ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
C12R1/01 бактерии или актиномицеты
C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 
Автор(ы):, , , , , , ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-10-26
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа (II), сахарозу, сапропель и воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет увеличить скорость роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов. 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области создания биопрепаратов на основе индивидуальных микроорганизмов и их сочетаний (консорциумов) и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая глюкозу, аспарагин, сульфат калия, кукурузный экстракт, хлорид кальция, фосфат натрия и воду [1]. Недостатком этой питательной среды является относительно низкая скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста азотфиксирующих микроорганизмов, что делает ее малопригодной для выращивания их консорциума.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция, сахарозу и воду [2]. Недостатком этой питательной среды является относительно низкая скорость роста на ней азотфиксирующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, что также делает ее малопригодной для выращивания их консорциума.

Наиболее близкой к заявляемому нами объекту по совокупности признаков и достигаемому техническому эффекту является питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа (II), сахарозу и воду, описанная в [3]. Недостатком данной питательной среды, которая в связи с только что отмеченным обстоятельством выбрана нами в качестве объекта-прототипа, также является относительно низкая скорость роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов, и, следовательно, их консорциума в целом.

Целью данного изобретения является увеличение скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов при сохранении или небольшом увеличении скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов при выращивании консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов.

Вышеуказанная цель достигается тем, что в питательную среду для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащую дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа (II) и воду, дополнительно вводят сапропель при следующем соотношении ингредиентов (г/л):

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат0.15-0.25
Хлорид натрия0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа (II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Сапропель 0.5-1.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

В результате использования данной питательной смеси скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов возрастает примерно в 1.5-2.0 раза, тогда как фосфатмобилизующих - не более чем на 15-20% по сравнению с аналогичными скоростями роста для питательной среды-прототипа [3].

До сих пор в литературе не была описана кем бы то ни было питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая вышеуказанную совокупность ингредиентов вообще и сапропель, в частности; более того, применение сапропеля в составе питательных сред для выращивания микроорганизмов неизвестно вообще. Отмеченное обстоятельство позволяет нам утверждать, что заявляемый нами объект соответствует первому установленному патентным законодательством РФ критериальному признаку изобретения - новизна. Сопоставление же известных признаков питательной среды-прототипа [3] и отличительных признаков, характеризующих заявляемый нами объект (а именно - введение в нее сапропеля), не позволяет предсказать априори появления у него новых по сравнению с прототипом свойств, а именно указанного выше полутора-двукратного увеличения скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов при небольшом увеличении скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, входящих в состав вышеуказанного консорциума. Указанный момент дает нам основания считать, что заявляемый объект явным образом не следует из известного в данной отрасли техники уровня, а значит, говорить о его соответствии второму установленному законодательством РФ критериальному признаку изобретения - изобретательский уровень. Указанная выше питательная среда легко может быть получена в промышленном масштабе, а ее применение для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов - осуществимо без каких-либо проблем, так что есть все основания утверждать, что заявляемому нами объекту присущ и третий установленный законодательством РФ критериальный признак изобретения - промышленная применимость.

Заявляемая на предмет изобретения питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

Приготавливают питательную среду для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60
Гидрофосфат калия 0.12
Сульфат магния гептагидрат 0.15
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.02
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа (II)0.002
Сахароза18.0
Сапропель0.5
Вода дистиллированная до 1 л

Составляют консорциум азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов на основе коллекционных (депонированных) штаммов поименованных микроорганизмов (Pseudomonas brassicacearum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10388) и (Sphingobacterium multivorum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10385), соответственно с соотношением 1:1 по количеству КОЕ (колониеобразующих единиц). Для этого предварительно выращивают азотфиксирующие микроорганизмы на агаризованной среде Эшби, а фосфатмобилизующие - на агаризованной среде Муромцева, после чего обе эти культуры высеваются на питательную среду указанного выше состава. Выращивание ведут в течение того периода времени, в котором имеет место прирост их численности (4.5 сут), после чего этот процесс прекращают. Для определения численности микроорганизмов сразу же проводят посев консорциума на агаризованные питательные среды (среда Эшби в случае азотфиксирующих и среда Муромцева - в случае фосфатмобилизирующих) и определяют среднюю скорость их роста в (млн·г-1·сут-1) как частное от деления числа микроорганизмов (в миллионах единиц) на массу питательной среды (в г) и время выращивания (в сут). Данные по скорости роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов для вышеуказанной питательной среды представлены в Таблице 1.

Пример 2

Выполняют как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0006
Сульфат железа (II)0.003
Сахароза20.0
Сапропель1.0
Вода дистиллированная до 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая представлены в Таблице 1.

Пример 3

Осуществляют таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.70
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.25
Хлорид натрия 0.25
Сульфат кальция дигидрат0.06
Молибдат натрия0.0007
Сульфат железа (II)0.004
Сахароза22.0
Сапропель1.5
Вода дистиллированная до 1 л

Результаты по определению скорости роста поименовавнных выше микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 4 (сравнительный)

Проводят таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов приготавливают питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа (II)0.003
Сахароза20.0
Сапропель0.3
Вода дистиллированная до 1 л

Сведения о скорости роста вышеуказанных микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 5 (сравнительный)

Выполняют по общей схеме Примера 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа (II)0.003
Сахароза20.0
Сапропель2.0
Вода дистиллированная до 1 л

Показатели скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 6 (сравнительный)

Проводят таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа (II)0.001
Сахароза14.0
Сапропель1.0
Вода дистиллированная до 1 л

Показатели скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 7 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но выращивание консорциума вышеуказанных микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа (II)0.006
Сахароза28.0
Сапропель1.0
Вода дистиллированная до 1 л

Показатели скорости роста обоих этих микроорганизмов для данного случая даны в Таблице 1.

Пример 8 (сравнительный)

Проводят таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа (II)0.001
Сахароза14.0
Сапропель2.0
Вода дистиллированная до 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для данного случая приведены в Таблице 1.

Пример 9 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но выращивание консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа (II)0.006
Сахароза28.0
Сапропель2.5
Вода дистиллированная до 1 л

Показатели скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 10 (по прототипу [3])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа (II)0.003
Сахароза20.0
Вода дистиллированная до 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая показаны в Таблице 1.

Пример 11 (по аналогу [1])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Сульфат калия0.20
Хлорид кальция гексагидрат 3.30
Фосфат натрия додекагидрат 3.80
Кукурузный экстракт0.20
Глюкоза10.0
Аспарагин1.00
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая приведены в Таблице 1.

Пример 12 (по аналогу [2])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.10
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Карбонат кальция5.00
Сахароза20.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая также представлены в Таблице 1.

Таблица 1
№ примераСодержание сапропеля в питательной смеси, г/лСредняя скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов (Pseudomonas brassi-cacearum), млн·г-1·сут-1 Средняя скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов (Sphingobacterium mul-tivorum), млн·г-1·сут-1
10.5 65/4.5195/4.5
21.070/4.5 210/4.5
3 1.568/4.5 212/4.5
4 (сравнительный) 0.350/4.5180/4.5
5 (сравнительный) 2.068/4.5200/4.5
6 (сравнительный) 1.059/4.5195/4.5
7 (сравнительный) 1.061/4.5205/4.5
8 (сравнительный) 2.063/4.5195/4.5
9 (сравнительный) 2.064/4.5200/4.5
10 (по прототипу [3]) -36/4.5175/4.5
11 (по аналогу[1]) -12/4.5180/4.5
12 (по аналогу[2]) -55/4.56/4.5

Как можно видеть из приведенных в Табл.1 данных, использование заявляемой питательной среды, содержащей сапропель в количестве (0.5-1.5) г/л, позволяет весьма заметно повысить скорость роста азотфиксирующих (Pseudomonas brassicacearum) микроорганизмов при незначительном повышении скорости роста фосфатмобилизующих (Sphingobacterium multivoruni) микроорганизмов в рамках их консорциума по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3] и сред-аналогов [1] и [2]. При этом заявляемые нами количества сапропеля в питательной смеси являются существенными: при увеличении его сверх указанного верхнего заявляемого значения (1.5 г/л) дальнейшего прироста скорости роста как тех, так и других микроорганизмов уже не наблюдается, при уменьшении же ниже указанного нижнего заявляемого значения (1.0 г/л) отмечается снижение скорости роста.

Похожие результаты были получены нами и на других культурах азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов (в частности, Azotobacter chroococcum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10387 и Achromobacter xylosoxidans, Регистрационный номер в ВКПМ В-10386).

ЛИТЕРАТУРА

[1] Основные микробиологические и биохимические методы исследования почвы (Методические рекомендации) / Под ред. Ю.М.Возняковской. - Л.: ВНИИСХМ, 1987. С.31.

[2] Руководство к практическим занятиям по микробиологии. 3-е издание переработанное, под ред. Н.С.Егорова. М: Издательство Московского университета. 1995. С.204.

[3] Патент РФ 2.177.466 (2001), МПК C05F 11/08, C12N 1/20 (прототип).

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа (II), сахарозу и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сапропель при следующем соотношении компонентов, г/л:

дигидрофосфат калия 0,60-0,70
гидрофосфат калия 0,12-0,20
сульфат магния гептагидрат0,15-0,25
хлорид натрия0,15-0,25
сульфат кальция дигидрат 0,02-0,06
молибдат натрия 0,0005-0,0007
сульфат железа (II) 0,002-0,004
сахароза 18,0-22,0
сапропель 0,5-1,5
вода дистиллированнаядо 1 л


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2528744

patent-2528744.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)
среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev -  патент 2528069 (10.09.2014)

Класс C12R1/01 бактерии или актиномицеты

Патенты РФ в классе C12R1/01:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений -  патент 2524434 (27.07.2014)
способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий -  патент 2524432 (27.07.2014)
штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной целлюлозы -  патент 2523606 (20.07.2014)
штамм бактерий exiguobacterium mexicanum - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2523584 (20.07.2014)
способ очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий exguobacterium mexicanum -  патент 2521654 (10.07.2014)

Класс C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 

Патенты РФ в классе C05F11/08:
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
способ получения почвосмеси для проращивания семян и развития саженцев -  патент 2528711 (20.09.2014)
способ микробиологической переработки птичьего помета -  патент 2522523 (20.07.2014)
биопрепарат под бобовую культуру жидкой формы на основе клубеньковых бактерий -  патент 2514217 (27.04.2014)
способ получения биоминеральных удобрений и мелиорантов (варианты) -  патент 2512277 (10.04.2014)
способ повышения симбиотической активности бобовых трав -  патент 2511299 (10.04.2014)
способ получения гумифицированной почвы -  патент 2508281 (27.02.2014)
способ содержания почвы виноградников -  патент 2506733 (20.02.2014)


Наверх