ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
C12R1/01 бактерии или актиномицеты
C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 
Автор(ы):, , , , , , ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-10-26
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, цеолит и дистиллированную воду в заданном соотношении. Изобретение позволяет повысить скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов без изменения скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов. 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области создания биопрепаратов на основе индивидуальных микроорганизмов и их сочетаний (консорциумов) и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция, сахарозу и воду [1]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста на ней азотфиксирующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, что делает ее малопригодной для выращивания их консорциума.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая глюкозу, аспарагин, сульфат калия, кукурузный экстракт, хлорид кальция, фосфат натрия и воду [2]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста азотфиксирующих микроорганизмов, что делает ее также малопригодной для выращивания их консорциума.

Наиболее близким к заявляемому нами объекту по совокупности признаков и достигаемому техническому эффекту является питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду [3]. Недостатком данной питательной среды, которая в связи с только что отмеченным обстоятельством выбрана нами в качестве объекта-прототипа, также является сравнительно низкая скорость роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов и, значит, и их консорциума в целом.

Целью данного изобретения является увеличение скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов при сохранении скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов при выращивании консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II) и воду, дополнительно содержит цеолит при следующем соотношении компонентов, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат0.15-0.25
Хлорид натрия0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Цеолит 1.0-2.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

В результате использования данной питательной смеси скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов остается практически неизменной, тогда как скорость роста фосфатмобилизующих возрастает в 4-5 раз по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3].

На данный момент времени в литературе не описана питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая вышеуказанную совокупность компонентов вообще и цеолит в частности. Это обстоятельство позволяет нам сделать вывод, что заявляемый нами объект подпадает под первый критериальный признак изобретения, установленный патентным законодательством РФ, а именно новизна. Сопоставление известных признаков питательной среды-прототипа [3] и отличительных признаков, характеризующих заявляемый нами объект (а именно - введение в питательную среду цеолита), не позволяет предсказать априори появления у него новых по сравнению с прототипом свойств, а именно указанного выше резкого увеличения скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, входящих в состав вышеуказанного консорциума, при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов. Данный факт позволяет утверждать, что заявляемый нами объект явным образом не следует из известного в данной отрасли техники уровня и соответствует второму установленному законодательством РФ критериальному признаку изобретения - изобретательский уровень. Заявляемая нами на предмет изобретения питательная среда достаточно легко может быть получена в промышленном масштабе, не вызывает сколько-нибудь существенных затруднений и ее применение для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, а значит, вышеуказанный объект подпадает и под третий критериальный признак изобретения РФ - промышленная применимость.

Заявляемый нами объект иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

Готовят питательную среду для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60
Гидрофосфат калия 0.12
Сульфат магния гептагидрат 0.15
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.02
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.002
Сахароза18.0
Цеолит1.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

Составляют консорциум азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов на основе коллекционных (депонированных) штаммов поименованных микроорганизмов {Pseudomonas brassicacearum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10388) и (Sphingobacterium multivorum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10385), соответственно с соотношением 1:1, по количеству КОЕ (колониеобразующих единиц), для чего предварительно выращивают азотфиксирующие микроорганизмы на агаризованной среде Эшби, а фосфатмобилизующие - на агаризованной среде Муромцева. После этого обе эти культуры микроорганизмов высеваются на питательную среду указанного выше состава. Выращивание ведут в течение того периода времени, в котором имеет место прирост их численности (6,0 сут), по его достижении этот процесс прекращают. Для определения численности микроорганизмов сразу же проводят посев образовавшегося консорциума на агаризованные питательные среды (среда Эшби в случае азотфиксирующих и среда Муромцева в случае фосфатмобилизирующих микроорганизмов) и определяют среднюю скорость их роста в (млн·г -1·сут-1) как частное от деления числа микроорганизмов (в миллионах единиц) на массу питательной среды (в г) и время выращивания (в сут). Итоговые результаты по определению средней скорости роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов для вышеуказанной питательной среды даны в Таблице 1.

Пример 2

Выполняют по общей технологической схеме Примера 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0006
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Цеолит1.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая приведены в Таблице 1.

Пример 3

Осуществляют как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.70
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.25
Хлорид натрия 0.25
Сульфат кальция дигидрат0.06
Молибдат натрия0.0007
Сульфат железа(II)0.004
Сахароза22.0
Цеолит2.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные по определению скорости роста вышеуказанных микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 4 (сравнительный)

Выполняют таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов приготавливают питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Цеолит0.7
Вода дистиллированнаядо 1 л

Результаты по определению скорости роста поименованных выше микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.

Пример 5 (сравнительный)

Проводят как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Цеолит2.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для такого случая приведены в Таблице 1.

Пример 6 (сравнительный)

Осуществляют таким же образом, как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа(II)0.001
Сахароза14.0
Цеолит1.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Сведения о скорости роста микроорганизмов для этого случая даны в Таблице 1.

Пример 7 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но выращивание консорциума вышеуказанных микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа(II)0.006
Сахароза28.0
Цеолит1.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Величины скорости роста обоих этих микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.

Пример 8 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но для выращивания консорциума микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат0.015
Молибдат натрия0.0003
Сульфат железа(II)0.001
Сахароза14.0
Цеолит2.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для этого случая представлены в Таблице 1.

Пример 9 (сравнительный)

Выполняют таким же образом, как и Пример 1, но выращивание консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат0.09
Молибдат натрия0.0010
Сульфат железа(II)0.006
Сахароза28.0
Цеолит2.5
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные скорости роста микроорганизмов для этого случая см. в Таблице 1.

Пример 10 (по прототипу [3])

Выполняют с использованием той же общей схемы, что и в Примере 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат0.05
Молибдат натрия0.0005
Сульфат железа(II)0.003
Сахароза20.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

Сведения о скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая также приведены в Таблице 1.

Пример 11 (по аналогу [1])

Выполняют с использованием той же технологической схемы, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.10
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Карбонат кальция5.00
Сахароза20.0
Вода дистиллированнаядо 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для указанного случая также приведены в Таблице 1.

Пример 12 (по аналогу [2])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Сульфат калия0.20
Хлорид кальция гексагидрат 3.30
Фосфат натрия додекагидрат 3.80
Кукурузный экстракт0.20
Глюкоза10.0
Аспарагин1.00
Вода дистиллированнаядо 1 л

Показатели, характеризующие рост микроорганизмов для рассматриваемого случая, также приведены в Таблице 1.

Таблица 1
№ примераСодержание цеолита в питательной смеси, г/лСредняя скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов (Pseudomonas brassicacearum), млн·г -1·сут-1Средняя скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов (Sphingobacterium multivorum), млн·г-1·сут-1
11.0 34/6720/6
21.535/6 740/6
3 2.035/6 740/6
4 (сравнительный) 0.733/6640/6
5 (сравнительный) 2.536/6730/6
6 (сравнительный) 1.533/6680/6
7 (сравнительный) 1.532/6690/6
8 (сравнительный) 2.533/6670/6
9 (сравнительный) 2.533/6680/6
10 (по прототипу)[3]) -36/6175/6
11 (по аналогу [1]) -55/66/6
12 (по аналогу [2]) -12/6180/6

Из приведенных в Таблице 1 данных видно, что использование заявляемой нами питательной среды, содержащей цеолит в количестве (1.0-2.0) г/л, позволяет весьма значительно увеличить скорости роста фосфатмобилизующих (Sphingobacterium multivorum) микроорганизмов при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих [Pseudomonas brassicacearum) организмов в рамках их консорциума по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3] и сред-аналогов [1] и [2]. Отметим, что заявляемые нами количества цеолита в питательной смеси являются существенными: при превышении указанного верхнего заявляемого уровня (2.0 г/л) дальнейшего прироста скорости роста как тех, так и других микроорганизмов уже не наблюдается (и даже происходит некоторое ее снижение), при уменьшении же ниже указанного нижнего заявляемого уровня (1.0 г/л) имеет место снижение скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов,

Аналогичные результаты были получены нами и на других культурах азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов (в частности, Azotobacter chroococcum, регистрационный номер в ВКПМ В-10387 и Achromobacter xylosoxidans, регистрационный номер в ВКПМ В-10386).

Источники информации

[1] Руководство к практическим занятиям по микробиологии. 3-е издание переработанное, под ред. Н.С.Егорова. М.: Издательство Московского университета. 1995. С.204.

[2] Основные микробиологические и биохимические методы исследования почвы (Методические рекомендации) / Под ред. Ю.М.Возняковской. - Л.: ВНИИСХМ, 1987. С.31.

[3] Патент РФ 2.177.466 (2001), МПК C05F 11/08, C12N 1/20 (прототип).

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит цеолит при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат0.15-0.25
Хлорид натрия0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Цеолит 1.0-2.0
Вода дистиллированнаядо 1 л


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2528740

patent-2528740.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)
среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev -  патент 2528069 (10.09.2014)

Класс C12R1/01 бактерии или актиномицеты

Патенты РФ в классе C12R1/01:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений -  патент 2524434 (27.07.2014)
способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий -  патент 2524432 (27.07.2014)
штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной целлюлозы -  патент 2523606 (20.07.2014)
штамм бактерий exiguobacterium mexicanum - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2523584 (20.07.2014)
способ очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий exguobacterium mexicanum -  патент 2521654 (10.07.2014)

Класс C05F11/08 органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и тп 

Патенты РФ в классе C05F11/08:
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
способ получения почвосмеси для проращивания семян и развития саженцев -  патент 2528711 (20.09.2014)
способ микробиологической переработки птичьего помета -  патент 2522523 (20.07.2014)
биопрепарат под бобовую культуру жидкой формы на основе клубеньковых бактерий -  патент 2514217 (27.04.2014)
способ получения биоминеральных удобрений и мелиорантов (варианты) -  патент 2512277 (10.04.2014)
способ повышения симбиотической активности бобовых трав -  патент 2511299 (10.04.2014)
способ получения гумифицированной почвы -  патент 2508281 (27.02.2014)
способ содержания почвы виноградников -  патент 2506733 (20.02.2014)


Наверх