штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной целлюлозы

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
C12P19/04 полисахариды, те соединения, содержащие более пяти сахаридных радикалов, связанных друг с другом гликозидными связями
C12R1/01 бактерии или актиномицеты
Автор(ы):,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" (RU),
Общество с ограниченной ответственностью "Наука-Сервис С" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-03-12
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 является продуцентом бактериальной целлюлозы. Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером штамм Gluconacetobacter sucrofermentans ВКПМ В-11267 и может быть использован в медицине, пищевой и фармацевтической промышленностях. Изобретение позволяет повысить выход бактериальной целлюлозы. 2 ил., 6 пр.

Рисунки к патенту РФ 2523606

штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной   целлюлозы, патент № 2523606 штамм gluconacetobacter sucrofermentans -продуцент бактериальной   целлюлозы, патент № 2523606

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и может быть использовано в медицине, пищевой и фармацевтической промышленностях.

Известен штамм бактерий Gluconacetobacter hansenii GH-1/2008 (ВКПМ В-10547), образующий при культивировании в статических условиях в течение 7 суток на среде HS 2,17 г/л бактериальной целлюлозы, на селективных средах 4,73-6,67 г/л бактериальной целлюлозы [Патент № 2464307].

Предлагается применение штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 в качестве продуцента бактериальной целлюлозы для использования в медицине, пищевой и фармацевтической промышленностях.

Техническим результатом изобретения является штамм Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 (ВКПМ В-11267), продуцент бактериальной целлюлозы.

Штамм Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 (ВКПМ В-11267) получен из чайного гриба с последующей селекцией на основе естественного отбора в ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева».

Штамм Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 идентифицирован по культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим свойствам и генетическим характеристикам и имеет следующие признаки.

Штамм - облигатный аэроб, клетки цилиндрические с закругленными концами размерами 0,6-1,2×1-3 мкм, некоторые слегка изогнуты, расположены одиночно, попарно и в коротких цепочках; спор не образуют; грамотрицательные, подвижные. На фиг.1 представлены клетки бактерий Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110, окрашенные по Граму.

Штамм идентифицирован до вида с помощью анализа 16S РНК.

При секвенировании вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, получена собранная нуклеотидная последовательность для штамма. Последовательности были выровнены с соответствующими последовательностями ближайших видов бактерий, доступными из базы данных GenBank. По данным анализа генов, кодирующих 16S рРНК, построено филогенетическое дерево Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 с гомологичными штаммами, представленное на фиг.2. По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, штамм наиболее близок к виду Gluconacetobacter sucrofermentans.

Штамм хорошо растет на агаризованных средах. На агаризованной среде с глюкозой (состав (г/л): глюкоза - 10,0; дрожжевой экстракт - 10,0; пептон - 7,0; лимонная кислота - 0,2; уксусная кислота - 1,5 мл; агар - 15,0; мел - 0,5; этанол -10,0 мл. pH среды 5,0-6,0) и среде YE (состав (г/л): дрожжевой экстракт - 30,0; этанол - 20,0, агар - 20,0. pH среды 5,0-6,0) на третьи сутки роста колонии мелкие круглые диаметром 1 мм светло-бежевого цвета. На пятые сутки культивирования диаметр колоний увеличивается до 2-4 мм. На агаризованной среде с мелом колонии круглые, диаметром 1 мм, белого цвета, окруженные прозрачным ореолом. На жидких питательных средах с сахарозой и глюкозой в статических условиях образуется гель-пленка бактериальной целлюлозы, в динамических условиях - хлопьевидные структуры.

Штамм культивируют в статических и динамических условиях на качалке при 250 об/мин и температуре 30°C в среде HS (Hestrin, Schramm, 1954) следующего состава, г/л: D-глюкоза - 20,0; дрожжевой экстракт - 5,0; пептон - 5,0; Na2PHO4 - 2,7; лимонная кислота - 1,15. pH среды - 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Количество бактериальной целлюлозы, образующееся на пятые сутки культивирования на среде HS в статических условиях - 2,75 г/л, в динамических условиях - 3,1 г/л. На среде с мелассой образуется 2,5 г/л БЦ в статических условиях и 4,0 г/л БЦ в динамических условиях. На фильтрате нативной барды образуется 3,5 г/л БЦ в статических условиях и 6,8 г/л БЦ в динамических условиях.

Культура Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 может расти без добавления уксусной кислоты. Штамм растет при pH от 2,5 до 6,5, оптимальным pH является интервал от 4,0 до 6,0.

Пример 1: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в статических условиях в открытых емкостях на среде HS (Hestrin, Schramm, 1954) следующего состава, г/л: D-глюкоза - 20,0; дрожжевой экстракт - 5,0; пептон - 5,0; Na2PHO4 - 2,7; лимонная кислота - 1,15. pH среды - 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°C до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. Масса сухой БЦ составляет 2,75 г/л.

Пример 2: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в статических условиях открытых емкостях на среде с мелассой следующего состава, г/л: свекловичная меласса - 70,0; пептон - 20,0; дрожжевой экстракт - 10,0; этанол - 7,0. pH среды - 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°C до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. После удаления клеток и компонентов среды масса сухой БЦ составляет 2,5 г/л.

Пример 3: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в статических условиях открытых емкостях на фильтрате послеспиртовой барды. pH среды - 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°C до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. После удаления клеток и компонентов среды масса сухой БЦ составляет 3,5 г/л.

Пример 4: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 250 об/мин и температуре 30°C в колбах на 250 мл, содержащих 100 мл среды HS следующего состава, г/л: D-глюкоза - 20,0; дрожжевой экстракт - 5,0; пептон - 5,0; Na2PHO4 - 2,7; лимонная кислота - 1,15. pH среды - 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°С до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. После удаления клеток и компонентов среды масса сухой БЦ составляет 3,1 г/л.

Пример 5: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 250 об/мин и температуре 30°С в колбах на 250 мл, содержащих 100 мл среды среды с мелассой следующего состава, г/л: свекловичная меласса - 70,0; пептон - 20,0; дрожжевой экстракт - 10,0; этанол - 7,0. pH среды - 6,0. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°C до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. После удаления клеток и культуральной среды масса сухой БЦ составляет 4,0 г/л.

Пример 6: Культуру штамма Gluconacetobacter sucrofermentans H - 110 выращивают в течение 3-5 суток в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 250 об/мин и температуре 30°C в колбах на 250 мл, содержащих 100 мл фильтрата послеспиртовой барды. pH среды - 6,0. Бактериальную целлюлозу, полученную при культивировании бактерий, обрабатывали 0,1 н. раствором NaOH при 80°C в течение 30 минут для удаления клеток и компонентов культуральной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза. Далее целлюлозу высушивали при 80°C до постоянной массы. Количество бактериальной целлюлозы определяли весовым методом. После удаления клеток и культуральной среды масса сухой БЦ составляет 6,8 г/л.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Штамм бактерии Gluconacetobacter sucrofermentans ВКПМ В-11267 - продуцент бактериальной целлюлозы.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2523606

patent-2523606.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс C12P19/04 полисахариды, те соединения, содержащие более пяти сахаридных радикалов, связанных друг с другом гликозидными связями

Патенты РФ в классе C12P19/04:
способ получения целлюлозосодержащего продукта, продукт полученный данным способом -  патент 2525142 (10.08.2014)
способ получения жидкой фракции, содержащей изолированные высокомолекулярные капсульные полисахариды streptococcus pneumoniae, и жидкая фракция, полученная таким способом -  патент 2524436 (27.07.2014)
ускоренный способ очистки для получения капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae -  патент 2516340 (20.05.2014)
способ получения раствора, содержащего высокомолекулярные изолированные капсульные полисахариды streptococcus pneumoniae серотипа 19а (варианты) -  патент 2511404 (10.04.2014)
способ получения глюкан-хитозанового комплекса из дрожжевой биомассы отходов пивоваренного производства -  патент 2499836 (27.11.2013)
способ получения липополисахарида возбудителя чумы -  патент 2483112 (27.05.2013)
способ разделения липополисахаридов грамотрицательных бактерий -  патент 2478712 (10.04.2013)
способ подготовки лигноцеллюлозного сырья для получения сахаров и установка для его осуществления -  патент 2475540 (20.02.2013)
способ получения биологического связующего -  патент 2473692 (27.01.2013)
штамм бактерий haemophilus influenzae в 326, стабильный продуцент капсульного полисахарида -  патент 2465316 (27.10.2012)

Класс C12R1/01 бактерии или актиномицеты

Патенты РФ в классе C12R1/01:
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений -  патент 2524434 (27.07.2014)
способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий -  патент 2524432 (27.07.2014)
штамм бактерий exiguobacterium mexicanum - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2523584 (20.07.2014)
способ очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий exguobacterium mexicanum -  патент 2521654 (10.07.2014)


Наверх