ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ выявления свиней, инфицированных возбудителем actinobacillus pleuropneumoniae

Классы МПК:G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры)
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Саратовский НИВИ Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-10-03
публикация патента:

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea. Способ включает проведение серологических исследований и определение положительно реагирующих животных. Дополнительно после проведения серологических исследований свиньям всех возрастных групп вводят препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия при соотношении их весовых частей 2-6:994-998. Препарат вводят двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней. Спустя 10-12 дней после введения препарата проводят дополнительные серологические исследования и выявляют инфицированных животных. Способ позволяет повысить процент выявляемости животных в отношении актинобациллезной плевромневмонии. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea.

Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония - высококонтагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, а при подостром и хроническом - развитием очаговой гнойной некротизирующей плевропневмонии и серозно-фибринозным плевритом. Болезнь наносит существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам за счет большого падежа свиней, затрат на лечение больных и проведения ветеринарно-санитарных мероприятий.

Диагностика данного заболевания трудно дифференцируема, поскольку клинические признаки сравнимы с другими легочными заболеваниями, с такими как микоплазмоз, пневмония, репродуктивно-респираторный синдром.

Известен способ диагностики гемофилезной плевропневмонии свиней (см. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Лаврентьев Н.И., Мицаев Ш.Ш., Романова Л.Я., Юдин А.И. Диагностика гемофилезной плевропневмонии свиней / Ж. Ветеринария, - 1981. - 12. - С.66-68), заключающийся в проведении клинических, патологоанатомических и бактериологических исследований.

Однако данная диагностика является длительной и трудоемкой, поскольку требуют посева на специальные питательные среды, проведения микроскопических исследований. Кроме этого, для определения патогенных свойств культуры необходима постановка биопробы.

Известен также способ диагностики актинобациллезной плевропневмонии свиней с использованием серологических исследований, в частности путем постановки реакции агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации, реакции коагглютинации (см. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Скородумова Д.И. «Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней (этиология, лабораторная диагностика, основы специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии»/ http://uchit.net: или http://www.refstar.ru).

Однако точность идентификации возбудителя с помощью реакций агглютинации, непрямой агглютинации невелика, поскольку не все группы штаммов культуры Actinobacillus pleuropneumoniae удается идентифицировать с помощью этих реакций, что приводит к неправильной или неточной постановке диагноза. В частности, актинобациллезную плевропневмонию необходимо точно отдифференцировать от пастереллеза,пневмоний, вызванных микоплазмами, хламидиями, стрептококками (диплококковая пневмония).

Наиболее близким к заявляемому является способ выявления инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae свиней (см. http://www.alekris.ru или http://www.dpri.ru/index), заключающийся в серологических исследованиях животных методом иммуноферментного анализа. Способ позволяет производить дифференциацию между инфицированными и вакцинированными животными и дает возможность выявлять инфицированных особей в популяциях вакцинированных и невакцинированных животных.

Однако процент выявляемости больных животных невысок.

Изобретение направлено на решение задачи создания эффективного способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, за счет усиления специфических и неспецифических иммунных реакций на возбудитель в организме животного, а также за счет изменений некоторых биохимических показателей крови, позволяющих повысить процент выявляемости животных в отношении актинобациллезной плевромневмонии.

Для решения поставленной задачи в способе выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, заключающемся в проведении серологических исследований и определении положительно реагирующих животных, согласно изобретению дополнительно после проведения серологических исследований свиньям всех возрастных групп вводят препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней, после чего спустя 10-12 дней после введения препарата проводят дополнительные серологические исследования и выявляют инфицированных животных.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, путем введения препарата в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия, которое приводит одновременно к усилению специфических и неспецифических факторов иммунитета. При этом усиление специфических факторов происходит за счет увеличения уровня антител к возбудителю актинобациллезной плевропневмонии, а неспецифических - за счет повышения уровня интерлейкинов.

Кроме этого, обработка животных этим препаратом приводит к достоверному изменению биохимических показателей, в частности - повышению концентрации неорганического фосфора, глюкозы, каротина.

Таком образом, эффект выявляемости животных основан одновременно на изменении специфических, неспецифических факторов иммунитета и изменении биохимических показателей, что в комплексе позволяет эффективнее дифференцировать инфицированных животных от здоровых среди невакцинированного поголовья.

Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом решении «изобретательского уровня».

Способ осуществляется следующим образом.

Выявляют инфицированных животных, например, с помощью реакции иммуноферментного анализа и определяют положительно реагирующих животных.

Осуществляют обработку этих животных препаратом в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998. При этом препарат вводят внутримышечно однократно в дозе 4-6 мл на голову.

Через 7-10 дней после обработки препаратом проводят повторный иммуноферментный анализ, по результатам которого повторно выявляют инфицированных животных.

Пример 1

Доказательство повышения неспецифических факторов иммунитета за счет введения препарата

Эксперимент проводился на лабораторных животных: на 7 морских свинках и 10 белых крысах. Животных каждого вида делили на 2 группы: контрольную (которым препарат не вводили) и опытную (которых обрабатывали препаратом).

Животным опытных групп препарат вводили в количестве 0,5 мл на голову и через 7-10 дней после инъекции определяли содержание интерлейкинов (ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8), а животным контрольных групп инъецировали в той же дозе физиологический раствор.

Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1
Результаты исследования интерлейкинов на лабораторных животных
№ животного п/пСодержание интерлейкинов в пг/мл (абс. значение)
ИЛ-6ИЛ-4ИЛ-8
БЕЛЫЕ КРЫСЫ (контроль)
117,5 31,60
239,9 33,710,1
347,911,9 56,4
4 32,210,7 62,6
5 15,631,618,3
Среднее30,62±6,26 23,9±5,1629,48±12,63
БЕЛЫЕ КРЫСЫ (опыт)
612,5 31,318,5
7166,1 31,743,8
8123,821,6 44,3
9 137,929,9 57,8
10 10,731,515,3
Среднее90,2±32,8 29,2±1,9235,94±8,18
МОРСКИЕ СВИНКИ (контроль)
110,7 31,215,5
241,5 46,111,8
311,712,4 16,3
4 16,538,5 96,2
Среднее 20,1±7,2432,05±7,22 34,95±20,44
МОРСКИЕ СВИНКИ (опыт)
5 46,13015,1
629,9 32,859,1
738,5 3161,7
Среднее38,17±4,67 31,27±0,8145,3±15,11

Результаты исследований показали наличие тенденции к повышению содержания интерлейкинов ИЛ-4, ИЛ-6 и ИЛ-8 в крови лабораторных животных после введения препарата, обеспечивающего активизацию неспецифических факторов иммунитета и, как следствие, повышение сопротивляемости организма к возбудителю.

Пример 2

Доказательство повышения процента выявляемости инфицированных животных и, как следствие, эффективности заявляемого способа

Эксперимент проводился на базе хозяйства, неблагополучного по актинобациллезной плевропневмонии.

С помощью иммуноферментного анализа была исследована сыворотка крови 22 поросят 6-месячного возраста на наличие возбудителя Actinobacillus pleuropneumoniae. Полученные результаты показали, что из 22 сывороток наличие специфических антител к возбудителю, свидетельствующих об инфицированности животных, было обнаружено только у 1 (4,5%) поросенка.

Всем поросятам был введен препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней.

Спустя 10 дней после обработки препаратом был снова проведен иммуноферментный анализ на наличие антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae. Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Таблица 2
Результаты иммуноферментного анализа сывороток крови свиней
№ п/пНаличие антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae
До обработки препаратомПосле обработки препаратом
1 --
2 --
3--
4- -
5- +
6 --
7 --
8--
9+ +
10- -
11 -+
12 -+
13--
14- +
15- +
16 -+
17 -+
18--
19- -
20- +
21 --
22 -+

Из таблицы 2 следует, что после обработки препаратом было выявлено дополнительно 9 (42,8%) инфицированных животных из 21 головы, ранее считавшихся неинфицированными.

Эффективность выявляемоеспособ выявления свиней, инфицированных возбудителем actinobacillus   pleuropneumoniae, патент № 2526829 инфицированных животных увеличилась в 9,5 раз.

Пример 3

Спустя 6 месяцев после обработки животных препаратом, как описано в примере 2, были проведены исследования по определению биохимических показателей крови у свиней, подвергавшихся и не подвергавшихся обработке препаратом.

Определяли такие показатели, как концентрация общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, каротина по общепринятым методикам. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3
Биохимические показатели крови опытных и контрольных животных спустя 6 месяцев после обработки
способ выявления свиней, инфицированных возбудителем actinobacillus   pleuropneumoniae, патент № 2526829 № ппНомер животного Общий белок, мг %Общий кальций,

мг %
Фосфор неорганический, мг % Глюкоза, ммольлКаротин,

мг %
Контроль 17250 6,9411,755,00 1,150,47
26640 7,0011,255,29 3,070,56
36569 6,7013,503,82 1,28способ выявления свиней, инфицированных возбудителем actinobacillus   pleuropneumoniae, патент № 2526829
4 72936,5312,25 3,521,28 0,69
5 73157,2912,75 3,231,28 0,59
6 67726,7612,00 4,411,41 0,62
7 71487,2310,00 4,701,53 0,69
8 74046,1213,75 4,111,28 0,66
9 72137,0011,00 3,521,28 0,56
10 76945,8912,50 3,821,53 0,47
Средн. 6,7512,084,14 1,510,59
Откл. 0,140,360,22 0,180,02
Опыт 1171147,58 10,505,00 2,430,62
1278257,05 11,504,70 1,020,75
1318946,41 10,754,41 2,820,66
1481097,00 11,253,82 1,660,53
1581165,83 12,504,11 1,79способ выявления свиней, инфицированных возбудителем actinobacillus   pleuropneumoniae, патент № 2526829
16 А 30277,2911,75 5,292,56 0,59
17 30987,1112,25 6,473,33 0,66
18 16826,4712,75 5,882,30 0,84
19 65835,8912,00 6,172,17 0,90
20 70617,0510,75 5,581,92 0,97
Средн. 6,7711,605,14 2,200,72
Откл. 0,190,250,28 0,210,04
Достоверность -0,091,08-2,81 -2,55-2,64

Установлено, что у обработанных животных достоверно повышалась концентрация неорганического фосфора (на 24,2%), глюкозы (на 45,7%) и каротина (на 22,0%). Причем концентрация всех этих параметров у обработанных животных находилась в пределах физиологической нормы, а у необработанных - концентрация глюкозы и каротина была ниже нормы.

Биологическое значение каротина для сельскохозяйственных животных определяется, во-первых, тем, что он служит предшественником витамина А. Кроме того, каротин защищает гемоглобин от разрушительного действия нитратов, стимулирует неспецифические факторы иммунитета, защищает организм от канцерогенного воздействия агрессивных прооксидантов - активных форм кислорода и свободных радикалов, образующихся в клетках в процессе клеточного дыхания.

Каротин также повышает стрессоустойчивость, клеточный иммунитет и оказывает большое влияние на репродуктивную функцию, увеличивает скорость гликолиза в мышцах, обеспечивая митохондрии субстратами.

Повышение концентрации неорганического фосфора указывает на увеличенную активность щелочной фосфатазы, что подтверждается тенденцией к снижению концентрации кальция, который направляется на формирование костной ткани.

В то же время витамин А, синтезирующийся из каротина, необходим для нормального формирования костной ткани. Данные по фосфору и кальцию позволяют говорить об усилении анаболических обменных процессов в костной ткани. Увеличение массы костной ткани сопровождается возрастанием массы костного мозга и, как следствие, повышением иммунного статуса и оксигенации организма.

В совокупности с повышением концентрации каротина создаются условия для увеличения роли аэробного энергетического обмена, реализация которого подтверждается достоверно более высокой, чем в контроле, концентрацией глюкозы.

Все вышесказанное (одновременное увеличение неспецифических факторов иммунитета - интерлейкинов, специфических - титров антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae, а также изменения биохимических параметров крови свиней - повышение количества неорганического фосфора, глюкозы и каротина) позволяет сделать вывод об увеличении выявляемости свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, и повышении способа выявления инфицированных животных более чем в 9 раз.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, заключающийся в проведении серологических исследований и определении положительно реагирующих животных, отличающийся тем, что дополнительно после проведения серологических исследований свиньям всех возрастных групп вводят препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней, после чего спустя 10-12 дней после введения препарата проводят дополнительные серологические исследования и выявляют инфицированных животных.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2526829

patent-2526829.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры)

Патенты РФ в классе G01N33/48:
технология определения анеуплоидии методом секвенирования -  патент 2529784 (27.09.2014)
способ оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (квч) в эксперименте -  патент 2529694 (27.09.2014)
способ прогнозирования ухудшения клинического течения идиопатической саркомы капоши, перехода хронической формы в подострую, затем в острую форму заболевания -  патент 2529628 (27.09.2014)
способ идентификации нанодисперсных частиц диоксида кремния в цельной крови -  патент 2528902 (20.09.2014)
способ диагностики метаболического синдрома у детей -  патент 2527847 (10.09.2014)
способ диагностики мембранотоксичности -  патент 2527698 (10.09.2014)
cпособ индуцированных повреждений днк в индивидуальных неделимых ядросодержащих клетках -  патент 2527345 (27.08.2014)
способ прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения -  патент 2527338 (27.08.2014)
способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмологических признаков заболевания -  патент 2526827 (27.08.2014)
способ диагностики наружного генитального эндометриоза -  патент 2526823 (27.08.2014)


Наверх