ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам

Классы МПК:C12Q1/04 установление присутствия и(или) вида микроорганизма; использование селективных сред для испытания антибиотиков или бактерицидов; составы, содержащие химический индикатор для этих целей
C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-03-12
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной микробиологии. Определяют чувствительность бактерий, вызывающих кишечные инфекции, к комплексным антибактериальным препаратам. Проводят разведение антибактериальных препаратов в концентрации 10 мкг/мл в питательной среде с рН 7,2-7,6. Подготовленную взвесь бактерий вносят в лунки, содержащие приготовленные разведения. Вносят индикатор - 0,5% раствор бромкрезолового пурпурного в количестве 10 мкл. Инкубируют в течение 3-4 ч. Проводят визуальную оценку роста бактерий и оценку окраски среды в лунке при достижении рН 5,2-6,8 среды. Делают вывод о чувствительности бактерий к комплексным антибактериальным препаратам по наличию или отсутствию роста бактерий и изменению окраски среды с красной на желтую. Чувствительными считают бактерии, у которых отсутствует рост и изменение цвета питательной среды с антибактериальными препаратами. Устойчивыми считаются бактерии, у которых наблюдается рост и изменение цвета среды с антибактериальными препаратами. Изобретение позволяет сократить время определения чувствительности бактерий, вызывающих кишечные инфекции у животных, к комплексным антибактериальным препаратам. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности, ветеринарной микробиологии, и может найти применение для определения чувствительности выделенных из патологического материала (паренхиматозные органы, носовые, влагалищные смывы, сперма, молоко и т.д.) микроорганизмов, обладающих множественной лекарственной устойчивостью к любым сочетаниям антибактериальных препаратов или готовым комплексным.

Широкое, нерациональное применение антибактериальных препаратов в ветеринарной практике сопровождается увеличением устойчивости микроорганизмов к этим препаратам. Более половины культур возбудителей, выделенных от павших и больных животных, оказываются одновременно устойчивыми к 14-16 препаратам, а также повышается количество культур, усиливающих свой рост в присутствии целого ряда препаратов (Страчунский Л.С. Состояние антибиотикорезистентности в России //. Клиническая фармакология и терапия - 2000, № 2. - С.6 - 9. Клиническая микробиология для ветеринарных врачей. - М.: Колосс, 2006).

В ветеринарной практике для антибактериальной терапии часто используют комплексные препараты, эффективность применения которых так же, как и отдельных компонентов препаратов, определяется чувствительностью к ним выделенных возбудителей инфекционных болезней.

Для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам используют способ диффузии в агар с применением дисков, содержащих определенное количество (5, 10, 15, 30, 150, 300 мкг-ЕД) антибактериального препарата (МУК по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней животных. Утверждено ГУВМСХ СССР 30.09.1971).

Способ с использованием дисков прост в исполнении, но дает информацию только о бактериостатической активности конкретного антибактериального препарата. Он позволяет по диаметру зоны задержки роста (ЗЗР) определить минимальную подавляющую концентрацию антибактериального препарата в отношении испытуемой культуры возбудителя и классифицировать микроорганизмы на чувствительные с промежуточной чувствительностью и устойчивые (резистентные). Однако нельзя определить этим способом чувствительность резистентных микроорганизмов к действию широко используемых в ветеринарной практике комплексных препаратов из-за отсутствия стандартных бумажных дисков, содержащих одновременно два (или более) препарата.

Прототипом предлагаемого изобретения является способ серийных разведений на жидкой питательной среде (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М.: Медицина, 1973 г., с.177-178). Он заключается в том, что выделенная культура микроорганизма засевается в определенный объем среды (7-10 пробирок или чашек Петри на культуру), содержащей убывающие (от 125-500 до 0,03-0,1 мкг/мл) концентрации антибактериального препарата (или нескольких препаратов). Способ серийных разведений в жидкой питательной среде позволяет установить не только минимальную ингибирующую концентрацию (МИК), но и определить бактерицидную концентрацию (БАК) испытуемого препарата в отношении выделенного микроорганизма. Используя этот способ, определяется МИК и БАК вновь создаваемых комплексных препаратов в отношении различных культур микроорганизмов, в том числе с множественной лекарственной устойчивостью. Способ серийных разведений в жидкой питательной среде используется при исследовании чувствительности небольшого количества культур микроорганизмов, при этом устанавливается МИК антибактерального препарата. Для определения БАК необходим дополнительный посев из пробирок с наибольшим разведением препарата, где нет видимого роста культур на минимальную подавляющую концентрацию (МПА). Отсутствие роста на МПА свидетельствует о бактерицидном действии соответствующей концентрации препарата.

В клинической ветеринарной микробиологии способ серийных разведений в жидкой питательной среде имеет ограниченное применение из-за трудоемкости и громоздкости, тем более что чувствительность выделенных возбудителей необходимо определить не к одному, а к нескольким или даже 2-3 десяткам препаратов.

Предлагаемый способ решает задачу упрощения и снижения трудоемкости определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью к комплексным антибактериальным препаратам. Достигаемый технический результат - сокращение времени определения чувствительности к любому количеству эффективных препаратов, которые могут быть использованы для лечения больного животного.

Для этого в способе определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам, включающем разведение растворов антибактериальных препаратов стандартной питательной средой, внесение патогенных бактерий в приготовленные разведения, инкубирование их в термостате, визуальную оценку чувствительности патогенных бактерий к антибактериальным препаратам, согласно изобретению внесение патогенных бактерий осуществляют в разведение антибактериального препарата, приготовленного в терапевтической концентрации, заявленной производителем, раскапанного в лунки планшета, инкубирование проводят в течение 3÷4 часов, затем в питательную среду с антибактериальным препаратом и патогенными бактериями вводят бромкрезоловый пурпурный, проводят визуальную оценку окраски содержимого лунки и по изменению окраски с красной на желтую делают вывод о чувствительности патогенных бактерий к комплексному антибактериальному препарату, причем чувствительными к комплексным антибактериальным препаратам считают микроорганизмы, у которых отсутствует рост в питательной среде с антибиотиками и при добавлении индикатора цвет среды в лунке становится красным, как и в положительном контроле, а устойчивыми считают микроорганизмы, при культивировании которых в питательной среде с антибиотиками наблюдается рост и при добавлении индикатора цвет среды в лунке становится желтым, как и в отрицательном контроле. Бромкрезоловый пурпурный вводят в питательную среду с антибактериальным препаратом и патогенными бактериями в количестве 10 мкл 0,5% раствора.

Бромкрезоловый пурпурный - это аммонийная соль 5способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным   антибактериальным препаратам, патент № 2529711 ,5способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным   антибактериальным препаратам, патент № 2529711 способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным   антибактериальным препаратам, патент № 2529711 -дибром-о-крезолсульфофталеина, химический реактив, индикатор, переход окраски раствора от желтой к пурпуровой в интервале рН 5,2-6,8.

Способ осуществляют следующим образом. Для испытания берут 12-18-часовые культуры возбудителей (микроорганизмов), выделенных из патологического материала и обладающих множественной лекарственной устойчивостью. Из 12-18-часовой агаровой культуры возбудителя готовят микробную взвесь на стерильном изотоническом растворе натрия хлорида, по стандарту мутности доводят ее концентрацию до 10 млн.м.т. в мл. В качестве питательной среды при определении чувствительности выделенного возбудителя к сочетаниям антибактериальных препаратов используют МПБ (рН 7,2-7,4) либо бульон Хоттингера (рН 7,4-7,6). В качестве индикатора, который добавляют в питательную среду с антибиотиком и культурой, используют 0,05÷1% бромкрезолового пурпурного, который при изменении среды в кислую сторону рН 5,2-6,8 меняет свой цвет с красного на желтый. В разборные (стрипованные) стерильные 96-луночные планшеты раскапывают раствор с терапевтическими концентрациями антибактериального препарата в 0,2 мл питательной среды +0,01 мл 10 миллиардной взвеси тестируемой культуры +0,01 мл 0,05÷0,1% раствора индикатора бромкрезоловый пурпурный. Количество лунок на каждую культуру испытуемого возбудителя соответствует числу сочетаний или комплексных антибактериальных препаратов, к которым определяется чувствительность, плюс одна пробирка для контроля, т.е. для каждого препарата или сочетания занимается одна лунка. В контрольную пробирку препарат не вносят.

Планшеты с заполненными лунками мясопептонным бульоном, антибиотиком, культурой и индикатором инкубируют в течение 3-4 часов в термостате при температуре 36±1°C. Проводят последующую визуальную оценку окраски содержимого лунки и по ее изменению делают вывод о чувствительности микроорганизма к антибактериальному препарату (при наличии изменения цвета контрольной лунки).

Изменение окраски с красной на желтую в контрольной лунке оценивается визуально, отсутствие изменения цвета в лунке с антибиотиками свидетельствует о чувствительности микроорганизмов к комплексным антибактериальным препаратам, изменение окраски бульона при росте испытуемой культуры в лунках с антибиотиками говорит об устойчивости микроорганизмов.

Эффективными считаются антибиотики или два антибактериальных препарата, или комплексные препараты (включают два и более антибактериальных препаратов), которые в растворе, содержащем их в терапевтической концентрации (заявленной производителем), задерживают рост испытуемых культур микроорганизмов. При отсутствии роста микроорганизма в питательной среде с добавленным антибактериальным средством отмечается стабильное состоянием рН, поэтому при добавлении индикатора цвет среды не изменяется.

В случае если антибактериальное средство неэффективно или недостаточно эффективно, его терапевтической концентрации недостаточно для задержки роста испытуемой культуры микроорганизма. Соответственно, при росте микроорганизма в питательной среде с добавлением антибактериального средства отмечается накопление кислых продуктов его жизнедеятельности и рН среды сменяется в кислую сторону, т.е. понижается, поэтому при добавлении индикатора цвет среды изменяется.

Проведенные микроскопические исследования мазков из лунок, где в присутствии антибактериальных препаратов не было изменения окраски бульона, показали отсутствие в мазках микробных клеток. При высеве из таких лунок 0,01 мл на МПА рост возбудителя отсутствовал либо на поверхности агара обнаруживали единичные колонии (до 10, редко больше).

Пример. Исследован патологический материал с крупного свинокомплекса от 60 павших и больных поросят разного возраста 26 групп. В 15 группах диагностирована смешанная кишечная инфекция, была вызвана в разных ассоциациях 46 микроорганизмами (энтеропатогенная Е. Coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis, реже другие), в разной степени устойчивыми одновременно к 14-16 антибактериальным препаратам (ампициллин, амоксициллин, гентамицин, тилозин, тетрациклин, рифампицин, полимиксин, норфлоксацин, энрофлоксацин, фуразолидон, фурагин, эритромицин, левомицетин, доксициклин, стрептомицин, неомицин и др.). С учетом наличия зоны задержки роста (ЗЗР) вокруг диска с антибактериальным препаратом (меньше, чем для чувствительного микроорганизма, либо наличие в ЗЗР отдельных колоний, «пленки»), совместимости (сенергидный либо аддитивный эффект) антибактериальных препаратов были подобраны и испытаны по предлагаемому способу следующие комплексные препараты (таблица 1).

В таблице 2 приведен пример чувствительности изолированных из 13 проб патматериала культур стрептококка группы Д Enterococcus faecalis на твердых питательных средах с использованием коммерческих дисков. Подобные таблицы составляются на каждую выделенную культуру микроорганизмов. Сочетания препаратов выбираются с учетом наличия ЗЗР (зоны задержки роста) на АГВ вокруг диска с антибактериальным препаратом (промежуточная чувствительность, наличие в ЗЗР отдельных колоний, «пленки»), либо берутся заранее известные компоненты, входящие в состав комплексного препарата (например, рифампицин и полимиксин, используемые в составе рифапола).

Полученную изолированную культуру микроорганизма испытывают на чувствительность к сочетанием антибактериальных препаратов, подобранных в лаборатории (таблица 3), взятых в заявленных для них стандартной бактерицидной концентрации, или к комплексным готовым коммерческим официнальным формам, в заявленной терапевтической концентрации (таблица 1).

В последнем варианте определение чувствительности выделенного возбудителя к комплексному препарату можно проводить параллельно с исследованием способа диффузии в агар (а не после него, как в первом случае).

Чувствительность возбудителей с множественной лекарственной устойчивостью к комплексным препаратам оказалась различной. Наиболее эффективными были в конкретной ситуации диоксиген - 95,6%, диоксинор - 94,4% культур, кинокол 93,4%, микобаксан - 91,3, наименьшей была чувствительность к пульмокиту (41,3%), который проверялся не по результатам чувствительности выделенных культур к дискам антибиотиков (дисков с китасамицином, входящим в препарат, на момент исследований в наличии не было), а по просьбе из хозяйства, т.к. в нем этот препарат применяется. В целом, во всех группах быстро были подобраны от 4 до 12 препаратов используемых в хозяйстве, которые можно использовать для эффективной антибактериальной терапии.

Контроль полученных результатов - определение чувствительности выделенных культур (МПК) к антибактериальным препаратам проводили с помощью общепринятого метода определения чувствительности к антибиотикам серийных разведений в жидкой питательной среде. Полученные результаты исследования были сопоставимы с результатами, полученными при определении антибактериальной чувствительности стандартным общепринятым методом и подтверждены эффективной антибактериальной терапией в хозяйстве.

Результаты проведенных исследований показывают, что чувствительность микроорганизма с установленной множественной лекарственной устойчивостью можно дополнительно определить к имеющимся в наличии препаратам, например, к 14 антибактериальным препаратам, включая и их комплексные сочетания, за 3-4 часа.

Предложенный способ определения чувствительности патогенных бактерий с множественной лекарственной устойчивостью к комплексным антибактериальным препаратам позволяет в лаборатории значительно сократить время и количество расходных материалов, снизить трудоемкость определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью, а в хозяйстве более точно и в более ранние сроки назначать адекватную антибактериальную терапию.

Таблица 1
Результаты определения чувствительности культур с множественной лекарственной устойчивостью, выделенных из патологического материала, к комплексным антибактериальным препаратов.
№ п/пКомплексный препарат (сочетание антибактериальных веществ/препаратов) Концентрация в 1 мл среды, мкг (ЕД)Кол-во исследованных культурЧувствительные к препарату (кол-во/%)*Устойчивые к комплексному препаратуМПК чувствительных культур мкг/мл (определена в прототипе)МПК устойчивых культур мкг/мл (определена в прототипе)
1Микобаксан ампициллина натриевая соль + окситетрациклина гидрохлорид + тетрациклина гидрохлорид + сульфадимезин + нистатин10 мкг/мл 4642/91,34 0,04-6,2512,5-50
2Колифлок колистина сульфат + энрофлоксацин10 мкг/мл 4639/84,8 73,7-6,2512,5-50
3Нифулин метронидазол + фуразолидон + хлортетрациклина гидрохлорид 10 мкг/мл26 21/80,851,85-6,25 12,5-100
4 Квинокол Энрофлоксацин + гентамицин 10 мкг/мл3626/72,2 103,7-6,25 12,5-50
5 Диоксинор норфлоксацина гидрохлорид + диоксидин 10 мкг/мл3634/94,4 20,04-6,25 12,5-50
6 Амоксиклав амоксициллин + клавулановая кислота 10 мкг/мл3221/65,6 111,85- 6,25 12,5-100
7 Пульмокит китасамицин + триметоприм + сульфадиазина 10 мкг/мл4619/41,3 273,7-6,25 12,5-400

№ п/пКомплексный препарат (сочетание антибактериальных веществ/препаратов) Концентрация в 1 мл среды, мкг (ЕД)Кол-во исследованных культурЧувствительные к препарату (кол-во/%)*Устойчивые к комплексному препаратуМПК чувствительных культур мкг/мл (определена в прототипе)МПК устойчивых культур мкг/мл (определена в прототипе)
8Фурамикс полимиксина сульфат + фуразолидон 10 мкг/мл36 27/7593,7-6,25 12,5-200
9 Тилоколин тилозин + колистина сульфат 10 мкг/мл36 24/66,7123,7-6,25 12,5-200
10 Рифапол полимиксин + рифампицин 10 мкг/мл2616/61,5 103,7-6,25 12,5-200
11 Диоксиген диоксидин + гентамицин10 мкг/мл 4644/95,6 21,85-6,2512,5-50
12Рифалекс левомицетин + рифампицин10 мкг/мл 2618/69,2 83,7-6,2512,5-200
13Гентаприм гентамицина сульфат + сульфадиметоксин + триметоприм 10 мкг/мл4634/73,9 121,85-6,25 12,5-100
14 Дизпаркол левомицетин + метронидазол + тилозин 10 мкг/мл2616/61,5 103,7-6,25 12,5-200
15 Кинокол (энрофлоксацин - колистина сульфат) 10 мкг/мл4643/93,4 33,7-6,25 12,5-100
16 Анзациклин рифампицин и тетрациклин10 мкг/мл4638/82,6 81,85-6,25 12,5-200
Примечание - *расчет % чувствительных культур - 42 (чувствительные) : 46 (всего исследованных культур)*100=91,3%

Таблица 2
Результаты исследования чувствительности к антибактериальным препаратам на примере выделенных бактериальных культур Enterococcus faecalis. Исследование с помощью дисков с антибиотиками
Наименование Зона задержки роста микроорганизмов, в мм
Воспроизводство сосуныВоспроизводство свиноматкиуч. доращивания уч. Откорма № 1уч. Откорма № 2
0-1 дн 1-5 дн.10-15 дн № 1 № 2 № 335 дн. 60 дн.70 дн.88 дн.128 дн.150 дн.180 дн.
Ампициллинусус 17ус усус23р 2230р20р 23- -
Амоксициллин ус-17 ус12рус 241525р 1715- -
Линкомицин ус-25 ус12р- 16пл-30р 27плус -ус
Эритромицин ус- усус- ус13- 11плусус ус-
Тетрациклин- 20рус --- -ус20р 12р12рус
Левомицетин 10-20р 18плусус 10пл10 1213- -
Рифампицин ус12р 181112 1312р13 30пл30р30р 10р
Гентамицин10р усус10 10рус- -30пл1611пл15р
Полимиксин- 18рус ус18р10 13-10 10рус14р 10
Фуразолидон 10р18 -20р- 20ус10р 192612р 14р21р
Фурадонин13р17р 12пл13пл 14р21- 1524р30р 15р19р 17
Норфлоксацин -ус10 1410р13 10-25р 201215р 18р
Энрофлоксацин 12р-- -10пл11 --28 23р1710р 10р
Тилозин -ус 13русус усус- 1515ус --
Стрептомицин -ус --- 11-- 23р22рус 10
Доксициклин121510 101013 101220 1312р10р
«-» - отсутствие задержки роста культуры вокруг диска;
Р - в зоне задержки роста рост устойчивых рас микроорганизмов к антибактериальному препарату в виде отдельных колоний;
Пл - в зоне задержки роста «газона» сплошной рост устойчивых рас микроорганизмов к антибактериальному препарату в виде пленки;
Ус - усиление роста культур вокруг диска с антибактериальным препаратом.

Таблица 3
Результаты определения чувствительности культур с множественной лекарственной устойчивостью, выделенных из патологического материала, к сочетаниям антибактериальных препаратов в жидкой питательной среде.
№ п/пСочетание антибактериальных препаратовКонцентрация в 1 мл среды, мкг (ЕД)Кол-во исследованных культур Чувствительные к сочетанию Устойчивые к сочетанию
1 Ампициллин + полимиксин 7,5+7554 1
2 рифампицин + доксициклин1,25+2,5 1111 0
3Гентамицин + энрофлоксацин2,5+1,25 862
4Полимиксин + рифампицин 75+1,258 71
5 Энрофлоксацин + Фуразолидон 1,25+751210 2

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ определения чувствительности бактерий, вызывающих кишечные инфекции, к комплексным антибактериальным препаратам, характеризующийся тем, что проводят разведение антибактериальных препаратов в концентрации 10 мкг/мл в питательной среде с рН 7,2- 7,6, подготовленную взвесь бактерий вносят в лунки, содержащие приготовленные разведения, вносят индикатор, в качестве которого используют 10 мкл 0,5% раствора бромкрезолового пурпурного, инкубируют в течение 3-4 ч, при достижении рН 5,2-6,8 среды проводят визуальную оценку роста бактерий и оценку окраски среды в лунке, по наличию или отсутствию роста бактерий и изменению окраски среды с красной на желтую делают вывод о чувствительности бактерий к комплексным антибактериальным препаратам, при этом чувствительными считают бактерии, у которых отсутствует рост и изменение цвета питательной среды с антибактериальными препаратами, а устойчивыми считаются бактерии, у которых наблюдается рост и изменение цвета среды с антибактериальными препаратами.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2529711

patent-2529711.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12Q1/04 установление присутствия и(или) вида микроорганизма; использование селективных сред для испытания антибиотиков или бактерицидов; составы, содержащие химический индикатор для этих целей

Патенты РФ в классе C12Q1/04:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
способ оценки выживаемости бифидо- и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных -  патент 2528867 (20.09.2014)
способ и набор для детекции микроорганизмов -  патент 2527897 (10.09.2014)
способ видовой и штаммовой идентификации бифидобактерий филотипа bifidobacterium longum -  патент 2527069 (27.08.2014)
способ идентификации лактобацилл -  патент 2526576 (27.08.2014)
способ видовой дифференциации жизнеспособных родококков, иммобилизованных в гелевом носителе -  патент 2525934 (20.08.2014)
способ выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов -  патент 2525695 (20.08.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
способы разделения, характеристики и(или) идентификации микроорганизмов с помощью масс-спектрометрии -  патент 2519650 (20.06.2014)
оптический индикатор для обнаружения бактериальных патогенов -  патент 2519339 (10.06.2014)

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)
среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev -  патент 2528069 (10.09.2014)


Наверх