простой способ экстракции из дрожжей высокополимерной рнк

Классы МПК:A61K36/06 грибы, например дрожжи
C12N1/18 хлебопекарные дрожжи; пивные дрожжи
C12N15/10 способы выделения, получения или очистки ДНК или РНК
C12P19/34 полинуклеотиды, например нуклеиновые кислоты, олигорибонуклеотиды
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-11-07
публикация патента:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК. Способ получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в водном растворе олеата натрия, кипячение суспензии при периодическом перемешивании, центрифугирование охлажденного до комнатной температуры лизата, доведение объема дрожжевого экстракта до стандарта дистиллированной водой с последующим выделением из него высокополимерной РНК, добавлением его в мазь или разливом в виалы по 2-4 мл с дальнейшим замораживанием и лиофилизацией при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход высокополимерной РНК. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии, медицины и фармацевтической промышленности и может быть использовано для лечения заболеваний вирусной этиологии, в том числе ОРВИ и гриппа.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения экстракта высокополимерной (ВП) РНК из сухих пекарских дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до рН 7-8, выдерживания суспензии при 99-102°С в течение 40-60 мин с последующим центрифугированием лизата при 2500-3500 g в течение 5-15 мин без охлаждения [1].

Данным способом получают экстракт биологически активной ВП РНК. Однако выход целевого продукта в этом процессе относительно невелик, а содержание в экстракте примесной низкополимерной кислоторастворимой фракции (КРФ) значительное.

Цель настоящего изобретения - увеличить выход ВП РНК при ее экстракции из дрожжей, снизив, одновременно, содержание в ней примесной низкополимерной КРФ.

Поставленная цель достигается заменой олеиновой кислоты на ее соль - олеат натрия.

А именно, в заявляемом способе пекарские дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеата натрия, суспензию выдерживают при 98-100°С в течение 40-45 мин, лизат охлаждают до 20-30°С и центрифугируют при 3000 g в течение 10 мин без охлаждения. Супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, биологически активную ВП РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть добавлен в пищу животным или, в виде коктейлей для наращивания мышечной массы, человеку.

Пример осуществления предлагаемого способа

300 г сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке, первые 2-3 щепотки за несколько секунд до закипания) в течение 3-5 мин в 5 л высокой кастрюле в 3 л кипящей дистиллированной воды, содержащей 48,4 г олеата натрия. Температура суспензии не опускалась ниже 98°С. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°С, периодически перемешивая. По окончании экстракции суспензию охлаждали до 20-30°С в раковине в 3-х сменах холодной воды в течение 20-30 мин и затем центрифугировали на центрифуге S70D фирмы «Janetzki», Германия (3000 g, 10 мин, без охлаждения). Супернатант (1,7 л) доводили кипяченой дистиллированной водой до 2 л. Далее выделяли из него ВП РНК, добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Плотный осадок дрожжевого шлама, собирающийся на дне центрифужных стаканов и содержащий до 70% денатурированного белка, собирали и готовили из него коктейль или сушили при 58-62°С обычным способом.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий ВП РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и приготовленный по способу-прототипу [1].

Как видно из приведенной ниже таблицы, его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для способа-прототипа, в то время как выход целевого продукта - РНК увеличен по сравнению с прототипом на 16% при одновременном снижении содержания в нем примесной низкополимерной КРФ в 1,6 раза.

Источники информации

1. Патент РФ № 2403288.

2. Ямковой В.И., Ямковая Т.В. Практикум по биохимии. - Новосибирск: Изд. НГПУ, 2012. - Ч.2: Аналитическая биохимия. С.16-17.

Таблица
Основные характеристики осветленного центрифугированием экстракта ВП РНК, полученного нами из 300 г сухих пекарских дрожжей с помощью олеата натрия предлагаемым способом и с помощью олеиновой кислоты по способу-прототипу [1]
Экстракт ВП РНКспектральные отношениявыход РНК, ОЕ 260содержание КРФ*, %
D230/D260 D250/D260 D280/D260
Получен с помощью олеиновой кислоты [1] 0,660,910,53 28000034,6
Получен с помощью олеата натрия 0,700,910,52 32500021,2
* содержание КРФ определяли по методу [2]

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3-5 мин в водном растворе олеата натрия, с концентрацией олеата натрия 16,1 г/л, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, центрифугирование охлажденного до комнатной температуры лизата при 3000 g в течение 10 мин, доведение объема дрожжевого экстракта до стандарта дистиллированной водой с последующим выделением из него высокополимерной РНК, добавлением его в мазь или разливом в виалы по 2-4 мл с дальнейшим замораживанием и лиофилизацией.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2522900

patent-2522900.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K36/06 грибы, например дрожжи

Класс C12N1/18 хлебопекарные дрожжи; пивные дрожжи

Патенты РФ в классе C12N1/18:
способ культивирования хлебопекарных дрожжей -  патент 2528872 (20.09.2014)
стабильные пробиотические гранулы и способ их получения -  патент 2523199 (20.07.2014)
способ получения глюкан-хитозанового комплекса из дрожжевой биомассы отходов пивоваренного производства -  патент 2499836 (27.11.2013)
способ активации дрожжей -  патент 2492230 (10.09.2013)
дрожжи saccharomyces cerevisiae, используемые в качестве пробиотика, и композиция на их основе -  патент 2490324 (20.08.2013)
способ получения стимулятора роста дрожжей saccharomyces cerevisiae -  патент 2483105 (27.05.2013)
экспрессия множества генов, включая sorf-конструкции, и способы экспрессирования иммуноглобулина -  патент 2478709 (10.04.2013)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae, обладающий амилазной активностью для получения кормового белкового продукта, и способ производства кормового белкового продукта -  патент 2478701 (10.04.2013)
композиция для приготовления пищевого продукта с применением дрожжей -  патент 2473678 (27.01.2013)
способ получения обогащенных селеном хлебопекарных прессованных дрожжей -  патент 2466184 (10.11.2012)

Класс C12N15/10 способы выделения, получения или очистки ДНК или РНК

Патенты РФ в классе C12N15/10:
дисплей на поверхности клеток полипептидных изоформ на основе прочитывания терминирующего кодона -  патент 2528858 (20.09.2014)
способ получения препаративных количеств антигенов флоэмно-ограниченных вирусов -  патент 2525136 (10.08.2014)
одноцепочечная кольцевая рнк и способ ее получения -  патент 2523596 (20.07.2014)
способ определения уровня транскрипции гена, кодирующего хемокин ccl2 (мср-1) человека и набор для его осуществления -  патент 2522801 (20.07.2014)
способ идентификации улучшенных вариантов белка -  патент 2520808 (27.06.2014)
элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах -  патент 2518340 (10.06.2014)
способ мультиплексной детекции представителей родов aeromonas и flavobacterium -  патент 2514668 (27.04.2014)
способ стабилизации транскрипции хлоропластных генов рапса в условиях хлоридного засоления -  патент 2514641 (27.04.2014)
способ получения неприродных искусственных олигонуклеотидов, потенциально способных образовывать несовершенные g-квадруплексы -  патент 2509802 (20.03.2014)
профилактическая вакцина против вич, основанная на вич-специфических антителах -  патент 2505604 (27.01.2014)

Класс C12P19/34 полинуклеотиды, например нуклеиновые кислоты, олигорибонуклеотиды

Патенты РФ в классе C12P19/34:
способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces cerevisiae -  патент 2510854 (10.04.2014)
способ диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя и диагностический набор -  патент 2506316 (10.02.2014)
способ получения днк из молок лососевых рыб -  патент 2488634 (27.07.2013)
устройство и способ управления температурой реакционной смеси -  патент 2487944 (20.07.2013)
способ получения и экспрессии кодирующей последовательности изоформы 2 гена реналазы человека -  патент 2482185 (20.05.2013)
синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления lactobacillus acidophilus в заквасочных культурах, используемых при производстве кисломолочных продуктов -  патент 2481402 (10.05.2013)
улавливание и характеристика совместно локализованного хроматина -  патент 2478716 (10.04.2013)
олигонуклеотидные праймеры bmvat5-ch2s/bmvat5-ch2as для обнаружения фрагмента дифференциации вмаа0107 штаммов возбудителя сапа -  патент 2474620 (10.02.2013)
биологически активное соединение, содержащее кодирующий олигонуклеотид (варианты), способ его синтеза, библиотека соединений (варианты), способ ее синтеза и способ поиска соединения, связывающегося с биологической мишенью (варианты) -  патент 2470077 (20.12.2012)
способ гомогенной детекции по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации -  патент 2460804 (10.09.2012)


Наверх