ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ лечения болезни альцгеймера

Классы МПК:A61K38/08 пептиды, содержащие 5-11 аминокислот
A61K39/395 антитела; иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки
A61P25/28 для лечения нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например ноотропные агенты, агенты для усиления умственных способностей, для лечения болезни Альцгеймера или других форм слабоумия
Автор(ы):
Патентообладатель(и):АРАКЛОН БАЙОТЕК, С.Л. (ES)
Приоритеты:
подача заявки:
2009-12-25
публикация патента:

Группа изобретений относится к медицине и касается применения пептида, конъюгированного с белком, представляющим собой белок моллюска фиссуреллии (KLH), который действует в качестве иммуногена для получения антител, способных специфически узнавать любой из преобладающих вариантов бета-амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 и Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42; или применения полученного на основе указанного пептида антитела, или активного фрагмента, или производного антитела в приготовлении лекарственного средства для предупреждения и/или лечения заболевания, характеризующегося накоплением амилоидных отложений в мозге пациента. Группа изобретений обеспечивает эффективную иммунизацию, снижение амилоидной нагрузки и количества амилоидных бляшек в мозге. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 пр.

Рисунки к патенту РФ 2526155

способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с отложениями амилоида, которые включают болезнь Альцгеймера.

Уровень техники

Определенные факты известны о биохимических и метаболических феноменах, связанных с наличием болезни Альцгеймера (AD). Два структурных и гистопатологических изменения, наблюдаемых в мозге заболевших AD, представляют собой нейрофибриллярные пучки (NFT) и отложения амилоида. Внутринейрональные нейрофибриллярные пучки присутствуют также при других нейродегенеративных заболеваниях, но наличие отложений амилоида как во внутринейрональном пространстве (нейритные бляшки), так и в непосредственной близости к микрососудам (сосудистые бляшки), как представляется, является характерной чертой AD. Из них нейритные бляшки кажутся наиболее распространенными (Price, D.L. and co-workers, Drug Development Research (1985) 5:59-68).

Главным компонентом данных амилоидных бляшек является пептид из 40-42 аминокислот, называемый амилоидным пептидом Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 4.

Амилоидный пептид Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 4 представляет собой полипептид, который образуется в результате протеолиза мембранных гликопротеинов, обозначаемых белками-предшественниками амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 4 (способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 APP). Данные белки-предшественники амилоидного пептида, состоят из от 695 до 770 аминокислот, причем все они кодируются одним и тем же геном.

Идентифицировано два главных варианта амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 4 - пептид Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 и Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, содержащие 40 и 42 аминокислоты, соответственно, которые характеризуются различным тканевым распределением как в физиологических, так и в патологических условиях. Вариант из 42 аминокислот является преобладающей формой в амилоидных бляшках, локализованных в мозге больных AD.

До настоящего времени предлагались различные возможные решения для обеспечения возможной вакциной против AD.

В европейском патенте EP526511 предлагается введение гомеопатических доз Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 больным с предварительно установленной AD. Однако из-за применяемых доз уровни циркулирующего эндогенного Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 в плазме существенно варьируются и, таким образом, преимущества в такой терапии не ожидается.

Schenk et al. (Nature, 1999; 400: 173-177) описывают иммунизацию Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42 трансгенных мышей PDAPP, которые гиперэкспрессируют мутантный APP человека, предотвращая, таким образом, образование амилоидных бляшек, дистрофию нейритов и астроглиоз.

В заявке WO9927944 (Schenk D.) описано лечение AD путем введения больному Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42.

Фаза III клинических испытаний у 360 больных с диагнозом средней и умеренной AD в 4 европейских странах и в Соединенных Штатах, при которых амилоидный пептид Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42 был использован в качестве антигена, была прекращена после сообщения об энцефалите у некоторых больных (Scrip Daily Online, 25 Feb 2002, S007455320, The Scientist 16[7]: 22, April 1, 2002).

Среди некоторых из возможных проблем, которые при использовании в качестве вакцины эндогенного белка (или белка, естественно присутствующего у животного, которого вакцинируют), как в случае пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, когда организм отвечает путем выработки антител против Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42 и против более мелких фракций, которые могут иметь также еще не известные физиологические функции, можно отметить проблему возможного развития аутоиммунных заболеваний, обусловленных выработкой антител против эндогенного белка, трудность в выработке иммунного ответа из-за неспособности иммунной системы узнавать эндогенные антигены и возможное развитие острого воспалительного ответа.

Задачей настоящего изобретения является лечение болезни Альцгеймера и других амилоидных заболеваний посредством введения пептида, С-концевой части Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 , конъюгированного с белком, где в предпочтительном осуществлении настоящего изобретения указанный белок представляет собой гемоцианин моллюска фиссуреллии.

Раскрытие изобретения

Настоящее изобретение относится к вакцине для предупреждения и/или лечения болезни Альцгеймера и других родственных амилоидных заболеваний.

В соответствии с предпочтительным осуществлением настоящего изобретения предлагается вакцина для предупреждения и/или лечения болезни Альцгеймера и других родственных заболеваний, которая преодолевает недостатки, связанные с пептидами, белками или эндогенными иммуногенами.

Примерами других заболеваний, характеризуемых амилоидными отложениями, являются исландский наследуемый синдром, множественная миелома и губчатый энцефалит, включая болезнь Крейтцфельда-Якоба.

Индукция иммунного ответа может быть активной, например, когда иммуноген вводят для выработки антител, которые взаимодействуют с Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 у больного, или пассивной, например, когда вводят антитело, которое само взаимодействует с Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 у больного.

Для задач настоящего изобретения последующие термины определяются следующим образом.

Термин «родственные амилоидные заболевания» включает заболевания, связанные с аккумуляцией амилоида, которые могут быть ограничены одним органом - местный амилоидоз, или распространяться на несколько органов - системный амилоидоз. Вторичный амилоидоз может быть связан с хроническими инфекциями (такими как, например, туберкулез), семейная средиземноморская лихорадка (FMF) и другие типы системного амилоидоза, найденного у больных с длительным лечением с помощью гемодиализа. Местные формы амилоидоза включают, но не ограничиваются перечисленными, диабет типа II и любое другое, относящееся к этому заболевание, нейродегенеративные заболевания с губчатым энцефалитом, коровий губчатый энцефалит, болезнь Крейтцфельда-Якоба, болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию.

Термин «пассивная иммунизация» применяют в отношении введения антител или их фрагментов индивидууму с целью создания иммунитета у данного индивидуума.

В первом аспекте изобретение включает применение пептида, который действует или в качестве иммуногена, или в качестве антитела, в приготовлении лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания, характеризуемого накоплением отложений амилоида. Указанные способы состоят в индукции иммунного ответа против пептидного компонента амилоидных отложений у больного. Указанная индукция может быть активной при введении иммуногена или пассивной при введении антитела или активного фрагмента, или производного антитела.

В предпочтительном осуществлении настоящего изобретения заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.

Полученное лекарство может быть использовано как у бессимптомных пациентов, так и у пациентов, проявляющих симптомы заболевания.

В соответствии с настоящим изобретением, композиции, способные вызывать иммунный ответ, направленный против определенных компонентов амилоидных бляшек, эффективны при лечении или профилактике заболеваний, связанных с амилоидными отложениями. В частности, в соответствии с аспектом настоящего изобретения, возможно предотвратить прогрессирование или снизить симптомы и/или снизить процесс отложения амилоида у индивидуума при введении больному иммуностимулирующей дозы пептида или антитела, полученного против него.

В соответствии с аспектом настоящего изобретения, антитела получают иммунизацией млекопитающих или птиц посредством использования в качестве иммуногена пептида, конъюгированного с белком.

В соответствии с предпочтительным осуществлением настоящего изобретения, млекопитающие, используемые для иммунизации, могут представлять собой жвачных животных, лошадей, зайцеобразных, плотоядных животных, приматов или любое другое животное, у которого можно получить адекватные количества сыворотки для выделения из нее антитела. Среди птиц, используемых для иммунизации, заявители могут отметить, но не в плане ограничения, среди других Galliformes, Anseriformes и Columbiformes.

В соответствии с предпочтительным осуществлением настоящего изобретения, предложено применение пептида, конъюгированного с белком, который действует в качестве иммуногена для продукции антител, способных специфически узнавать любой из преобладающих вариантов бета-амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 или Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, в приготовлении лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания, характеризуемого накоплением амилоидных отложений в мозге больного.

В соответствии с наиболее предпочтительным осуществлением настоящего изобретения, белок, применяемый для конъюгации с пептидом, представляет собой белок моллюска фиссуреллии.

В соответствии с более предпочтительным осуществлением настоящего изобретения, пептид выбран из группы, состоящей из пептида SEQ ID No 1, пептида SEQ ID No 2, пептида SEQ ID No 3, пептида SEQ ID No 4, пептидов, полученных в результате укорочения с помощью удаления аминокислотных остатков с N-концов и/или C-концов SEQ ID No 1, SEQ ID No 2, SEQ ID No 3 или SEQ ID No 4, и пептидов, полученных в результате удлинения путем добавления остатков к любому из пептидов SEQ ID No 1, SEQ ID No 2, SEQ ID No 3 или SEQ ID No 4.

В соответствии с другим предпочтительным осуществлением, пептид выбран из группы, которая включает пептид SEQ ID No 1, пептиды с последовательностью, полученной в результате удаления остатков N-концевых и/или C-концевых аминокислот из SEQ ID No 1, и пептиды, полученные в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом предпочтительном осуществлении настоящего изобретения пептид выбран из группы, которая состоит из пептида SEQ ID No 2, пептидов с последовательностью, полученной в результате удаления остатков N-концевых и/или C-концевых аминокислот из SEQ ID No 2, и пептидов, полученных в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом предпочтительном осуществлении настоящего изобретения пептид выбран из группы, которая состоит из пептида SEQ ID No 3, пептидов с последовательностью, полученной в результате удаления остатков N-концевых и/или C-концевых аминокислот из SEQ ID No 3, и пептидов, полученных в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом предпочтительном осуществлении настоящего изобретения пептид выбран из группы, которая состоит из пептида SEQ ID No 4, пептидов с последовательностью, полученной в результате удаления остатков N-концевых и/или C-концевых аминокислот из SEQ ID No 4, и пептидов, полученных в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В соответствии с другим осуществлением настоящего изобретения, предложено применение антитела, или активного фрагмента, или производного антитела, которое специфически узнает любой из преобладающих вариантов бета-амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 или Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, в приготовлении лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания, характеризующегося накоплением амилоидных отложений в мозге пациента.

В соответствии с предпочтительным осуществлением настоящего изобретения, антитело, или активный фрагмент, или производное антитела, которое специфически узнает любой из преобладающих вариантов пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 , получают против пептида, выбранного из группы, которая состоит из SEQ ID No 1, SEQ ID No 2, SEQ ID No 3, SEQ ID No 4, необязательно укороченных в результате удаления аминокислотных остатков с N-концов и/или C-концов, и необязательно удлиненных в результате добавления аминокислотных остатков, подходящих для конъюгации с белком.

В другом более предпочтительном осуществлении указанное антитело, или активный фрагмент, или производное антитела получают путем иммунизации млекопитающих или птиц пептидами, выбранными из группы, которая включает пептид SEQ ID No 1, пептиды с последовательностью, полученной в результате удаления N-концевых и C-концевых аминокислотных остатков SEQ ID No 1, и пептиды, полученные в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом более предпочтительном осуществлении указанное антитело, или активный фрагмент, или производное антитела получают путем иммунизации млекопитающих или птиц пептидами, выбранными из группы, которая включает пептид SEQ ID No 2, пептиды с последовательностью, полученной в результате удаления N-концевых и C-концевых аминокислотных остатков SEQ ID No 2, и пептиды, полученные в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом более предпочтительном осуществлении указанное антитело, или активный фрагмент, или производное антитела получают путем иммунизации млекопитающих или птиц пептидами, выбранными из группы, которая включает пептид SEQ ID No 3, пептиды с последовательностью, полученной в результате удаления N-концевых и C-концевых аминокислотных остатков SEQ ID No 3, и пептиды, полученные в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В другом более предпочтительном осуществлении указанное антитело, или активный фрагмент, или производное антитела получают путем иммунизации млекопитающих или птиц пептидами, выбранными из группы, которая включает пептид SEQ ID No 4, пептиды с последовательностью, полученной в результате удаления N-концевых и C-концевых аминокислотных остатков SEQ ID No 4, и пептиды, полученные в результате добавления к любой из предшествующих последовательностей аминокислотных остатков, необходимых для конъюгации с белком.

В данном описании аминокислоты сокращают с применением однобуквенных кодов, применяемых в данной области, как указано ниже:

A = Ala = аланин

C = Cys = цистеин

D = Asp = аспарагиновая кислота

E = Glu = глутаминовая кислота

F = Phe = фенилаланин

G = Gly = глицин

H = His = гистидин

I = Ile = изолейцин

K = Lys = лизин

L = Leu = лейцин

M = Met = метионин

N = Asn = аспарагин

P = Pro = пролин

Q = Gln = глутамин

R = Arg = аргинин

S = Ser = серин

T = Thr = треонин

V = Val = валин

W = Trp = триптофан

Y = Tyr = тирозин

Последовательности, описанные ранее в настоящем изобретении и идентифицированные как SEQ ID No 1, SEQ ID No 2, SEQ ID No 3, SEQ ID No 4 соответствуют следующим аминокислотным последовательностям:

SEQ ID NO 1 LVFFAEDV

SEQ ID NO 2 GLMVGGVV

SEQ ID NO 3 GLMVGGVVIA

SEQ ID NO 4 RHDSGYEVHHQK

Антителам, полученным против указанных пептидов, даны коды SAR-1, SAR-2, SAR-3 и SAR-4 в соответствии с тем, что указано ниже:

SEQ ID NO 1 SAR-2

SEQ ID NO 2 SAR-3

SEQ ID NO 3 SAR-4

SEQ ID NO 4 SAR-1

Информация, относящаяся к идентификации пептидных последовательностей, описанных в настоящем изобретении, которая приложена к настоящему документу в формате для компьютерного прочтения, представляет собой перечень последовательностей, которые присутствуют в данном документе.

Настоящее изобретение иллюстрируется с помощью следующих примеров.

Пример 1. Получение поликлональных антител.

Путем иммунизации Новозеландских белых кроликов было получено четыре поликлональных антитела против четырех пептидов, конъюгированных с KLH, которые были использованы в качестве иммуногена.

Каждый иммуноген инъецировали двум кроликам, по пять инъекций каждому кролику: первая внутрикожная инъекция конъюгата пептид-KLH в ЗФР, эмульгированного в полном адъюванте Фрейнда, и четыре дополнительные внутримышечные инъекции в качестве поддерживающей дозы на 14, 28, 49 и 80 дни того же конъюгата пептид-KLH в ЗФР, но на этот раз эмульгированного в неполном адъюванте Фрейнда, при отборе крови на 90 день для определения наличия антител.

После сбора крови отделяли сыворотку и производили предварительную очистку обессоливанием, после чего антитела очищали по сродству на матриксе, включающем 1,5 мл активированного вещества EMD-Epoxy (Merck), к которому добавляли 5 мг соответствующего пептида. Очищенные фракции консервировали в 0,1% БСА (Sigma) и хранили при 4°С, а в качестве криопротектора можно было добавить 20-50% глицерина.

Пример 2. Иммуноблоттинг для Аспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 .

1. Электрофорез.

Применяли способ Леммли, описанный в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, New York, 1998, модифицированный для улучшения разделения небольших пептидов.

Применяли прибор Miniprotean 3 от Bio-Rad.

Применяли 15%-ный акриламидный гель, смешанный со следующими компонентами:

Исходные растворыРазделяющий гель (15%-ный)Концентрирующий гель, мкл
40% акриламид 3,75 мл500
Трис 3 М, pH 8,453,3 мл 250
Глицерин 1,05 мл-
Вода1,9 мл4,2
ДДС-Na 20%50 мкл18,6
APS 10%50 мкл25
TEMED10 мкл 5

Применяли исходные растворы пептидов Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 и 42 с концентрацией 1 мг/мл (растворенных в ЗФР). Отбирали необходимый объем данных растворов для каждого из образцов и доводили до 20 мкл с помощью SBLT (SBL + трис-основание 2 М). Образцы затем кипятили в течение 5 минут для денатурации пептидов и удаления возможных протеаз.

Середину кюветы наполняли катодным буфером, а окружение - анодным буфером, причем состав данных буферов был следующим:

Анодный буфер.

24,2 г трис-основания (конечная концентрация 0,2 М)разбавить до 1 л H2O,

довести pH до 8,9 концентрированной HCl,

хранить при 4°С на протяжении до 1 месяца.

Катодный буфер.

12,11 г трис-основания (конечная концентрация 0,1 М),

17,92 г трицина (конечная концентрация 0,1 М,)

1 г ДДС-Na (конечная концентрация 0,1%)

разбавить до 1 л H2O,

не доводить pH.

Хранить при 4°С на протяжении до 1 месяца.

Наконец, образцы вносили в лунки: 20 мкл/лунку. С применением Polypeptide Standard Kaleidoscope от Bio-Rad в качестве маркера перемещение начинали при низком напряжении (30 В), и затем приблизительно через 1 час электрофореза напряжение увеличивали до 100 В.

2. Перенос на мембрану.

Разделенные в геле белки переносили на мембрану PVDF с помощью электроблоттинга. В буклеты для переноса помещали следующее:

Тыльная сторона - губка - 3 листа ватманской бумаги (или фильтровальной бумаги - гель - мембрана - 3 листа ватманской бумаги - губка - сторона отпечатка.

После этого кювету наполняли буфером для электроблоттинга:

Глицин 38 нМ

Трис-основание 50 мМ

Метанол 40%

Перенос производили в течение 2 часов при 200 мА. Во время переноса буфер перемешивали с помощью магнитной мешалки.

3. Инкубация с антителами.

Антитела и порошковое молоко растворяли в ЗФР-t (ЗФР + 0,5% твин 20), промывку также производили с помощью ЗФР-T.

После переноса поверхность мембраны блокировали 5%-ным раствором порошкового молока в течение 1 часа при перемешивании при комнатной температуре (RT).

После этого мембрану промывали 2×5 минут при RT.

Затем ее инкубировали с первичным антителом (SAR-1, SAR-2, SAR-3 или SAR-4) в течение 1 часа при RT в разведении, по меньшей мере 1:500 в ЗФР-T.

Мембрану промывали 3×10 минут при RT. Затем ее инкубировали со вторичным антителом: козьим-HRP против кролика в течение 1 часа при RT (1:10000 во всех случаях).

Вновь повторяли промывку мембраны: 3×10 минут при RT.

4. Окраска.

После последней промывки мембрану инкубировали с раствором хемолюминесцентного набора с применением ECL kit+Plus от Pharmacia.

Мембрану заворачивали в целлофан и экспонировали с пленкой с двойной эмульсией (Hyperfilm MP от Amersham) на протяжении различных периодов времени от 30 секунд до 2 минут.

Пример 3. Иммуногистохимия с антителами SAR-1, SAR-2, SAR-3 и SAR-4 ткани мозга человека.

Срезы ткани фиксировали в парафине в соответствии со следующими стадиями:

a) фиксации в нейтральном 10%-ном формальдегиде,

b) дегидратации с помощью последовательных стадий с возрастающими концентрациями спирта,

c) проводки через ксилол и парафин, причем последнюю стадию осуществляют в печи при 60-62°С,

d) получения парафиновых блоков, из которых получали срезы 4 мкм, которые монтировали на стеклах.

Срезы затем депарафинизировали проводкой через следующие растворы:

Ксилол 100% 10 минут

Ксилол 100% 10 минут

Этанол 100% 5 минут

Этанол 100% 5 минут

Этанол 96% 5 минут

Этанол 90% 5 минут

Этанол 70% 5 минут

ЗФР 5 минут x 3 раза

Затем их обрабатывали следующим образом:

a) 96%-ной муравьиной кислотой в течение 3 минут в вытяжном шкафу при перемешивании,

b) быстрой промывкой водой,

c) промывкой ЗФР 2×5 минут,

d) блокированием эндогенных пероксидаз в течение 15 минут в растворе, составленном из 70 мл ЗФР, 30 мл метанола и 1 мл H2O2,

e) промывкой ЗФР 3×5 минут,

f) промывкой ЗФР/T (0,5% тритон или твин-20 в ЗФР) 3×5 минут,

g) блокированием неспецифического связывания сывороткой козы (нормальной сывороткой козы), разведенной 10:100 в ЗФР/T, в течение 2 часов,

h) инкубацией с первичными антителами в течение ночи при 4°С во влажной камере:

Sar-1способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 Разведение 1:150 в ЗФР

Sar-2способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 Разведение 1:1500 в ЗФР

Sar-3способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 Разведение 1:1500 в ЗФР

Sar-4способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 Разведение 1:2000 в ЗФР

i) промывкой ЗФР/T 3×5 минут,

j) инкубацией со вторичным антителом (козьим против кролика), разведенным 1:200 ЗФР, в течение 45 минут,

k) промывкой ЗФР 4×5 минут,

l) инкубацией ABC (авидин-биотинового комплекса) Vector Labs в разведении 1:100 в ЗФР/T в течение 45 минут в темноте при сохранении данных условий до завершения развития окраски,

m) промывкой ЗФР 3×5 минут,

n) проявлением в диаминобензидине (DAB).

Время контролировали эмпирически под стереоскопическим микроскопом. Для этого, во-первых, производили промывку в 0,5 М растворе трис-HCl в течение 10 минут при перемешивании с последующей инкубацией с диаминобензидиновым субстратом (DAB), разведенным в 0,05 М трис-HCl, и к которому добавляли 0,5 мкл/мл H2O2 при 4°С. После окончания реакции производили три промывки в ЗФР при 4°С в течение 5 минут каждая, и затем производили обезвоживание в этаноле при 70, 90 и 100% в течение 2 минут каждый раз, проводку через ксилол в течение 4 минут и затем проводку через ксилол в течение 2 минут, после чего срезы монтировали с помощью Eukitt для исследования под микроскопом.

Перечень последовательностей

Количество последовательностей: 4

Информация о последовательности 1:

Свойства последовательности:

Длина: 8

Тип: аминокислотная

Тип молекулы: пептид

Источник: Химический синтез

Описание последовательности:

SEQ ID NO 1

LeuVal PhePheAla GluAsp Val
1способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 5способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155

Информация о последовательности 2:

Свойства последовательности:

Длина: 8

Тип: аминокислотная

Тип молекулы: пептид

Источник: Химический синтез

Описание последовательности:

SEQ ID NO 1

GlyLeu MetValGly GlyVal Val
1способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 5способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155

Информация о последовательности 3:

Свойства последовательности:

Длина: 10

Тип: аминокислотная

Тип молекулы: пептид

Источник: Химический синтез

Описание последовательности:

SEQ ID NO 1

GlyLeu MetValGly GlyVal ValIleAla
1способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 5способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 10способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155

Информация о последовательности 4:

Свойства последовательности:

Длина: 12

Тип: аминокислотная

Тип молекулы: пептид

Источник: Химический синтез

Описание последовательности:

SEQ ID NO 4

ArgHis AspSerGly TyrGlu ValHisHis GlnLys
1способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 5способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 10способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 способ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение пептида, конъюгированного с белком, представляющим собой белок моллюска фиссуреллии (KLH), который действует в качестве иммуногена для получения антител, способных специфически узнавать любой из преобладающих вариантов бета-амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 и Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, в приготовлении лекарственного средства для предупреждения и/или лечения заболевания, характеризующегося накоплением амилоидных отложений в мозге пациента, где пептид состоит из SEQ ID No 3.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.

3. Применение антитела, или активного фрагмента, или производного антитела, которое специфически узнает любой из преобладающих вариантов бета-амилоидного пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 40 и Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 42, в приготовлении лекарственного средства для предупреждения и/или лечения заболевания, характеризующегося накоплением амилоидных отложений в мозге пациента, где антитело, или активный фрагмент, или производное антитела, которое специфически узнает любой из преобладающих вариантов пептида Aспособ лечения болезни альцгеймера, патент № 2526155 , получено на основе пептида, состоящего из SEQ ID No 3.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.

5. Применение по п.3, отличающееся тем, что указанное антитело, или активный фрагмент, или производное антитела получены иммунизацией млекопитающих или птиц пептидом SEQ ID No 3.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2526155

patent-2526155.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K38/08 пептиды, содержащие 5-11 аминокислот

Патенты РФ в классе A61K38/08:
применение пептида актг (4-7)-пгп гепатопротекторного воздействия -  патент 2528741 (20.09.2014)
циклический октапептид, радиофармацевтическое средство на его основе и способ применения радиофармацевтического средства для получения лекарственных (фармацевтических) средств для лечения новообразований, экспрессирующих соматостатиновые рецепторы -  патент 2528414 (20.09.2014)
содежащий октреотид состав с замедленным высвобождением со стабильно высоким уровнем воздействия -  патент 2526822 (27.08.2014)
применение опиорфина в качестве психостимулирующего агента -  патент 2526819 (27.08.2014)
способ хирургического лечения острого панкреатита с ранним энтеральным интраоперационным питанием пациента -  патент 2526247 (20.08.2014)
новый пептид и его применение -  патент 2525913 (20.08.2014)
пептиды и их производные, взаимодействующие с никотиновым ацетилхолиновым рецептором и пригодные для использования в косметологии против мимических и возрастных морщин -  патент 2524428 (27.07.2014)
ингибиторы протеазы вируса гепатита с и их применение -  патент 2523790 (27.07.2014)
применение аналогов соматостатина при менингиоме -  патент 2523416 (20.07.2014)
средство для купирования алкогольного абстинентного синдрома -  патент 2521226 (27.06.2014)

Класс A61K39/395 антитела; иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

Патенты РФ в классе A61K39/395:
лекарственное средство для лечения патологического синдрома и способ лечения острых и хронических заболеваний дыхательноый системы и синдрома кашля -  патент 2529783 (27.09.2014)
лечение опухолей с помощью антитела к vegf -  патент 2528884 (20.09.2014)
антитела, узнающие углеводсодержащий эпитоп на cd43 и сеа, экспрессируемых на раковых клетках и способы их применения -  патент 2528738 (20.09.2014)
антитела против альфа5-бета 1 и их применение -  патент 2528736 (20.09.2014)
антагонисты pcsk9 -  патент 2528735 (20.09.2014)
способ лечения больных с синдромом диспепсии в сочетании с избыточной массой тела -  патент 2528641 (20.09.2014)
средство для лечения аутоиммунных заболеваний -  патент 2528337 (10.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ лечения острых и хронических заболевания дыхательной системы и синдрома кашля -  патент 2528093 (10.09.2014)
способ лечения жирового гепатоза кошек -  патент 2527700 (10.09.2014)
способ комбинированного лечения ретиноваскулярного макулярного отека -  патент 2527360 (27.08.2014)

Класс A61P25/28 для лечения нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например ноотропные агенты, агенты для усиления умственных способностей, для лечения болезни Альцгеймера или других форм слабоумия

Патенты РФ в классе A61P25/28:
внутрижелудочковая доставка ферментов при лизосомных болезнях накопления -  патент 2529830 (27.09.2014)
улучшение памяти у пациентов с оценкой 24-26 баллов по краткой шкале оценки психического статуса -  патент 2529815 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы -  патент 2528229 (10.09.2014)
применение программы противоположной дифференцировки клеток (ппдк) для лечения дегенерировавших органов в патологическом состоянии -  патент 2528084 (10.09.2014)
сублингвальная форма 6-метил-2-этил-3-гидроксипиридина и ее применение в качестве средства, обладающего стимулирующей, анорексигенной, антидепрессивной, анксиолитической, противогипоксической, антиамнестической (ноотропной) и антиалкогольной активностью -  патент 2527342 (27.08.2014)
четырехзамещенные бензолы -  патент 2527177 (27.08.2014)
способ повышения фармакологической активности действующего вещества лекарственного средства и фармацевтическая композиция -  патент 2526153 (20.08.2014)
терапевтические агенты 713 -  патент 2526055 (20.08.2014)
фармацевтическая композиция в форме раствора для инъекций и способ ее получения -  патент 2524651 (27.07.2014)


Наверх