ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы

Классы МПК:A61K35/76 вирусы
C12N7/00 Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их
A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):, , , , , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-09-09
публикация патента:

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата, интраназальное заражение их штаммом вируса натуральной оспы, инкубацию вируса в организме животных и определение концентрации вируса в легких животных с последующим вычислением оценочных показателей снижения концентрации вируса в легких. Препарат вводят в организм животных за сутки до заражения, в день заражения и ежедневно в течение времени инкубации вируса. В качестве модели животных используют аутбредных разнополых белых мышей ICR массой 7-9 г. В качестве штамма вируса натуральной оспы способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов   против вируса натуральной оспы, патент № 2522483 штамм Индия-3а, депонированный в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального бюджетного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером V-45. Техническим результатом предлагаемого изобретения является адекватное воспроизведение заболевания натуральной оспы человека с использованием высоковирулентного штамма вируса натуральной оспы и модели животных. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу определения противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов с использованием штамма вируса натуральной оспы и может быть использовано в медицинской вирусологии и микробиологии.

Для оценки эффективности противооспенных лечебных и профилактических препаратов необходимо получение данных о защитных свойствах препаратов при использовании лабораторных животных. При этом необходимо, чтобы течение заболевания, вызванного ВНО, было как можно более близко сходно с клинической картиной оспы у человека. В настоящее время животные, адекватно воспроизводящие заболевание натуральной оспой у человека, не найдены. Опубликованные данные о характере заболевания у животных при заражении вирусом натуральной оспы (ВНО) разрознены, неоднозначны и не дают оснований для заключения о возможности воспроизведения заболевания натуральной оспой у животных в эксперименте и, соответственно, о возможности разработки адекватной модели для изучения эффективности вакцин и лекарственных препаратов против ВНО.

Известна модель (аналог) культур клеток, чувствительных к ВНО, - первичные и перевиваемые клеточные культуры различного происхождения: полученные от человека (фибробласты эмбриона человека, почки, амниотическая ткань), обезьяны, свиньи и др., которые используются для оценки эффективности лечебных и профилактических препаратов против натуральной оспы (http://medicedu.ru/infection/284-naturalnaya-ospa.html7showalHl=1).

Однако культуры клеток имеют ряд ограничений. Для испытания лечебных препаратов эти ограничения обусловлены чрезмерным упрощением весьма сложных биологических систем, сложностью стандартизации культуральной среды, а в случае использования первичных клеток из органов-мишеней - продолжительностью жизни и степенью дифференциации клеток, что приводит к потере физиологических свойств и возникновению непредвиденных феноменов. Кроме этого при использовании культуры клеток не учитывается влияние клеточной регуляции. Важно заметить, что соединения, отклоненные на основе результатов, полученных в опытах in vitro, могут быть эффективными при испытаниях in vivo, и таким образом, при использовании культуры клеток можно получить как ложноположительный результат (препарат показывает положительный эффект на культуре клеток, но не обладает противооспенной активностью при лечении человека), так и ложноотрицательный (препарат не обладает активностью на культуре клеток, но успешно излечивает человека). Вакцинные препараты не могут быть адекватно оценены на культуре клеток, т.к. их основная задача - формирование иммунного ответа организма.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ оценки эффективности лекарств и вакцин, в которых в качестве модели животных для изучения натуральной оспы являются макаки-циномольгусы (Масаса fascicularis), которые используются для оценки эффективности лекарств и вакцин (Jahrling Р.В., Hensley L.E., Martinez M.J., Leduc J.W., Rubins K.H., Relman D.A., Huggins J.W. Exploring the potential of variola virus infection of cynomolgus macaques as a model for human smallpox//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, 101(42):15196-200).

Однако у обезьян заболевание с летальным исходом вызывает введение ВНО в дозе, превышающей 108 БОЕ/животное, и, таким образом, доза для человека, которая приводит к развитию заболевания, превышена более чем в 107 раз. Кроме этого вирус обезьянам вводится внутривенно, и, таким образом, он попадает в клетки-мишени, находящиеся в легких, через кровь, а не через органы дыхания. Следует учесть и тот факт, что обезьяны - модель сложная, опасная с точки зрения биобезопасности и дорогостоящая: работы с обезьянами требуют специальной подготовки и наличия навыков обращения с ними, биоэтические нормы обращения с животными более строгие, и работы с этим видом животных разрешены не во всех лабораториях. Все это в совокупности не позволяет считать обезьян полностью адекватной моделью натуральной оспы, удобной и безопасной для изучения эффективности лечебных и профилактических препаратов.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание способа оценки активности лечебно-профилактических препаратов против натуральной оспы с использованием высоковирулентного штамма вируса натуральной оспы и модели животных, позволяющих более адекватно оценить указанную противовирусную активность.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы, включающем введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата, интраназальное заражение их штаммом вируса натуральной оспы, инкубацию вируса в организме животных и определение концентрации вируса в легких животных с последующим вычислением оценочных показателей снижения концентрации вируса в легких, по величине которых судят о противовирусной активности препарата, причем для оценки лечебно-профилактического действия исследуемого препарата его вводят в организм животных за сутки до заражения, в день заражения и ежедневно в течение времени инкубации вируса, отличающемся тем, что в качестве модели животных используют аутбредных разнополых белых мышей ICR массой 7-9 г, в качестве штамма вируса натуральной оспы - штамм Индия-3a (Ind-3a), депонированный в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального бюджетного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером V-45.

При проведении экспериментов по изучению специфической активности противовирусных (противооспенных) препаратов и эффективности вакцин в экспериментах in vivo на модели аутбредных разнополых белых мышей ICR (массой 7-9 г), интраназально зараженных штаммом Ind-3a ВНО, эффективность препаратов может быть оценена по нескольким показателям:

- определяют индекс резистентности (ИР), суть которого заключается в отношении показателей ИД50 для опытных (вакцинированных или леченных) и контрольных животных по формуле: ИР=ИД50(опыт) / ИД 50(контроль);

- определяют процент защиты от инфицирования (ПЗИ), который вычисляли по формуле: ПЗИ = % не инфицированных животных в опыте - % не инфицированных животных в контроле;

- определяют индекс подавления накопления вируса (ИПНВ) в легких, который вычисляли по формуле: ИПНВ = количество вируса в легких контрольной группы животных / количество вируса в легких опытной группы животных.

Для суждения о значимости вычисляемых показателей (ИР, ИПНВ, ПЗИ) на 5% уровне надежности предварительно проводят статистическое сравнение данных, полученных в ходе экспериментов, с использованием следующих статистических методов:

- показатели ИД50 для контроля и опыта сравнивали при использовании метода Спирмена Кербера (Закс Л. Статистическое оценивание. М.: Статистика, 1976. - 598 с.);

- показатели долей инфицированных животных в контрольной и опытной группах сравнивали с использованием точного теста Фишера и способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов   против вируса натуральной оспы, патент № 2522483 2 критерия (Закс Л. Статистическое оценивание. М: Статистика, 1976. - 598 с.);

- сравнение уровней накопления вируса в легких у интраназально инфицированных мышей проводили при использовании непараметрического метода Манна Уитни (Закс Л. Статистическое оценивание. М.: Статистика, 1976. - 598 с.).

Характеристика заявляемого штамма. Штамм Ind-3a ВНО выделен от человека в 1967 году. Штамм прошел 2 пассажа на хорио-алантоисной оболочке развивающихся куриных эмбрионов (ХАО РКЭ) и депонирован в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ГНЦ ВБ «Вектор», номер штамма B12.

Подлинность штамма. Подлинность штамма была подтверждена ПЦР и секвенированием. Эпидемиологический тип штамм - variola major.

Культуральные свойства. Штамм Ind-3a ВНО при культивировании на монослое клеток Vero вызывает цитопатическое действие (ЦПД) на 2-4 сут (температура культивирования 37°C, в атмосфере 5% CO2). Максимальные титры вируса регистрировали на 4-6 сутки после заражения монослоя клеток Vero, их величина составляла 8,0×106 БОЕ/мл.

Патогенность для человека. Вирус натуральной оспы относится к 1 группе патогенности по классификации МЗ РФ, летальность для человека при классической или большой оспе (variola major) составляет от 5 до 40%, а при малой оспе (variola minor) - 0,1-2%.

Для длительного хранения штамм лиофилизируют с использованием в качестве защитной среды раствора желатина и сахарозы (САЖ). Лиофилизация с добавлением САЖ в соотношении 1:4 позволяет сохранить стабильную инфекционную активность вируса в течение 5-10 и более лет при температуре хранения -70°C.

Для размножения штамма используют следующие питательные среды: Игла МЭМ, Игла МЭМ × 2АВК, среда 199, ДМЭМ, содержащие 2 мкг/мл трипсина, 2 ммоль/л глютамина, 100 мкг/мл пенициллина и 100 МЕ/мл стрептомицина.

Пример 1. Определение 50% инфицирующей дозы, динамики накопления вируса в легких и концентрации ВНО (штамм Ind-3a) в органах и тканях аутбредных мышей ICR

Одним из наиболее достоверных показателей инфицирования животных является размножение вируса в клетках органов-мишеней. Размножение ВНО в легких интраназально инфицированных мышей было подтверждено электронно-микроскопическими исследованиями и титрованием на культуре клеток Vero.

Интраназальное инфицирование животных проводили с применением седативных средств. Животному, фиксированному на доске, прикладывали к носу кусочек ваты, смоченной эфиром или хлороформом. К заражению приступали после того, как у животного появится состояние легкого наркоза. Материал вводили с помощью шприца или автоматической пипетки в нос небольшими каплями на глубину 1,0-1,5 мм. Чтобы не поранить слизистые оболочки животного, для введения материала с использованием шприца брали затупленную иглу с закругленным концом. Общий объем вводимого материала - 30-50 мкл.

Животных содержали на стандартном рационе с достаточным количеством воды согласно ветеринарному законодательству и в соответствии с требованиями по гуманному содержанию и использованию животных в экспериментальных исследованиях (Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных. Перевод с английского. Washington, D.C.: National Akademy Press; 1996. 138 р.).

Для определения показателя ИД 50 была изучена динамика накопления вируса в легких у интраназально инфицированных мышей, зараженных дозами вируса от 1,18 до 5,18 lg БОЕ/гол. С этой целью 5 групп беспородных разнополых белых мышей аутбредной популяции ICR (массой 7-9 г) по 6 голов интраназально инфицировали пятью разными дозами BOO (штамм Ind-3a) с десятикратным шагом разведений. В результате 1 ИД50 составила 2,68 lg БОЕ при стандартном отклонении (Sm), равном 0,30.

После этого в прямых экспериментах по и/н заражению аутбредных мышей популяции ICR была изучена динамика накопления вируса в целевом органе-мишени - легком. Для этого 18 беспородных аутбредных мышей популяции ICR (массой 7-9 г) интраназально инфицировали дозой 4,2 lg БОЕ/гол вируса натуральной оспы (штамм Ind-3a). На 1, 2, 3, 4, 5 и 7-е сут после заражения (п/з) животных умерщвляли с соблюдением требований ветеринарного законодательства, забирали легкие, готовили 10%-ный гомогенат, который титровали на монослое культуры клеток Vero, беря на точку по 3 животных. Средние показатели титров вируса в легких на 1-е сут п/з составили 2,47 lg БОЕ/мл, на 2-е сут - 4,10 lg БОЕ/мл, на 3-й сут - 4,10 lg БОЕ/мл, на 4-е сут - 3,80 lg БОЕ/мл, на 5-е сут - 2,80 lg БОЕ/мл, на 7-е сут - 0,6 lg БОЕ/мл. В результате этого исследования было определено, что максимальное накопление вируса в легком у мыши происходит через 2-3 суток п/з (4,1 lg БОЕ/мл).

В следующей серии экспериментов была изучена динамика накопления ВНО в органах и тканях беспородных разнополых белых мышей аутбредной популяции ICR (массой 7-9 г), интраназально инфицированных ВНО (штамм Ind-3a). Для этого мышей инфицировали дозой вируса 4,2 lg БОЕ/гол. Через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 10 сут п/з животных умерщвляли с соблюдением требований ветеринарного законодательства, забирали органы, готовили 10%-ный гомогенат, который титровали на монослое культуры клеток Vero, беря на точку по 3 животных. В крови, почках, 12-перстной кишке, пищеводе, печени, селезенке, трахеи вирус не был обнаружен ни на один из исследуемых дней п/з. В головном мозге вирус появлялся только на 3-и сут п/з и регистрировался в концентрации 1,3 lg БОЕ/мл. В носовой перегородке мыши вирус появлялся только на 2-е и 3-и сут п/з и регистрировался в концентрации 4,8 и 3,9 lg БОЕ/мл соответственно. Титрование гомогенатов легкого подтвердило данные предыдущего эксперимента: вирус определялся на 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7-е сут п/з, максимальной концентрации в легком (4,9 lg БОЕ/мл) вирус достигал на 3-и сутки. В результате этого исследования было определено, что ВНО не размножается в большинстве органов и тканей мыши, но эффективно размножается в носовой перегородке и легком животного, и в меньшей степени - в головном мозге.

Эти данные были подтверждены электронно-микроскопическим исследованием органов и тканей зараженных мышей. В трахее и бронхах мышей через 5 суток п/з появились деструктивные изменения реснитчатых эпителиоцитов. В эпителии воздухоносных путей отмечаются некрозы. Ткани респираторных органов инфильтрованы воспалительно-клеточными элементами, в цитоплазме макрофагов содержится многочисленные секреторные гранулы. Зарегистрированы морфологические признаки репродукции ВНО в клетках эпителиальной выстилки трахеи и бронхов. В целом, экспериментальные данные патоморфологических исследований соответствуют изменениям, описанным другими авторами при и/н инфицировании ортопоксвирусами.

Таким образом, сходство первичных органов-мишеней и входящих в их состав клеток для ВНО у человека и мыши популяции ICR, а также способность штамма Ind-3a ВНО эффективно размножаться (так же как и у человека) в легких и носовой перегородке мышей популяции ICR позволяет использовать этих животных в качестве модельных животных для изучения эффективности лечебных и профилактических препаратов против оспы обезьян и натуральной оспы.

Пример 2. Использование мышей популяции ICR для оценки эффективности лечебно-профилактического действия противооспенных препаратов в экспериментах in vivo

Беспородных разнополых белых аутбредных мышей ICR (массой 7-9 г) использовали как модель натуральной оспы для оценки эффективности лечебно-профилактического действия препаратов (НИОХ-14, ST-246) по накоплению ВНО в легких через 3 суток п/з, используя для интраназального инфицирования этих животных 30 ИД50 штамма Ind-3a вируса в объеме 30 мкл на голову (4,2 lg БОЕ/животное).

Препараты НИОХ-14 и ST-246 являются химическими синтезированными производными пирролидин-2,5-диона и были, исходя из данных предыдущих экспериментов на суррогатных моделях оспы по оценке эффективной дозы, использованы перорально в лечебно-профилактической схеме: препараты вводили однократно в дозе 60 мкг/г массы тела мыши за сутки до заражения, в день заражения и в течение 2 суток после заражения. Результаты этих исследований представлены в таблице.

Таблица
Результаты изучения лечебно-профилактической активности препаратов по подавлению накопления ВНО в легких мышей через 3 суток после интраназального инфицирования дозой вируса 4,2 lg БОЕ/гол. (30 ИД50/гол.)
Номер животного в группеКонцентрация ВНО в легких инфицированных мышей (lg БОЕ/легкие) при введении препаратов (доза)
НИОХ-14 (60 мкг/г)ST-246 (60 мкг/г) Контрольспособ оценки активности лечебно-профилактических препаратов   против вируса натуральной оспы, патент № 2522483
1 <0,702,904,50
22,10 <0,703,50
3<0,70<0,70 2,30
4 2,902,302,50
52,60 <0,704,80
6<0,70<0,70 2,50
7 <0,702,304,40
Средняя концентрация вируса в легких, lg БОЕ/легкие, (M±Sm)2,50±0,20 (n=3)*2,50±0,10(n=3)* 3,50±0,20(n=7)
Количество и процент(%) инфицированных мышей3(43%)# 3(43%)#7 (100%)

Примечание: способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов   против вируса натуральной оспы, патент № 2522483 - мышам контрольной группы перорально вводили раствор метилцеллюлозы с твином-80, который использовали для растворения препаратов НИОХ-14 и ST-246; - в случаях, когда в гомогенатах легких инфицированных мышей вирус ВНО не выявлялся из-за существующего порога чувствительности метода титрования, использовали значение минимального количества вируса, выявляемого при использованном нами методе титрования (0,70 lg БОЕ/легкое); # - достоверное отличие от контроля (точный тест Фишера p одностороннее <0,05); * - достоверное отличие от контроля по U-критерию Манна Уитни (p<0,05); M - среднее, SM - стандартное отклонение; n - число животных в выборке.

По данным, приведенным в таблице, видно, что концентрация вируса в легких мышей при введении препаратов ST-246, НИОХ-14 достоверно ниже, чем в контроле. Кроме того, у 4 из 7 животных (57%) вирус в легких не обнаруживался. Из этого факта можно сделать заключение, что у более чем 50% животных при использовании препаратов НИОХ-14 и ST-246 размножение вируса в легких, которое может привести к развитию заболевания, не происходит. Было также установлено, что противовирусная активность препарата НИОХ-14 достоверно не отличается от таковой для препарата ST-246 по показателю снижения накопление вируса в легких от контроля.

Таким образом, в рамках полученных результатов было показано, что интраназально зараженные штаммом Ind-3a ВНО аутбредные разнополые белые мыши ICR (массой 7-9 г) могут быть успешно использованы в качестве модельных животных для изучения активности противовирусных препаратов против натуральной оспы по показателям снижения концентрации вируса в легких.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы, включающий введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата, интраназальное заражение их штаммом вируса натуральной оспы, инкубацию вируса в организме животных и определение концентрации вируса в легких животных с последующим вычислением оценочных показателей снижения концентрации вируса в легких, по величине которых судят о противовирусной активности препарата, причем для оценки лечебно-профилактического действия исследуемого препарата его вводят в организм животных за сутки до заражения, в день заражения и ежедневно в течение времени инкубации вируса, отличающийся тем, что в качестве модели животных используют аутбредных разнополых белых мышей ICR массой 7-9 г, а в качестве штамма вируса натуральной оспы - штамм Индия-3а, депонированный в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального бюджетного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером V-45.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2522483

patent-2522483.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K35/76 вирусы

Патенты РФ в классе A61K35/76:
кодон-оптимизированная кднк, кодирующая дисферлин человека, генно-инженерная конструкция, рекомбинантный аденовирус и фармацевтическая композиция для лечения дисферлинопатий -  патент 2527073 (27.08.2014)
способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов -  патент 2526504 (20.08.2014)
способ получения бактериофага -  патент 2525141 (10.08.2014)
аденовирусные векторы и способы и применения, связанные с ними -  патент 2520823 (27.06.2014)
штамм вируса иммунодефицита человека 1-го типа ив735 субтипа в для диагностических и вакцинных препаратов -  патент 2520813 (27.06.2014)
композиция антибактериальная, штамм бактериофага escherichia coli, используемый для получения такой композиции. -  патент 2518303 (10.06.2014)
штамм вируса иммунодефицита человека 1-го типа ив742 субтипа а для диагностических и вакцинных препаратов -  патент 2513693 (20.04.2014)
штамм вируса иммунодефицита человека 1-го типа ив710 субтипа а резистентный к антиретровирусным препаратам для диагностических и вакцинных препаратов -  патент 2513692 (20.04.2014)
способ лечения обострений хронического ларингита -  патент 2510757 (10.04.2014)
видоспецифический вирулентный штамм бактериофага, обладающий литической активностью в отношении staphylococcus aureus, включая мультирезистентные штаммы -  патент 2503716 (10.01.2014)

Класс C12N7/00 Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их

Патенты РФ в классе C12N7/00:
холодоадаптированный штамм вируса гриппа в-в/виктория/2/63/87, предназначенный в качестве штамма-донора аттенуации для получения реассортантов холодоадаптированных штаммов для живой гриппозной вакцины -  патент 2529772 (27.09.2014)
штамм "г 244/11" вируса блютанга 14 серотипа для вирусологических исследований, изготовления вакцинных и диагностических препаратов -  патент 2528057 (10.09.2014)
флавивирус с двухкомпонентным геномом и его использование -  патент 2527891 (10.09.2014)
поликатионное соединение "тривирон (triviron)" и способ его получения -  патент 2527256 (27.08.2014)
аттенуированный рекомбинантный парвовирус, пригодный для защиты собак от инфицирования парвовирусом -  патент 2527157 (27.08.2014)
кодон-оптимизированная кднк, кодирующая дисферлин человека, генно-инженерная конструкция, рекомбинантный аденовирус и фармацевтическая композиция для лечения дисферлинопатий -  патент 2527073 (27.08.2014)
вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная -  патент 2526570 (27.08.2014)
способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов -  патент 2526504 (20.08.2014)
способ удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины -  патент 2526494 (20.08.2014)
набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченого зонда для видоспецифичной экспресс-идентификации рнк вируса хунин методом полимеразной цепной реакции в реальном времени -  патент 2525938 (20.08.2014)

Класс A61P31/12 противовирусные средства

Патенты РФ в классе A61P31/12:
способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с) -  патент 2526799 (27.08.2014)
средство для снижения репродукции вируса гепатита с -  патент 2526179 (20.08.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
пептидные производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусное действие -  патент 2524216 (27.07.2014)
способ получения противовирусного средства и противовирусное средство -  патент 2522880 (20.07.2014)
способ изготовления вакцины против ящура -  патент 2522868 (20.07.2014)
способ получения антирабической вакцины -  патент 2522866 (20.07.2014)


Наверх