способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии

Формула изобретения

Способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым выполняют иммунологическое исследование физиологической жидкости пациента, отличающийся тем, что выполняют иммунологическое исследование ротовой жидкости пациента, которую собирают утром, натощак, и которую пациент аккумулирует в полости рта, при этом в процессе выполнения иммунологического исследования полученной ротовой жидкости определяют концентрации секреторного иммуноглобулина А и интерферона альфа, и, если значение концентрации секреторного иммуноглобулина в ротовой жидкости находится в пределах от 184,81 до 225,11 мг/мл, а концентрация интерферона альфа находится в пределах от 3,94 до 66 пг/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и к челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано в качестве дополнительного исследования для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Лицевая боль представляет собой важную медицинскую проблему, в первую очередь из-за хронического рецидивирующего и, в ряде случаев, достаточно устойчивого ко многим методам лечения болевого синдрома.

Изучение проблемы лицевой боли в современной научной литературе представлено недостаточно широко. Как показывает практика, чаще остальных с конкретными случаями, связанными с лицевой болью, сталкиваются стоматологи, неврологи, оториноларингологи, офтальмологи и нейрохирурги (Ахадов Т.А. Проявления нейростоматологических симптомов // Журн. неврол. и психиатр. - 1996. - Вып.1. - 70-74).

Одной из самых распространенных причин лицевой боли является поражение вегетативных парасимпатических нервных узлов головы вирусной этиологии, в частности, герпесвирусной этиологии (Журавлев В.П., Николаева А.А. Проблемы стоматологии «Поражение вегетативных парасимпатических узлов головы в структуре нейростоматологического приема», № 3, 2013 г., стр.36-39). В настоящее время ряд исследований как отечественных, так и зарубежных, показывают высокий уровень инфицированности населения герпесвирусами, а именно: вирусом простого герпеса I и II типа, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барра. Имеются данные, что к 15 годам вирусами герпеса инфицировано почти 90% детей и подростков, а к 60 годам - почти 99% населения (Герпетические инфекции. Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика // Методические рекомендации. Каражас Н.В., Малышев Н.А., Рыбалкина Т.Н., Калугина М.Ю., Бошьян Р.Е., Кистенева Л.Б., Чешик С.Г. М.: 2007).

При лицевых болях внешне герпесвирусная инфекция никак себя проявляет (высыпания на коже отсутствуют). Поэтому клинические проявления пораженных вегетативных парасимпатических узлов в виде лицевой боли часто провоцируют неоправданное вмешательство в зубочелюстную систему. Отсутствие эффективной диагностики инфекции вегетативных парасимпатических узлов герпесвирусной этиологии приводит к некорректному диагнозу и неадекватной терапии больного. Отсюда вытекает задача создания диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Известен способ экспресс-диагностики герпесвирусной инфекции иммуноцитохимический (Е.В. Шарипова, Ю.В. Лобзин, И.В. Бабаченко, Р.А. Насыров, В.В Иванова, А.С. Левина. «Клинико-этиологические особенности инфекционного мононуклеоза у детей раннего возраста», - Детские инфекции, 2009, № 1), позволяющий определять антигены герпесвирусов в лимфоцитах крови с использованием моноклональных антител к латентному мембранному протеину ВЭБ-LPM-1, структурному вирусному белку поздней стадии репликации ЦМВ-рр 65 и поликлональных антител к ранним антигенам ВПГ 1 и 2 типов. Результаты метода позволяют полуколичественно определять экспрессию антигенов в лимфоцитах периферической крови («+» - слабоположительная, «++» - положительная, «+++» - резко положительная).

Известен способ диагностики герпесвирусной инфекции, в соответствии с которым выполняют иммуноферментный анализ, в результате чего определяют антигены с помощью антител, меченых ферментом. Способ обладает большой степенью чувствительности, операции способа стандартны и автоматизированы, что снижает частоту субъективных ошибок. Чувствительность метода составляет 70-80%. Вирусные антитела классов IgG, IgA, IgM в сыворотке крови определяют методом интерферонового анализа, которому свойственны простота, высокая специфичность и чувствительность (Мальцева И.Н., Эбралидзе Л.К., Звонарев А.Ю. // Сборник трудов НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней. МЗ Каз. ССР. 1988. Т.36. С.135-141). Однако способ имеет возможность получения ложноположительного результата за счет перекрестных реакций с нормальными антителами.

Кроме того, оба выявленных способа обеспечивают диагностику наличия герпесвирусной инфекции в организме человека, т.е. не позволяют конкретизировать инфецированный орган, что, в свою очередь, не позволяет диагностировать поражение герпесвирусной этиологии вегетативных парасимпатических узлов головы.

Недостатком выявленных способов также является инвазивность получения материала для исследования (внутривенный забор крови), что небезопасно как для самого пациента, так и для медицинского персонала.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, вытекающий из статьи Николаева А.А., Базарный В.В., Журавлев В.П. «Иммунологический статус у пациентов с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы вирусного происхождения» // журнал «Стоматология», терапия, ноябрь 2012 г., № 12 (104), с.104. Выполняют иммунологическое исследование крови пациента, в результате которого определяют показатели клеточного иммунитета и показатели иммунофенотипирования. Критерием для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии являются: снижение по сравнению с нормой, продукция эндогенного интерферона, активности натуральных киллеров и антителозависимой клеточной цитоттоксичности, уменьшение абсолютного числа и снижение активности Т-лимфоцитов (CD3+ и CD4+ клеток) и нейтрофилов, повышение количества иммунных комплексов.

Недостаток выявленного способа, наиболее близкого к предлагаемому, заключается в том, что он в результате диагностики не позволяет конкретизировать тип вирусной этиологии, а именно: не позволяет диагностировать поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии. Недостатком выявленного способа также, как и предыдущих, является инвазивность получения материала для исследования (внутривенный забор крови), что небезопасно как для самого пациента, так и для медицинского персонала.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания способа диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, осуществление которого позволяет достичь технического результата, заключающегося в возможности диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии, а также в неивазивности способа.

Сущность заявленного изобретения заключается в том, что в способе диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым выполняют иммунологическое исследование физиологической жидкости пациента, новым является то, что выполняют иммунологическое исследование ротовой жидкости пациента, которую собирают утром, натощак, и которую пациент аккумулирует в полости рта, при этом в процессе выполнения иммунологического исследования полученной ротовой жидкости определяют концентрации секреторного иммуноглобулина A и интерферона альфа, и, если значение концентрации секреторного иммуноглобулина в ротовой жидкости находится в пределах от 184,81 до 225,11 мг/мл, а концентрация интерферона альфа находится в пределах от 3,94 до 66 пг/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Заявленный технический результат достигается следующим образом.

Существенные признаки формулы изобретения: «Способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым выполняют иммунологическое исследование физиологической жидкости пациента, » являются неотъемлемой частью заявленного способа и обеспечивают его работоспособность, а, следовательно, обеспечивают достижение заявленного технического результата.

Авторами изобретения впервые установлена взаимосвязь иммунологических показателей ротовой жидкости пациентов с воспалительным процессом в вегетативных парасимпатических узлах головы, вызванном инфекцией герпесвирусной этиологии, что позволило использовать ротовую жидкость для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

В заявленном способе для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии выполняют иммунологическое исследование ротовой жидкости пациента.

Под ротовой жидкостью понимают жидкое содержимое ротовой полости вне приема пищи, то есть без примесей ее компонентов. Это обуславливает забор ротовой жидкости утром натощак, при этом ротовую жидкость пациент аккумулирует в полости рта и сплевывает ее в пробирку. Продолжительность забора ротовой жидкости зависит от скорости слюноотделения у пациента и необходимым объемом для достоверного исследования.

Наряду с продуктами секреции слюнных желез, а также продуктами жизнедеятельности микрофлоры полости рта, в ротовую жидкость поступают из внутренней среды интермедиаты, биорегуляторы и конечные продукты обмена. Это сложная по составу жидкость, которая содержит 98-99% воды, около 0,5% неорганических солей и до 1% органических веществ - протеинов и других компонентов (Боровский Е.В. Биология полости рта / Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. - М.: Медицина, 1991, с.13-18).

Ротовая жидкость выполняет различные физиологические функции: пищеварительную, минерализующую, очищающую, защитную, бактерицидную, иммунную, гормональную. Регуляторная функция ротовой жидкости заключается в том, что она влияет на процессы физиологической регенерации, эритропоэз, минеральный обмен и другие функции. В нее секретируются многочисленные цитокины и нейропептиды, которые влияют на проницаемость для белков плазмы крови и другие виды обмена (The crystallographic symmetry test for the correctness of a set of phases / P. Tzamalis, K. Bethanis, A. Hountas, G. Tsoucaris // Acta Crystallogr. A. - 2003. - Vol.59, Pt.1. - P.28-33, 255-258).

Ротовая жидкость в полном смысле является гомеостазирующей средой для органов и тканей, контактирующих с полостью рта (Боровский Е.В. Биология полости рта / Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. - М.: Медицина, 1991, с.7).

Известно, что ротовая жидкость является сложным фильтратом плазмы крови, в силу чего отражает состояние динамического постоянства внутренней среды организма (Боровский, Е.В. Биология полости рта / Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. - М.: Медицина, 1991, с.132; «Ротовая жидкость как объект оценки функционального состояния организма человека» М.В. Постнова, Ю.А. Мулик, В.В. Новочадов, Б. Мулик, И.О. Назаров, Д.М. Фролов // Вест. Волгогр. Гос. Ун-та. Сер. 3, Экон. Экол., 2011, № 1 (18), с.246).

В то же время ротовая жидкость может весьма значительно меняться по составу, физико-химическим и биологическим свойствам при воздействии самых разных стимулов, то есть является индикатором реактивности организма.

Описанные выше свойства ротовой жидкости и обуславливают возможность использования ее в заявленном способе в качестве физиологической жидкости пациента для выполнения иммунологических исследований. При этом простота и полная неинвазивность процедуры получения ротовой жидкости (исключение забора крови) делает выполнение способа безопасным как для пациента, так и для медицинского персонала, что всегда является актуальным.

В заявленном способе выполняют иммунологическое исследование полученной ротовой жидкости, в процессе которого определяют концентрации секреторного иммуноглобулина A и интерферона альфа.

Выбор для оценки состояния иммунитета секреторного иммуноглобулина A и интерферона альфа обусловлен следующим.

Иммуноглобулины класса A секреторный синтезируются в лимфатических элементах слизистых оболочек и содержат секреторный компонент (бета-глобулин), присоединяющийся к молекуле иммуноглобулина при его прохождении через эпителиальные клетки слизистой. Секреторные иммуноглобулины играют существенную роль в местном иммунитете, препятствуя адгезии микроорганизмов на слизистых оболочках, стимулируют фагоцитоз и активируют комплемент, могут проникать в молозиво, а также в слюну, которая является неотъемлемой составляющей ротовой жидкости.

Большое значение в противовирусной защите организма придается системе интерферонов. Для хронических вирусных инфекций характерно выраженное подавление интерфероногенеза.

Система интерферонов осуществляет не только первую линию защиты организма от инфекций (когда иммунная система еще не успевает отреагировать), но и участвует в дальнейших (уже иммунных) процессах уничтожения чужеродных объектов. Если иммунная система отвечает за неизменность белкового состава организма, то система интерферонов - за поддержание генетического гомеостаза, то есть за сохранение постоянства состава организма на уровне генома (Ариненко Р.Ю. «Интерфероновый статус при различных формах патологии», кандидатская диссерт. биологических наук, Москва, 1999, 115 стр.).

Интерфероны - общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми по отношению к вирусу. Интерфероны стимулируют иммунную систему для борьбы с вирусами. Интерфероны повышают синтез молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов и активируют иммунопротеасому.

Как показано выше, ротовая жидкость меняется по составу, физико-химическим и биологическим свойствам при воздействии самых разных стимулов, то есть является индикатором реактивности организма. Следовательно, и количественное содержание интерферонов в ротовой жидкости также отражает состояние иммунитета пациента.

Интерфероны человека подразделяют на группы в зависимости от типа клеток, в которых они образуются: , и . Интерфероны альфа действуют как ингибиторы репликации вируса и оказывают преимущественно противовирусный эффект. Кроме того, использование в заявленном способе именно интерферона альфа обусловлено тем, что интерфероны альфа включают несколько видов белков (22 подтипа интерферона альфа) с одинаковой молекулярной массой (около 20 кДа), что повышает достоверность их количественного определения в ротовой жидкости.

Авторами изобретения впервые выполнены углубленные исследования особенностей иммунных и иммунорегуляторных нарушений у пациентов с выявленным инфицированием вегетативных узлов головы герпес-вирусами. Это позволило установить наиболее достоверные показатели иммунитета и их числовые критерии при диагностике герпесвирусной инфекции вегетативных парасимпатических узлов головы по результатам иммунологического исследования состава ротовой жидкости.

В заявленном способе диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии по результатам иммунологического исследования состава ротовой жидкости для случая, если значение концентрации секреторного иммуноглобулина в ротовой жидкости находится в пределах от 184,81 до 225,11 единиц, а концентрация интерферона альфа находится в пределах 3,94 8,66 единиц. Количественные критерии для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии получены опытным путем в результате набора статистических данных и являются оптимальными.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что предлагаемый способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии при осуществлении позволяет конкретизировать вид вирусной инфекции, который поражает вегетативные парасимпатические узлы головы, что обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии, а также в неивазивности способа.

Заявленный способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии осуществляют следующим образом. Выполняют иммунологическое исследование ротовой жидкости пациента, которую собирают утром, натощак, и которую пациент аккумулирует в полости рта в течении времени, достаточном для сбора требуемого для исследования объема жидкости. В процессе выполнения иммунологического исследования полученной ротовой жидкости определяют концентрации секреторного иммуноглобулина A и интерферона альфа. Если значение концентрации секреторного иммуноглобулина в ротовой жидкости находится в пределах от 184,81 до 225,11 мг/мл, а концентрация интерферона альфа находится в пределах от 3,94 до 66 пг/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Минимальный объем слюны - 0,5 мл, для определения нескольких показателей - желательно 1-3 мл.

Образец слюны доставляется в лабораторию в течение 2-3 часов с момента сбора. В противном случае (если сбор материала проводится накануне) образец замораживали в морозильной камере и доставляли в лабораторию в замороженном виде.

Слюну центрифугировали при 5000 об./мин на холоде. Проводили осаждение муцина, применяя 6 ЕД лидазы на 1,0 мл ротовой жидкости.

Определение концентрации секреторного иммуноглобулина A и концентрации интерферона альфа осуществляли методом твердофазного гетерогенного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Вектор-Бест» и регистрацией результатов на фотометре Multiscan.

Для подтверждения работоспособности заявленного способа были набраны две группы: исследуемая ( № 1) и контрольная ( № 2).

Исследуемая группа состояла из 35 пациентов с поражением вегетативных парасимпатических узлов вирусной этиологии. Контрольная группа составила 26 человек. В исследуемой и контрольной группе были включены пациенты обоего пола в возрасте от 24 до 64 лет (средний возраст - 50,33 лет).

В исследуемой группе № 1 диагноз поражение парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии был установлен на основании стандартных клинико-лабораторных критериев. Пациенты данной группы предъявляли жалобы на постоянную ноющую боль в области верхних и нижних зубов, челюстей, с иррадиацией в глотку, небо, околоушную, лобную, затылочную область, а также с распространением боли в шею, предплечье, плечо. Кроме того, на стороне поражения выявлялся сложный симптомокомплекс вегетативно-сосудистых и секреторных расстройств в виде слезотечения, инъецирования склер, ринореи, гиперемии и отечности слизистой оболочки полости рта и кожи лица. При пальпации определялась болезненная область в проекции пораженного узла в 100% случаев.

С диагностической целью у пациентов группы № 1 определяли специфические антитела класса G к вирусу простого герпеса 1 типа (ВПГ1) и цитомегаловирусу (ЦМВ). Исследование уровня специфических антител к ВПГ 1 и ЦМВ основывалось на методе иммуноферментный анализ и иммунохемилюминисцентного анализа (современный вариант ИФА с использованием парамагнитных частиц). Определение ДНК ВПГ-1 и ЦМВ проводилось с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В контрольную группу были включены соматически сохранные пациенты, не имеющие в анамнезе данных о проявлениях герпетической инфекции. Отбор пациентов производили методом случайной выборки при амбулаторном обращении.

Клиническое стоматологическое обследование включало основные методы: сбор анамнеза, осмотр полости рта, и дополнительные методы: подсчет индекса интенсивности кариеса зубов и определение значения упрощенного индекса гигиены.

Кроме этого, для исключения сопутствующей соматической патологии, у всех пациентов была анализирована имеющаяся медицинская документация (заключение врача-терапевта, иммунолога, дерматовенеролога), результаты предшествующих инструментальных и лабораторных исследований (общий анализ крови, мочи, биохимический анализ крови).

С целью изучение состояния секреторного иммунитета у всех обследованных получали спонтанную ротовую жидкость. Сбор ротовой жидкости (нестимулированной) в состоянии покоя проводили утром натощак. Пациента в положении сидя просили опустить голову вниз, не глотать слюну и не двигать языком и губами во время всего периода сбора слюны. Ротовую жидкость аккумулировали в полости рта в течение двух минут, затем пациента просили сплюнуть все содержимое в пробирку.

Иммунологическое исследование ротовой жидкости включало определение концентрации секреторного иммуноглобулина A и интерферона альфа методом твердофазного гетерогенного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Вектор-Бест» и регистрацией результатов на фотометре Multiscan.

Результаты лабораторных данных обработаны стандартными методами вариационной статистики с определением средних величин (М) и их ошибок (m) для каждой группы с оценкой критерия достоверности (t) по Стьюденту. При всех расчетах использовался 95% уровень значимости. Для определения достоверности различий между группами использовали тест Колмогорова-Смирнова.

Результаты исследования показателей секреторного иммунитета приведены в таблице.

Показатели		Исследуемая группа	Контрольная группа
Лабораторные показатели ротовой жидкости	SIg A, мг/мл	204,96±20,15	95,7±15,1
	ИФ - , пг/мл	6,3±2,36	23,8±5,6

Результаты исследования показали, что у всех больных с диагнозом поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии значение концентрации секреторного иммуноглобулина в ротовой жидкости находилось в пределах от 184,81 до 225,11 мг/мл, а концентрация интерферона альфа находится в пределах от 3,94 до 66 пг/мл, что подтверждает работоспособность заявленного способа диагностики.

Кроме того, сравнительный анализ полученных результатов показал следующее. Уровень секреторного иммуноглобулина A (SIg A) в исследуемой группе с поражением вегетативными парасимпатическими узлами герпесвирусной этиологии выше более, чем в 2 раза, по сравнению с контрольной группой. Сравнение данного показателя свидетельствует об интенсивной выработке SIg A при протекании герпетической инфекции у пациентов с поражением вегетативными парасимпатическими узлами герпесвирусной этиологии.

Уровень интерферона альфа (ИФ - ) в ротовой жидкости пациентов с поражением вегетативными парасимпатическими узлами герпесвирусной этиологии ниже в 4 раза, по сравнению с контрольной группой.

Полученные результаты иммунологического исследования ротовой жидкости достоверно показывают, что протекание герпесвирусной инфекции у пациентов с поражением вегетативными парасимпатическими узлами герпесвирусной этиологии сопряжено со снижением защитных сил организма и нарушением реактивности, что подтверждает осуществимость и достоверность диагностики заявленным способом поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии. Это подтверждает правомерность, информативность и достоверность выбранных для диагностики данного заболевания критериев, а именно: концентрации в слюне больного секреторного иммуноглобулина А и интерферона альфа, а также обеспечивает достоверность диагностики заявленным способом поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.