ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с)

Классы МПК:A61K35/16 плазма; сыворотка
A61K38/00 Лекарственные препараты, содержащие пептиды
A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):,
Патентообладатель(и):Шестаков Виталий Александрович (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-09-06
публикация патента:

(57) Группа изобретений относится к области медицины и предназначено для защиты клеток от цитопатогенного действия вируса гепатита С. Заявлена фармацевтическая композиция, обладающая противовирусным действием в отношении вируса гепатита C и способ ее получения. Проводят электростимуляцию головы бройлерных кур в режиме 100-120 B 3-4 A в течение 3-4 с. Забирают кровь и инкубируют её при 4-8°C в течение 18-24 часов. Осуществляют отбор сыворотки. Отобранную сыворотку фильтруют через фильтр с диаметром пор 10 нм, лиофилизируют и облучают в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ) в режиме 10-40 кГр. Использование заявленной группы изобретений ээфективно для защиты клеток СПЭВ от цитопатогенного действия вируса гепатита С. 2 н. п. ф-лы, 2 табл., 1пр.

Область техники, к которой относится изобретение.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, может быть использовано для получения биологически активных фракций из сыворотки крови кур, полезной при вирусных заболеваниях и расстройствах в организме человека и животных.

Уровень техники.

Широко известны способы получения биологически активной сыворотки крови, основанные на взятии крови у доноров и животных, инкубации, отделении с последующим консервированием. Способы предполагают получение сыворотки крови, повышающей устойчивость организма к таким экзогенным и эндогенным факторам, как атмосферное давление, температура, сила тяжести, свет и т.п., а также голод, жажда, сонная и половая потребности и т.п. (Патент Японии № 2123287, EP 0542303 A2, Патенты России № 2096041, 2120301, 2236238, 2302237).

Биологически активные фракции получают из сыворотки крови птиц, предварительно введенных в электрошок II-III степени, и подвергают гамма-обработке с использованием Co60 (Патент 2236238, 2302238 РФ) и ЛУЭ (Патент № 2426548 РФ).

Задачей данного изобретения было получение антивирусных фракций по отношению к вирусу гепатита C (ВГС) из электрошоковой сыворотки крови кур и облученных в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ).

Краткое изложение сущности изобретения.

Оказалось, что, если электрошоковую сыворотку крови птиц облучить в ЛУЭ в интервале 10-40 кГр, то можно получать биологически активные пептидные фракции, обладающие антивирусной активностью (будут раскрыты далее), которые полезны при вирусе гепатита C пациента (будут раскрыты далее).

Таким образом, целью настоящего изобретения является разработка нового способа получения антивирусных пептидных фракций.

Еще одной целью настоящего изобретения является разработка лекарственной формы новых биологически активных фракций. Изобретение предполагает разные лекарственные формы: в том числе для перорального, парентерального, назального, буккального, в виде суппозиториев и т.п. введения.

В изобретении предусматривается использование подходящих физиологически приемлемых носителей (таких как дистиллированная вода, физиологический раствор), наполнителей (например, масло какао, витепсол) биологически активных фракций. Биологически активные пептидные фракции могут применяться как самостоятельно, так и в сочетании с другими лечебными средствами.

Дополнительной целью изобретения является фармацевтическая композиция, в которой активным началом являются фракции согласно настоящему изобретению. При этом фармацевтическая композиция должна содержать активный ингредиент в количестве, достаточном для оказания благоприятного воздействия на организм пациента, т.е содержать его в эффективном количестве.

Еще одной целью изобретения является определение эффективной дозы пептидных фракций согласно данному изобретению. Полагается, что доза находится в интервале от 0,67 мг/мл до 5,0 мг/мл клеток пациента. Очевидно, что конкретная доза будет определяться лечащим врачом в зависимости от состояния пациента, его возраста, веса и курса лечения.

Подробное раскрытие изобретения.

Далее изобретение подробно раскрывается в предпочтительных вариантах конкретного выполнения, при этом приводимые примеры активных пептидных фракций, фармацевтических композиций, лекарственных форм не должны стать основанием для ограничения притязаний, а предназначены исключительно лишь для демонстрации осуществимости изобретения и реализации указанного (ных) назначения (ий). Каждый специалист в данной области, безусловно, убедится, что могут быть предложены многочисленные модификации приводимых вариантов выполнения изобретения, которые попадают под притязания, отраженные далее в формуле изобретения.

Получение фармацевтической композиции.

Для получения фармацевтической композиции использовали кровь птиц (кур), взятую через 3-4 с после электростимуляции головы в течение 3-4 с током напряжением 100-120 B и 3-4 A. Кровь собирали самотеком в полиэтиленовые флаконы после перерезки сонных артерий и вен и инкубировали при температуре 4-8°C в течение 18-24 ч, сыворотку отсасывали, фильтровали через фильтр 10 нм, лиофилизировали и облучали, например, в двух режимах, отражающих крайние значения заявленного интервала: 10 кГр (фармацевтическая композиция A-10) и 40 кГр (фармацевтическая композиция A-40).

Материал и методы.

Были получены две фармацевтические композиции в виде сухого порошка, растворимого в воде. Делали навески по 10 мг каждой композиции и растворяли в 1,0 мл трижды дистиллированной воды, после чего исходную концентрацию разводили в питательной среде 199 до концентраций от 10,0 мг до 0,15 мг в мл. Эти концентрации использовали дли изучения цитотоксического и противовирусного действия в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита С. Фармацевтическую композицию добавляли в момент заражения клеток вирусом при изучении противовирусной активности.

Вирус. Для изучения противовирусной активности фармацевтических композиций использовали цитопатогенный для культур клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) вариант вируса гепатита C, изолированный нами из сыворотки крови больного хроническим гепатитом С. Вирусосодержащий материал представлял собой культуральную жидкость, собранную из зараженных вирусом гепатита C культур клеток СПЭВ на высоте развития цитопатических проявлений. Исходный титр вируса - 7,51 g ТЦЦ50/100 мкл.

В опытах использовали дозу вируса гепатита C, равную 10,0 и 1,0 ТЦД50.

Культуры клеток. Исследования противовирусной активности препарата проводили в чувствительных для репликации вируса гепатита C культурах клеток СПЭВ, выращенных в виде однодневного монослоя клеток в 24-луночных панелях на среде 199 с добавлением 7% сыворотки крупного рогатого скота, пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл.

Определение цитотоксических свойств фармацевтической композиции.

Фармацевтические композиции (A-10 и A-40) в концентрациях от 10 мг/мл до 0,15 мг/мл добавляли в питательную среду культур клеток СПЭВ, после чего на протяжении 4-х суток наблюдали за жизнеспособностью и пролиферативной активностью клеток. Учет результатов проводили по регистрации % жизнеспособных клеток и их пролиферативной активности.

Полученные результаты представлены в табл.1, 2.

Изучение цитотоксических свойств фармацевтических композиций для культур клеток СПЭВ показало (данные табл.1), что в концентрациях от 10,0 мг/мл до 0,15 мг/мл обе фармацевтические композиции не обладают цитотоксическими для данного вида клеток свойствами. Поэтому в исследованиях по изучению противовирусной активности использовали концентрации от 5,0 мг/мл до 0,15 мг в мл (не токсичные для клеток).

При использовании низкой дозы вируса гепатита C для заражения клеток СПЭВ (1,0 ТЦЦ50) был отмечен противовирусный эффект обеих фармацевтических композиций. Максимальный противовирусный эффект был отмечен при использовании композиции, подвергнутой облучению в дозе 10 кГр. Обработка инфицированных клеток СПЭВ приводила к 100% защите при использовании фармацевтических композиций в концентрациях от 0,67 мг/мл до 5,0 мг/мл.

Противовирусный эффект был обнаружен и у фармацевтической композиции, обработанной в режиме 40 кГр.

При использовании высокой дозы вируса гепатита C для заражения клеток (10,0 ТЦД50 ) были зарегистрированы следующие результаты: полной защиты зараженных клеток от цитопатогенного действия вируса гепатита C не наблюдали. Обнаружено, что обработка клеток СПЭВ сразу же после адсорбции вируса приводила к 85%-й (фармацевтическая композиция A-10) и 50%-й (фармацевтическая композиция A-40) защите зараженных клеток от патогенного действия вируса при использовании их в концентрациях 2,5 и 1,25 мг/мл соответственно.

Заключение.

Изучение противовирусной активности полученных фармацевтических композиций в отношении инфекции, вызванной цитопатогенным вариантом вируса гепатита C в культурах клеток СПЭВ, показало:

1. Для полученных фармацевтических композиций в используемых концентрациях не обнаружены цитотоксические свойства для культур клеток СПЭВ (способности вызывать гибель незараженных клеток).

2. Фармацевтические композиции в используемых концентрациях характеризуются положительным противовирусным эффектом в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита C в культурах клеток СПЭВ, в разных концентрациях они способны защитить 100% клеток от литического действия вируса гепатита C.

3. Максимальной способностью защищать клетки СПЭВ от цитопатогенного действия вируса гепатита C обладала фармацевтическая композиция A-10, при ее сохранении и у композиции A-40 хотя и в меньшем значении. Диапазон концентраций фармацевтических композиций, приводивших к 100% защите клеток, составлял от 5,0 до 0,67 мг/мл.

Табл.1
Цитотоксические свойства разных концентраций фармацевтических композиций для культур клеток СПЭВ.
Доза облученияКонцентрации фарм. композиций (мг/мл), % погибших клеток в монослое
105 2,51,250,67 0,310,15 контроль
10 кГр 000 000 00
40 кГр±0 00 000 0

Приведенные в табл.2 данные свидетельствуют о противовирусной активности фармацевтических композиций в культурах клеток СПЭВ при использовании как различных концентраций фармацевтических композиций, так и разных доз вируса, используемых для поражения клеток.

Табл.2
Противовирусное действие фармацевтических композиций в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита C в культурах клеток СПЭВ.
Доза облучения Доза инфекции (ТЦД50) Концентрации фарм. композиций (мг/мл), % погибших клеток в монослое)
52,5 1,250,67 0310,15контроль
10 кГр 10,07515 50100 7575100
1,075 000 75090
40 кГр 10,010075 100100 100100100
1,075 00 75075 100

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения фармацевтической композиции, обладающей противовирусным действием в отношении вируса гепатита C, при котором проводят электростимуляцию головы бройлерных кур в режиме 100-120 B 3-4 A в течение 3-4 с, забирают кровь, инкубируют при 4-8°C в течение 18-24 часов, осуществляют отбор сыворотки, отобранную сыворотку фильтруют через фильтр с диаметром пор 10 нм, лиофилизируют и облучают в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ) в режиме: 10-40 кГр.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая противовирусным действием в отношении вируса гепатита C, полученная способом по п.1.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2526799

patent-2526799.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K35/16 плазма; сыворотка

Патенты РФ в классе A61K35/16:
способ лечения язвенного пилородуоденального стеноза -  патент 2527336 (27.08.2014)
способ промышленного получения фибрин-мономера из плазмы крови -  патент 2522237 (10.07.2014)
способ пластики костных дефектов -  патент 2517563 (27.05.2014)
способ лечения заболеваний, требующих стимуляции иммунитета и репаративных процессов -  патент 2517060 (27.05.2014)
способ хирургического лечения несросшихся переломов и ложных суставов трубчатых костей при наличии дефицита мягких тканей в проекции несросшихся переломов и ложных суставов -  патент 2515146 (10.05.2014)
способ лечения эректильной дисфункции -  патент 2514639 (27.04.2014)
способ нормализации репродуктивной функции -  патент 2508117 (27.02.2014)
способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений при лечении травматолого-ортопедических пациентов с использованием аппаратов внешней фиксации -  патент 2508062 (27.02.2014)
иммуномодулятор -  патент 2504371 (20.01.2014)
лечебно-косметическое средство -  патент 2500409 (10.12.2013)

Класс A61K38/00 Лекарственные препараты, содержащие пептиды

Патенты РФ в классе A61K38/00:
способ лечения рака толстой кишки -  патент 2529831 (27.09.2014)
внутрижелудочковая доставка ферментов при лизосомных болезнях накопления -  патент 2529830 (27.09.2014)
стабильные составы бортезомиба -  патент 2529800 (27.09.2014)
композиции для усиления антибактериальной активности миелопероксидазы и способы их применения -  патент 2529799 (27.09.2014)
способ лечения больных с синдромом внутрипеченочной портальной гипертензии -  патент 2529414 (27.09.2014)
фармацевтическое средство, содержащее эпитопные пептиды hig2 и urlc10, для лечения рака, способы и средства для индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксического т-лимфоцита (цтл), антигенпрезентирующая клетка и цтл, полученные таким способом, способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа -  патент 2529373 (27.09.2014)
модульный молекулярный конъюгат для направленной доставки генетических конструкций и способ его получения -  патент 2529034 (27.09.2014)
лейколектины и их применение -  патент 2528860 (20.09.2014)
модифицированный фактор виллебранда с удлиненным полупериодом существования in vivo, его применения и способы получения -  патент 2528855 (20.09.2014)
применение пептида актг (4-7)-пгп гепатопротекторного воздействия -  патент 2528741 (20.09.2014)

Класс A61P31/12 противовирусные средства

Патенты РФ в классе A61P31/12:
способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
средство для снижения репродукции вируса гепатита с -  патент 2526179 (20.08.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
пептидные производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусное действие -  патент 2524216 (27.07.2014)
способ получения противовирусного средства и противовирусное средство -  патент 2522880 (20.07.2014)
способ изготовления вакцины против ящура -  патент 2522868 (20.07.2014)
способ получения антирабической вакцины -  патент 2522866 (20.07.2014)
способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы -  патент 2522483 (20.07.2014)


Наверх