штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
C12N9/14 гидролазы (3)
C12N9/22 рибонуклеазы
A61P31/16 против гриппа или риновирусов
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-08-02
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Serratia species является продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью в отношении вирусов птичьего гриппа A/chickenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2). Предложенный штамм депонирован в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером В-1287. При использовании культуральной жидкости или экстракта клеток штамма для производства противовирусных препаратов нейтрализация вирусов гриппа A/chickenKurgan/05/2005 и A/Aichi/2/68 составляет 100%. 1 ил., 2 табл., 6 пр. штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064

Рисунки к патенту РФ 2528064

штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064

Изобретение относится к штамму бактерий Serratia species Bp-471, являющемуся продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью, и может быть использовано в микробиологии и биотехнологии доя производства противовирусных препаратов.

В настоящее время при разработке средств профилактики и терапии вирусных инфекций все большее внимание уделяется изучению нуклеаз - ферментов, деполимеризующих нуклеиновые кислоты.

К списку нуклеаз, проявляющих противовирусные свойства на моделях in vitro, относят панкреатические РНКазы, ДНКазы. Установлено, что рибонуклеазы обладают выраженной противовирусной активностью в отношении таких РНК-содержащих вирусов, как вирусы гриппа, полиомиелита, клещевого энцефалита. Дезоксирибонуклеазы тормозят синтез и размножение ДНК-содержащих вирусов, осповакцины, аденовируса, герпеса [1].

Известно, что наиболее активными в отношении синтеза внеклеточной щелочной рибонуклеазы являются разные штаммы рода Bacillus [2, 3].

Одним из наиболее изученных энзимов этого класса является секретируемая эндонуклеаза из штамма Serratia marcescens (Sma nuc). Штаммы рода Serratia широко известны как продуценты различного рода препаратов. В качестве продуцента нуклеазы, обладающей РНКазной и ДНКазной активностями, наиболее изучен штамм Serratia marcescens В-10 M-1 [4-6].

Наиболее близким аналогом (прототипом) является штамм BACTERIUM PRODIGIOSUM (SERRATIA MARCESCENS) В-10, М-2 - продуцент неспецифической эндонуклеазы - препарат для борьбы с вирусными инфекциями животных и насекомых (авторское свидетельство СССР № 928794, МПК C12N 1/20, опубл. 15.11.1993) [9].

Однако в описании к авторскому свидетельству не приведены данные о противовирусной активности продуцируемой штаммом SERRATIA MARCESCENS неспецифической эндонуклеазы.

Техническим результатом заявляемого изобретения является получение нового штамма бактерий - продуцента внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью, в частности, в отношении вирусов птичьего гриппа A/chikenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2).

Указанный технический результат достигается получением штамма бактерий Serratia species Bp-471, являющегося продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью в отношении вирусов птичьего гриппа A/chikenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2), и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером В-1287.

Штамм выделен из образца воды озера Байкал с последующим клонированием.

Для выделения бактерий-продуцентов нуклеолитических ферментов была применена методика отбора колоний на селективных средах. Использовали среду, содержащую ДНК [7]. Из большого разнообразия штаммов было выделено несколько штаммов для последующего анализа на содержание ферментов нуклеолитического типа.

При лабораторной проверке активности выделенных штаммов оказалось, что штамм Serratia sp. Bp-471 обладает РНКазной и ДНКазной активностями.

Определение таксономической принадлежности

Для определения таксономической принадлежности бактерий Serratia sp. Bp-471 стандартными методами исследовали фенотипические признаки и определяли нуклеотидные последовательности продуктов ПЦР, соответствующие гену 16S рРНК. Определение до вида проводили по определителю Бердже [8].

Для получения геномных характеристик выделяли суммарные ДНК из чистых культур и проводили ПЦР с универсальными праймерами, соответствующими гену 16S рРНК эубактерий: 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' и 5'-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3'. Нуклеотидные последовательности продуктов ПЦР определяли с использованием BigDye 3,1 Terminator Cycle Sequencing Kit и автоматического анализатора ДНК модели ABI 3130х1 (Applied Biosystems, США), в Межинститутском Центре секвенирования ДНК СО РАН (г. Новосибирск). Филогенетический анализ выполняли с использованием программы MEGA версии 4 для нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК, определенных в данной работе, и близкородственных видов из базы данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov).

Штамм бактерий Serratia species Bp-471 имеет следующие морфологические и физиологические признаки.

Морфологические признаки. Величина клеток односуточной культуры на мясопептонном агаре 0,6-0,8×1,0-2,0 мкм. Клетки палочковидные, в основном одиночные, реже соединяются в короткие цепочки, подвижные, перитрихи, грамотрицательные. На мясопептонном агаре штамм образует гладкие, округлые, блестящие, белесые, влажные, непрозрачные колонии с ровным краем, пигмент отсутствует. Старые культуры формируют матовые, слегка шероховатые, плоские колонии, легко снимающиеся с агара петлей.

Физиологические признаки. Аэроб, максимум роста при 30-37°C, штамм отрицателен по уреазе, коагулазе, в тестах на индол, сероводород, амилазу; образует РНКазу и ДНКазу, гидролизует желатин, утилизирует цитрат, с образованием кислоты гидролизует сахарозу, манит, мальтозу, глюкозу, но не лактозу; восстанавливает нитраты, отрицателен в реакции MR и в реакции FP.

Штамм содержит плазмидную ДНК, устойчив к ампициллину, клиндамицину, рифампицину, эритромицину, оксациллину.

При культивировании применяли питательную среду "S" (Пептон, NaCl, MgCl2×6 H 2O, Трис-гидроксиметиламинометан, pH 8.0) или "LB" (дрожжевой экстракт, пептон, NaCl, pH 7,2) "Difco".

Хранение штамма: Субкультуры штамма хранят периодическими пересевами на агаризованную среду РПА или LA, в 15%-ном растворе глицерина при низкотемпературном замораживании (минус 65°C) и в лиофильно-высушенном состоянии.

Штамм Serratia species Bp-471 депонирован в «Коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального Бюджетного Учреждения Науки Государственный Научный Центр Биотехнологии и Вирусологии «Вектор» (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор») под коллекционным номером В-1287 (Справка о депонировании штамма прилагается).

Посевной материал получали при выращивании штаммов на жидких или агаризованных средах: LB (0,25% LB "Difco", 1,7% агара) и среде А (0,7% пептона "Difco", 0,4% рыбного гидролизата, 0,5% NaCl, 1,7% агара). Значение pH 7,0-7,2.

Для получения образцов культуральной жидкости (КЖ) штаммы культивировали в среде «S» или Lb в течение 18 час при 37°C с последующим центрифугированием 20 мин при 8000 об/мин. Полученные образцы КЖ и биомассы хранили в замороженном состоянии при - 20°C.

Для получения клеточных экстрактов бактериальные клетки лизировали лизоцимом (05,мг/мл) с добавлением тритона Х-100 (0,1%) в TN-буфере (0,01М Трис pH 7,5; 0,5М NaCl, H2O деионизованная) или разрушали ультразвуком в 4-х мл H2O на дезинтеграторе "MSE" (Великобритания).

Количественное определение РНКазной и ДНКазной активности проводили по превращению субстратных нуклеиновых кислот: суммарной дрожжевой РНК (НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ «Вектор») и ДНК из молок лосося (Медиген, Новосибирск) во фрагменты, которые растворимы в 4%-ной HClO4, с появлением кислоторастворимого материала с адсорбцией при 260 нм.

Средняя рибонуклеазная активность штамма составила 252,5 ед.акт/мл КЖ, а активность клеточного экстракта 261,8 ед.акт/мл или 2094,4 ед.акт/г влажной биомассы. Максимальная активность КЭ была получена на среде "S" и составила 6692,4 ед.акт/г биомассы.

Ниже приведены данные по исследованию КЖ штамма Serratia sp. Вр-471 на ДНКазную активность

На фиг.1 представлена электрофореграмма анализа КЖ бактериальных штаммов на содержание внеклеточных ферментов.

Время инкубации с ДНК фага штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064 :

(1,4,7) - 5 мин, (2,5,8) - 10 мин,

(3,6,9) - 30 мин.

Из электрофореграммы на фиг.1 видно, что ферменты КЖ штамма Serratia sp. Bp-471(Bp-471) полностью гидролизуют ДНК фага штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064 уже за 5 мин инкубации (дорожки 1-3). В то время как КЖ двух других штаммов не гидролизуют штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064 ДНК в этих же условиях даже за 30 мин, и ДНК хорошо видно на гелевой пластине.

Штамм бактерий Serratia sp. Bp-471 обладает ДНКазной активностью и гидролизует не только ДНК фага штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной   рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной   активностью, патент № 2528064 (фиг.1), но и ДНК фага Т7 и ДНК из молок лосося (табл.1).

Таблица 1
Гидролиз ДНК из молок лосося и дрожжевой РНК КЖ и КЭ штамма Serratia sp. Bp-471.
№ образцаВид образца Белок, мг/млДНКазная активность (ед./мл) РНКазная активность (ед./мл)
11-19КЖ4,7 83,6238,7
11-11КЭ3,8 92,4261,8
11-29КЖ9,2 86,9266,2
12-57КЭ12,9 258,4836,5

Подготовка к тестированию штаммов вируса гриппа и культуры клеток.

Для оценки противовирусной эффективности полученных препаратов использовали высокопатогенный вирус гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (A/H5N1) из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор, наработанный на 10-суточных развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ). Концентрация вируса составила: 103,5-6,5 lg ТЦД50/мл. Вирус гриппа человека A/Aichi/2/68, титр 102,5-3,5 lg ТЦД50/мл вирусаллантоисной жидкости (ВАЖ)). Для тестирования токсичности и противовирусной активности препаратов использовали перевиваемую культуру клеток MDCK.

Определение токсичности препарата. Для определения токсических доз препараты разводили в 2, 5, 10 раз средой Axcevir-MDCK, вносили по 150 мкл в соответствующие лунки планшета с клетками MDCK и ставили в термостат при температуре 37°C, 5% CO2 и 100% влажности на 2 суток. Через 2 суток с помощью инвертированного микроскопа оценивали наличие токсического действия в монослоях клеток MDCK, инкубированных с разными концентрациями препаратов.

Для определения противовирусной активности препаратов использовали максимально переносимые концентрации (МПК).

Определение противовирусной активности препаратов. Для определения противовирусной активности препаратов готовили десятикратные разведения ВАЖ от 1 до 8 с использованием среды Axcevir-MDCK, содержащей 2 мкг/мл трипсина. В монослой культуры клеток MDCK вносили по 50 мкл выбранного разведения препарата и 100 мкл от 1 до 8 разведения ВАЖ. Клетки инкубировали 2 суток при температуре 37°C в атмосфере 5% CO2 в термостате ТС-1/80 СПУ (Россия). Через 2 суток в каждой лунке с помощью инвертированного микроскопа регистрировали ЦПД в монослое клеток и определяли наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглютинации (РГА) с 1% эритроцитами петуха. Ниже приведены примеры конкретного применения заявляемого штамма.

Определение наличия нуклеолитической и противовирусной активности штамма Serratia species Bp-471 относительно вирусов птичьего гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (А/H5N1) и гриппа человека A/Aichi/2/68 проводится впервые, в связи с чем можно сделать вывод о соответствии предлагаемого штамма критериям изобретения «Новизна» и «Изобретательский уровень».

Изобретение подтверждено следующими примерами практического применения.

Получение образцов (препаратов).

Пример 1. Получение препарата (образца) 11-19 на основе культуральной жидкости (КЖ) штамма Serratia sp. Bp-471.

Суспензию клеток готовили с использованием культуры штамма Serratia sp. Вр-471, наработанного на агаризованной среде в течение 18 часов при температуре 28-30°C. Суспензию вносили в количестве 1% в колбы с 50 мл среды LB и культивировали в течение 24 часов на термостатированной качалке (КТ 104, Россия). Для приготовления препарата на основе культуральной жидкости полученную КЖ штамма центрифугировали при 10000 об/мин в течение 30 мин на центрифуге JA-21. Надосадочную жидкость стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм и использовали для испытания в качестве противовирусного препарата. Хранили препарат до использования при температуре минус 20°C.

Пример 2. Получение препарата (образца) 11-11, на основе экстракта клеток (КЭ) штамма Serratia sp. Bp-471.

Осадок клеток штамма, полученный после центрифугирования и освобождения от надосадочной жидкости в примере 1, ресуспендировали в 4 мл дистиллированной H2O и обрабатывали 4 раза по 30" с интервалом 30", на ультразвуковом(УЗ)-дезинтеграторе. После УЗ-обработки разрушенные клетки осаждали центрифугированием при 10000 об/мин на микроцентрифуге "Eppendorf", КЭ отбирали и стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм. Полученный препарат хранили до использования при температуре минус 20°C.

Пример 3. Испытание противовирусного действия препарата № 11-19, приготовленного на основе КЖ штамма Serratia species Bp-471 (в профилактической схеме). Для испытания препарат № 11-19 развели в 5 раз и внесли на клетки MDCK в объеме 50 мкл на лунку 96-луночного планшета. Инкубация 2 часа. Удалили препарат, затем в лунки внесли среду RPMI-1640 без сыворотки и без трипсина. Добавили вирус A/chikenKurgan/05/2005 (H5N1) с -1 по -7 по 50 мкл на лунку. Инкубация 2 сут. Учет с 1% эритроцитами петуха.

Планшеты с обработанными клетками и вирусом помещали в термостат при температуре 37°C, 5% CO2 и 100% влажности на 2-3 суток до образования монослоя. Препарат нейтрализовал 3,5 lg вируса гриппа птиц, т.е. индекс нейтрализации составил 3,5 lg (табл.2).

Пример 4. Испытание противовирусного действия препарата 11-11 на вирусе гриппа человека (профилактическая схема).

Клеточный экстракт(КЭ) штамма Serratia sp. Bp-471 (препарат № 11-11) проверили в профилактической схеме на противовирусную активность. Концентрация вируса составила 102,5 lg ТЦД50/мл. Препарат нейтрализовал вирус гриппа A/Aichi/2/68 на 100%. KB - контроль вируса, титр 102,5 lg ТЦД 50/мл (табл.2).

Пример 5. Испытание противовирусного действия препарата 11-19 на вирусе гриппа человека (профилактическая схема). Концентрация вируса составила 103,5 lg ТЦД 50/мл. Препарат нейтрализовал вирус гриппа A/Aichi/2/68 на 100%. KB - контроль вируса, титр 103,5 lg ТЦД 50/мл (табл.2).

Пример 6. Получение препарата 12-57 и испытание его противовирусного действия.

Клетки штамма Serratia sp. Bp-471 выращивали, как описано в примере 1. За исключением того, что использовали среду "S". Осадок клеток штамма, полученный после центрифугирования и освобождения от надосадочной жидкости, как в примере 1, ресуспендировали в 4 мл дистиллированной Н2О и обрабатывали 4 раза по 30" с интервалом 30", на ультразвуковом(УЗ)-дезинтеграторе. Процент разрушения 75%. После УЗ-обработки разрушенные клетки осаждали центрифугированием при 10000 об/мин на микроцентрифуге "Eppendorf", КЭ отбирали и стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм. Полученный препарат хранили до использования при температуре минус 20°C.

Полученный КЭ разводили в 2 раза и использовали для испытания на противовирусное действие на вирусе гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1). Препарат нейтрализовал вирус гриппа птиц на 100%. KB - контроль вируса, титр 106,5 ТЦД50/мл (табл.2).

Таблица 2
Противовирусное действие КЭ и КЖ штамма Serratia species Bp-471
№ ОбразцаШтамм РНКазная активность, Е/мг белкаИндекс нейтрализации вирусаНейтрализация вируса, %
A/Aichi/2/68 (H3N2)
11-11КЭ 68,92,5 lg100,0
11-19КЖ 50,83,5 lg100,0
A/chikenKurgan/05/2005 (H5N1)
11-19 КЖ50,83,5 lg 100,0
12-57 КЭ64,8 6,5 lg100,0

Таким образом, примеры 1-6 подтверждают достижение заявляемого технического результата.

Источники информации

1. Чижов Н.П. Противовирусное действие нуклеаз и гистонов. // Вопросы вирусологии. - 1974. - № 6. - С.647-652.

2. Юсупова О.И. //Ферменты микроорганизмов. М.: Наука. - 1973. - 163 с.

3. Ильинская О.Н., Балабан Н.П., Вершинина В.И. и др. Стрептомицинустойчивый штамм Bacillus sp. ВКПМ В-9862 - продуцент внеклеточной щелочной рибонуклеазы. Патент 2384619.

4. Нуклеазы микроорганизмов и их практическое использование. Рига, 1989, с.3.

5. Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз. М.: Наука, 1979, с.7.

6. Детиненко Л.Д., Клименко В.П., Подгорный В.Ф., Аликин Ю.С. Средство "Эндоглюкин" для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей. Патент 2038776, 1995 г.

7. Методы общей бактериологии / под ред. Ф. Герхарда и др. - М.: Мир, 1983. - Т.1. - 536 с.; 1984. Т.3. 264 с.

8. "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology". 8th ed. / Ed. John G. Holt. - Baltimore-London, Williams and Wilkins, 1986. - V.1-2. - 1105 p.

9. Авторское свидетельство СССР № 928794, МПК C12N 1/20, C12N 9/16, опубл. 15.11.1993 (прототип).

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Штамм бактерий Serratia species, являющийся продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью в отношении вирусов птичьего гриппа A/chickenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2), и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером В-1287.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2528064

patent-2528064.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс C12N9/14 гидролазы (3)

Патенты РФ в классе C12N9/14:
способ восстановления чувствительного слоя биосенсора -  патент 2524438 (27.07.2014)
разжиженная биомасса, способ ее получения, ее применение и способ ее сбраживания -  патент 2521514 (27.06.2014)
способ идентификации улучшенных вариантов белка -  патент 2520808 (27.06.2014)
способ обработки лигноцеллюлозного материала -  патент 2518305 (10.06.2014)
способ выделения эндонуклеазы из яда кобры -  патент 2515924 (20.05.2014)
способ получения глоботриозы -  патент 2514661 (27.04.2014)
способ использования рибонуклеазы bacillus intermedius -  патент 2509801 (20.03.2014)
рекомбинантный штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент фитазы -  патент 2504579 (20.01.2014)
штамм escherichia coli - продуцент гидролазы эфиров альфа-аминокислот из xanthomonas rubrilineans и способ микробиологического синтеза гидролазы эфиров альфа-аминокислот на основе этого штамма -  патент 2502797 (27.12.2013)
способ комплексной переработки рыбного сырья для получения гиалуроновой кислоты и коллагена -  патент 2501812 (20.12.2013)

Класс C12N9/22 рибонуклеазы

Патенты РФ в классе C12N9/22:
штамм бактерий aeromonas bestiarum - продуцент щелочной рибонуклеазы, обладающий противовирусной активностью -  патент 2520086 (20.06.2014)
конструкция на основе белковой пары барназа-барстар и способ ее получения -  патент 2480524 (27.04.2013)
контролируемая деградация структурированных полирибонуклеотидов -  патент 2458986 (20.08.2012)
способ получения панкреатической рибонуклеазы -  патент 2388821 (10.05.2010)
стрептомицинустойчивый штамм bacillus sp. вкпм в-9862 - продуцент внеклеточной щелочной рибонуклеазы -  патент 2384619 (20.03.2010)
способ получения холестеролэстеразы, трипсина, дезоксирибонуклеазы и рибонуклеазы из поджелудочной железы крупного рогатого скота -  патент 2311455 (27.11.2007)
олигонуклеотидпептидный конъюгат, обладающий способностью расщеплять фосфодиэфирные связи рнк в последовательностях 5'gpn3' -  патент 2305108 (27.08.2007)
способ разделения смеси человеческой днказы (варианты), очищенная дезамидированная человеческая днказа, очищенная недезамидированная человеческая днказа, фармацевтическая композиция для снижения вязкоупругости гноя (варианты), способ лечения пациента, страдающего скоплением гноя (варианты), способ лечения пациента, страдающего муковисцидозом, бронхитом, пневмонией -  патент 2238320 (20.10.2004)
способ получения инсерционных мутаций -  патент 2237715 (10.10.2004)
молекула каталитической днк, обладающая сайтспецифической эндонуклеазной активностью (варианты), композиция, расщепляющая нуклеиновую кислоту, способ расщепления фосфоэфирной связи в субстрате, способ селекции каталитической днк (варианты), молекула энзиматической днк (варианты) -  патент 2220204 (27.12.2003)

Класс A61P31/16 против гриппа или риновирусов

Патенты РФ в классе A61P31/16:
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
способ лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностого антигена н1n1 и лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена н1n1 -  патент 2527688 (10.09.2014)
варианты гемагглютинина и нейрамидазы вируса гриппа -  патент 2523587 (20.07.2014)
способ защиты организма от инфекции, вызванной штаммами субтипа h1n1 вируса гриппа а препаратом на основе альфа-2 интерферона человека -  патент 2523554 (20.07.2014)
моно и дифторзамещенные этил (3r,4r,5s)-5-азидо-4-ацетиламино-3-(1-этилпропокси)-циклогексен-1-карбоксилаты, способ получения и применения -  патент 2521593 (27.06.2014)
симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09) -  патент 2520967 (27.06.2014)
(3r,4r,5s)-4-амино-5-(2,2-дифторацетиламино)-3-(1-этилпропокси)-циклогекс-1-енкарбоновая кислота и ее эфиры, способ их получения и применения -  патент 2520836 (27.06.2014)
применение изоосмотических ионных растворов на основе морской воды для изготовления медицинских устройств, применяемых для предупреждения возникновения осложнений от насморка или гриппоподобного синдрома -  патент 2519671 (20.06.2014)
композиции для лечения заболеваний верхних дыхательных путей и симптомокомплекса гриппа -  патент 2518738 (10.06.2014)
способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами -  патент 2518314 (10.06.2014)


Наверх