его нахождения в темной камере (160 с).

Пример 7. Влияния агентов на снотворный эффект хлоралгидрата изучают в тесте «хлоралгидратовый сон». Хлоралгидрат вводят животным внутрибрюшинно в дозе 350 мг/кг через 1 ч после введения агента. Оценивают продолжительность сна животных, а также латентное время утраты рефлекса переворачивания. Как видно из данных табл.6, латентное время засыпания животных под действием агентов (Ia, б) больше, чем при действии препарата сравнения диазепама (266 и 233 с, для диазепама 192 с). Введение агентов (Ia, б) достоверно уменьшает время сна (106 и 91 мин, для диазепама - 208 мин).

Статистическую обработку результатов во всех опытах проводили с помощью программы Statistica 8.0, уровень достоверности определяли по t-критерию Стьюдента.

Таким образом, заявляемое изобретение обладает следующими преимуществами, а именно:

- новые амиды ламбертиановой кислоты формулы (Ia, б) обладают низкой токсичностью, значительной селективной анальгетической активностью в тестах химического (соединение Ia) или термического (соединение Iб) болевого раздражения. Заявляемые агенты обладают выраженным общим стимулирующими действием, проявившемся в увеличении двигательной и исследовательской активности животных в тесте «открытое поле», в отсутствии тревожности в тесте «темная и светлая камеры», а также в отсутствии влияния на латентное время засыпания животных и продолжительность сна при введении хлоралгидрата,

- заявляемые соединения (Ia, б) синтезируются из доступного растительного сырья - хвои или живицы сосны сибирской Pinus sibirica.