ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
C12R1/01 бактерии или актиномицеты
C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 
Автор(ы):, , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-10-26
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, фосфорит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет увеличить скорость роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов. 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области создания биопрепаратов на основе индивидуальных микроорганизмов и их сочетаний (консорциумов) и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая глюкозу, аспарагин, сульфат калия, кукурузный экстракт, хлорид кальция, фосфат натрия и воду [1]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста азотфиксирующих микроорганизмов, вследствие чего она малопригодна для выращивания их консорциума.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция, сахарозу и воду [2]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста на ней азотфиксирующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, вследствие чего она также малопригодна для выращивания их консорциума.

Наиболее близким к заявляемому нами объекту по совокупности признаков и достигаемому техническому эффекту является питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду (т.н. среда Берка), описанная в [3]. Недостатком данной питательной среды, которая в связи с указанным обстоятельством взята нами за прототип, также является сравнительно низкая скорость роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов, и, следовательно, их консорциума в целом.

Цель настоящего изобретения - увеличение скорости роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов на питательной среде при выращивании консорциума на их основе.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II) и воду, дополнительно содержит фосфорит при следующем соотношении компонентов (г/л):

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат0.15-0.25
Хлорид натрия0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Фосфорит 1.0-1.5
Вода дистиллированнаяДо 1 л

В результате использования данной питательной смеси скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов возрастает более чем в 15 раз, фосфатмобилизующих - почти на порядок по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3].

До настоящего времени в литературе не была кем-либо описана питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая вышеуказанную совокупность ингредиентов вообще и фосфорит в частности. Это обстоятельство дает нам основание считать, что заявляемый нами объект соответствует первому критериальному признаку изобретения по патентному законодательству РФ - новизна. С другой стороны, сопоставление известных признаков питательной среды-прототипа [3] и отличительных признаков заявляемой нами питательной среды (а именно введение в нее фосфорита) не позволяют предсказать априори появления у нее новых по сравнению с прототипом свойств, а именно указанного выше резкого увеличения скорости роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов в рамках вышеуказанного консорциума (в обоих случаях - на порядок и более). Указанное обстоятельство дает нам право утверждать, что заявляемый объект явным образом не следует из известного в данной отрасли техники уровня; следовательно, налицо его соответствие второму критериальному признаку изобретения по патентному законодательству РФ - изобретательский уровень. Предлагаемая нами питательная среда достаточно без особого труда может быть создана в промышленном масштабе и ее применение для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов осуществимо без каких-либо проблем, в связи с чем есть все основания утверждать: заявляемому нами объекту присущ и третий установленный патентным законодательством РФ критериальный признак изобретения, а именно промышленная применимость.

Заявляемая на предмет изобретения питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов может быть проиллюстрирована нижеследующими примерами.

Пример 1

Приготавливают питательную среду для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60
Гидрофосфат калия 0.12
Сульфат магния гептагидрат 0.15
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.02
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.002
Сахароза18.0
Фосфорит1.0
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Составляют консорциум азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов на основе коллекционных (депонированных) штаммов поименованных микроорганизмов (Pseudomonas brassicacearum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10388) и (Sphingobacterium multivorum. Регистрационный номер в ВКПМ В-10385), соответственно, с соотношением 1:1 по количеству КОЕ (колониеобразующих единиц). Для этого предварительно выращивают азотфиксирующие микроорганизмы на агаризованной среде Эшби, а фосфатмобилизующие - на агаризованной среде Муромцева, после чего обе эти культуры высеваются на питательную среду указанного выше состава. Выращивание ведут в течение того периода времени, в котором имеет место прирост их численности (5.0 сут), после чего этот процесс прекращают. Для определения численности микроорганизмов сразу же проводят посев консорциума на агаризованные питательные среды (среда Эшби в случае азотфиксирующих и среда Муромцева в случае фосфатмобилизирующих) и определяют среднюю скорость их роста в (млн·г-1·сут-1) как частное от деления числа микроорганизмов (в миллионах единиц) на массу питательной среды (в г) и время выращивания (в сут). Данные по скорости роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов для вышеуказанной питательной среды представлены в Таблице 1.

ПРИМЕР 2

Выполняют, как и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0006
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Фосфорит1.2
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая представлены в Таблице 1.

Пример 3

Проводят таким же образом, как и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.70
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.25
Хлорид натрия 0.25
Сульфат кальция дигидрат0.06
Молибдат натрия0.0007
Сульфат железа(II)0.004
Сахароза22.0
Фосфорит1.5
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные по определению скорости роста поименовавнных выше микроорганизмов для указанного случая приведены в Таблице 1.

Пример 4 (сравнительный)

Осуществляют по типу примера 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов приготавливают питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Фосфорит0.8
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Показатели скорости роста вышеуказанных микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 5 (сравнительный)

Выполняют подобно примеру 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Фосфорит1.8
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные по определению скорости роста микроорганизмов для этого случая приведены в Таблице 1.

Пример 6 (сравнительный)

Выполняют по той же общей технологии, что и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа(II)0.001
Сахароза14.0
Фосфорит1.2
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Результаты по определению скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 7 (сравнительный)

Проводят, как и пример 1, но выращивание консорциума вышеуказанных микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа(II)0.006
Сахароза28.0
Фосфорит1.2
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные по скорости роста обоих этих микроорганизмов для указанного случая представлены в Таблице 1.

Пример 8 (сравнительный)

Осуществляют, как и пример 1, но для выращивания консорциума микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа(II)0.001
Сахароза14.0
Фосфорит1.8
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.

Пример 9 (сравнительный)

Осуществляют, применяя описанную в примере 1 общую схему, но выращивание консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа(II)0.006
Сахароза28.0
Фосфорит1.8
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая приведены в Таблице 1.

Пример 10 (по прототипу [3])

Выполняют по той же технологической схеме, что и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные о скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая см. в Таблице 1.

Пример 11 (по аналогу [1])

Осуществляют таким же образом, как и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Сульфат калия0.20
Хлорид кальция гексагидрат 3.30
Фосфат натрия додекагидрат 3.80
Кукурузный экстракт0.20
Глюкоза10.0
Аспарагин1.00
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Сведения о скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 12 (по аналогу [2])

Выполняют по той же технологической схеме, что и пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.10
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Карбонат кальция5.00
Сахароза20.0
Вода дистиллированнаяДо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая также представлены в Таблице 1.

Таблица 1
№ примераСодержание фосфорита в питательной смеси, г/лСредняя скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов (Pseudomonas brassicacearum), млн·г-1·сут-1 Средняя скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов {Sphingobacterium multivorum), млн·г-1·сут-1
11.0 600/51750/5
21.2620/5 1780/5
3 1.5610/5 1730/5
4 (сравнительный) 0.8490/51520/5
5 (сравнительный) 1.8600/51690/5
6 (сравнительный) 1.2540/51650/5
7 (сравнительный) 1.2590/51700/5
8 (сравнительный) 1.8550/51620/5
9 (сравнительный) 1.8570/51660/5
10 (по прототипу) -36/5175/5
11 (по аналогу [1]) -12/5180/5
12 (по аналогу [2]) -55/56/5

Как можно видеть из приведенных в Таблице 1 данных, применение заявляемой питательной среды, содержащей фосфорит в количестве (1.0-1.5) г/л, позволяет резко увеличить скорости роста азотфиксирующих (Pseudomonas brassicacearum) и фосфатмобилизующих (Sphingobacterium multivorum) микроорганизмов в рамках их консорциума по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3] и сред-аналогов [1] и [2]. Заявляемые нами количества фосфорита в питательной смеси являются существенными: увеличение этого количества сверх указанного верхнего заявляемого значения (1.5 г/л) не приводит к дальнейшему возрастанию скорости роста как тех, так и других микроорганизмов и даже происходит некоторое ее снижение, при уменьшении же ниже указанного нижнего заявляемого значения (1.0 г/л) имеет место снижение скорости роста.

Аналогичные результаты были зафиксированы нами и на других культурах азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов (в частности, Azotobacter chroococcum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10387 и Achromobacter xylosoxidans, Регистрационный номер в ВКПМ В-10386).

ЛИТЕРАТУРА

[1] Основные микробиологические и биохимические методы исследования почвы (Методические рекомендации) / Под ред. Ю.М.Возняковской. - Л.: ВНИИСХМ, 1987. С.31.

[2] Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 3-е издание переработанное, под ред. Н.С.Егорова. М: Издательство Московского университета. 1995. - С.204.

[3] Патент РФ 2.177.466 (2001), МПК C05F 11/08, C12N 1/20 (прототип).

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит фосфорит при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат0.15-0.25
Хлорид натрия0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Фосфорит 1.0-1.5
Вода дистиллированнаяДо 1 л


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2528874

patent-2528874.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)
среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev -  патент 2528069 (10.09.2014)

Класс C12R1/01 бактерии или актиномицеты

Патенты РФ в классе C12R1/01:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений -  патент 2524434 (27.07.2014)
способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий -  патент 2524432 (27.07.2014)
штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной целлюлозы -  патент 2523606 (20.07.2014)
штамм бактерий exiguobacterium mexicanum - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2523584 (20.07.2014)
способ очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий exguobacterium mexicanum -  патент 2521654 (10.07.2014)

Класс C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 

Патенты РФ в классе C05F11/08:
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
способ получения почвосмеси для проращивания семян и развития саженцев -  патент 2528711 (20.09.2014)
способ микробиологической переработки птичьего помета -  патент 2522523 (20.07.2014)
биопрепарат под бобовую культуру жидкой формы на основе клубеньковых бактерий -  патент 2514217 (27.04.2014)
способ получения биоминеральных удобрений и мелиорантов (варианты) -  патент 2512277 (10.04.2014)
способ повышения симбиотической активности бобовых трав -  патент 2511299 (10.04.2014)
способ получения гумифицированной почвы -  патент 2508281 (27.02.2014)
способ содержания почвы виноградников -  патент 2506733 (20.02.2014)


Наверх