ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны

Классы МПК:C12Q1/68 использующие нуклеиновые кислоты
A61K47/44 масла, жиры или воски, отнесенные к нескольким рубрикам из рубрик  47/02
A61K31/7105 природные рибонуклеиновые кислоты, те содержащие только рибозы, присоединенные к аденину, гуанину, цитозину или урацилу и содержащие 3"- 5" фосфодиэфирные связи
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-09-28
публикация патента:

Изобретение относится к области биохимии. Проводят количественную оценку эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны. В качестве биологической мембраны используют клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus. В качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8% и составляющую комплекс с РНК. Для сравнения используют препарат Виталанг-1, содержащий чистую РНК. Клетки помело заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в количестве по 4,8 мл в каждом флакончике. Инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре. С помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность растворов против дистиллированной воды, определяя содержание РНК в клетках помело и окружающем растворе. В результате сравнения полученных значений оптической плотности растворов делают вывод о том, что Виталанг-2 проникает через биологические мембраны в 4,7-4,9 раза эффективнее Виталанга-1. Устанавливают, что спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений. Изобретение позволяет оценить эффективность олеиновой кислоты, используемой в качестве переносчика РНК через биологические мембраны. 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии и фундаментальной медицины, в частности к средствам, облегчающим первичный скрининг потенциальных лекарственных препаратов, и может быть использовано, например, для подбора эффективных переносчиков РНК через биологические мембраны.

Прогресс в области молекулярной биологии и биотехнологии в последние десятилетия позволил медицине вплотную приблизиться к лечению наследственных болезней путем управления экспрессией генов с помощью чужеродной РНК. Осталась нерешенной проблема направленной доставки этой РНК внутрь клеток через биологические мембраны. Предлагают использовать с этой целью наночастицы алмазов и окислов некоторых металлов, аполипопротеин А-1 и др. Выбрать лучшее из предложенного трудно, поскольку для регистрации трансмембранного переноса авторы используют качественные и полуколичественные методы. В частности, известен и широко применяется флуоресцентный метод, основанный на присоединении флуоресцирующего красителя к РНК, инкубации этого комплекса в присутствии переносчика с суспензией клеток и последующего наблюдения свечения в клетках с помощью микроскопа [см., напр. 1]. Результат анализа качественный.

Целью настоящего изобретения является создание простого, но полноценного количественного метода для оценки эффективности переносчиков РНК через биологические мембраны.

Цель достигается тем, что в качестве модели для такой оценки используются сочные мешочки спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus со спектрофотометрическим определением РНК в клетках и окружающем растворе.

Пример осуществления предлагаемого способа

Препарат Виталанг-1, представляющий собой чистую высокополимерную дрожжевую РНК с теоретической весовой экстинкцией 20,0 ОЕ260/мг, выделяли по методу [2].

Препарат Виталанг-2 с весовой экстинкцией 17,8 ОЕ 260/мг выделяли по методу [3]. Препарат содержит в своем составе 10,8% олеиновой кислоты.

Для определения способности препаратов Виталанг-1 и Виталанг-2 проникать через биологические мембраны в 3 одинаковых стеклянных флакончика на 6 мл с завинчивающимися пробками помещали по 7 продолговатых сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus и заливали их:

1-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-1 (27,3 ОЕ260/мл),

2-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-2 (27,1 ОЕ260/мл),

3-й - 4,8 мл дистиллированной воды.

Через 22 ч инкубации при комнатной температуре замеряли оптическую плотность растворов в 1-ом и 2-ом флакончиках против 3-го. Получилось: в 1-ом - 26,4 ОЕ260/мл, во 2-ом - 22,9 ОЕ260 /мл.

Т.е. клетки поглотили Виталанга-2 в 4,7 раза больше, чем Виталанга-1. Далее растворы из флакончиков сливали и промывали каждый 5-ю порциями по 5 мл дистиллированной воды. Замерив оптическую плотность 5-й порции из 1-го и 2-го флакончика против 3-го, получили:

в 1-ом - 0,024 ОЕ260 /мл,

во 2-ом - 0,019 ОЕ260/мл.

Сочные мешочки во всех 3-х флакончиках измельчали стеклянной палочкой, из полученных суспензий отбирали по 100 мкл раствора и, разбавив его в 50 раз дистиллированной водой, замеряли оптическую плотность растворов из 1-го и 2-го флакончика против 3-го. Получилось:

в 1-ом - 0,065 ОЕ260/мл,

во 2-ом - 0,318 ОЕ260/мл.

Т.е. Виталанг-2 проникает через биологические мембраны минимум в 4,9 раза эффективнее Виталанга-1, при этом спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений.

Таким образом, предложенный метод позволяет количественно оценить способность переносчика (в нашем случае олеиновой кислоты) транспортировать РНК через биологические мембраны. Для более точной количественной оценки эффективности переносчика нетрудно снять и соответствующие кинетические кривые.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт № 16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Зубжицкий Ю.Н. Метод люминесцентной микроскопии в микробиологии, вирусологии и иммунологии, Л., 1964.

2. Патент RU 2392328 С2, 10.10.2009.

3. Патент RU 2403288 С1, 10.11.2010.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны, представляющие собой клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus, характеризующийся тем, что в качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8 %, для чего указанные клетки заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в равных количествах, инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре, с помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность РНК в указанных клетках и окружающем растворе с последующей оценкой эффективности.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2523119

patent-2523119.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12Q1/68 использующие нуклеиновые кислоты

Патенты РФ в классе C12Q1/68:
способ идентификации вызывающих муковисцидоз мутаций в гене cftr человека, набор праймеров, биочип, набор мишеней и тест-система, используемые в способе -  патент 2529717 (27.09.2014)
аптамер, специфичный к опухолевым тканям легкого человека -  патент 2528870 (20.09.2014)
способ выявления микобактерий туберкулеза генотипа веijing в режиме реального времени -  патент 2528866 (20.09.2014)
способ проведения пцр и пцр-пдрф для идентификации аллельных вариантов waxy-генов пшеницы -  патент 2528748 (20.09.2014)
синтетические олигонуклеотидные праймеры для идентификации вируса блютанга нуклеотипа в (3, 13 и 16 серотипы) методом от-пцр -  патент 2528745 (20.09.2014)
способ проведения пцр-пдрф для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и к гена dgat1 -  патент 2528743 (20.09.2014)
синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления генотипов для идентификации личности с помощью системы микросателлитных днк-маркеров y-хромосомы -  патент 2528742 (20.09.2014)
способ оценки чувствительности клеток рака легкого к доксорубицину на основании уровней экспрессии маркерных генов и набор для его осуществления -  патент 2528247 (10.09.2014)
биологический микрочип для выявления и многопараметрического анализа противохолерных антител -  патент 2528099 (10.09.2014)
набор синтетических олигонуклеотидов для амплификации и секвенирования its1-5.8s-its2 сосудистых растений -  патент 2528063 (10.09.2014)

Класс A61K47/44 масла, жиры или воски, отнесенные к нескольким рубрикам из рубрик  47/02

Патенты РФ в классе A61K47/44:
композиции матриксных носителей, способы и применения -  патент 2528895 (20.09.2014)
мазь доктора рустамова -  патент 2527335 (27.08.2014)
твердые композиции, содержащие 5-аминолевулиновую кислоту -  патент 2527328 (27.08.2014)
полутвердые композиции и фармацевтические продукты -  патент 2526803 (27.08.2014)
травяной состав местного применения для лечения акне и кожных расстройств -  патент 2526138 (20.08.2014)
мазь для лечения ожогов -  патент 2523551 (20.07.2014)
лекарственный препарат в суппозиториях для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных вирусом простого герпеса 1-го типа и цитомегаловирусом и способ лечения им детей -  патент 2521272 (27.06.2014)
средство наружной терапии для больных атопическим дерматитом -  патент 2517520 (27.05.2014)
крем для наружного лечения синдрома пиккарди-грехема-литтла-лассьюэра -  патент 2517239 (27.05.2014)
фармацевтическая композиция, содержащая налбуфина гидрохлорид, ее применение для лечения болевого синдрома средней и высокой интенсивности и способ получения фармацевтической композиции -  патент 2513514 (20.04.2014)

Класс A61K31/7105 природные рибонуклеиновые кислоты, те содержащие только рибозы, присоединенные к аденину, гуанину, цитозину или урацилу и содержащие 3"- 5" фосфодиэфирные связи

Патенты РФ в классе A61K31/7105:
композиции и способы лечения плохо заживающих ран -  патент 2521329 (27.06.2014)
способ комплексной реабилитации детей с хроническим микробно-воспалительным поражением мочевого тракта со сниженным имунным статусом -  патент 2519634 (20.06.2014)
способ лечения гриппа птиц -  патент 2502512 (27.12.2013)
противогерпетическое средство -  патент 2502504 (27.12.2013)
композиция и способ лечения опухолей -  патент 2500815 (10.12.2013)
способ лечения рецидивирующего урогенитального герпеса с симптомами хронической усталости -  патент 2492861 (20.09.2013)
способ лечения оспы -  патент 2480219 (27.04.2013)
способ получения лекарственных и биологически активных средств -  патент 2479318 (20.04.2013)
связывающие комплемент аптамеры и средства против с5, пригодные для лечения глазных нарушений -  патент 2477137 (10.03.2013)
on01910.na, усиливающий активность химиотерапевтического агента в резистентных к лекарственным средствам опухолях -  патент 2476239 (27.02.2013)


Наверх